22.1.1. Định tính Alkoloid.
Chuẩn bị dịch chiết
Cho lg bột rễ Ngưu Tất vào bình nón dung tích 50ml, thêm 20ml dung dịch H2S04.2%, lắc đềụ Đun trên nồi cách thuỷ trong 5 phút. Để nguội, lọc vào bình gạn. Kiềm hoá dịch lọc bằng dung dịch amoniac.ổN đến pH kiềm (thử bằng chỉ thị màu vạn năng), chiết alkaloid dưới dạng base bằng CHC13 (3 lần X 5ml). Chuyển alkaloid sang dạng muối sulfat bằng cách lắc vài lần với dung dịch H2S04.2%, gộp dịch chiết, cô còn 5ml để làm các phản ứng định tính với 1 số thuốc thử chung của alkaloid.
* Phản ứng với thuốc thử Maver:
Cho 1 ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm 2 giọt thuốc thử Mayer, không thấy tủa đục. Phản ứng âm tính.
* Phản ứng với thuốc thử Bouchardat:
Cho 1 ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm 2 giọt thuốc thử Bouchardat, lắc nhẹ, không thấy xuất hiện tủa nâụ Phản ứng âm tính.
* Phản ứng thuốc thử Dragendorff:
Cho 1 ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm 2 giọt thuốc thử Dragendorff, lắc nhẹ, không thấy xuất hiện tủa da cam. Phản ứng âm tính.
Thí nghiệm được tiến hành song song với 3 mẫu thử và lặp lại 3 lần đều cho kết quả trên.
Sơ bộ kết luận: Dịch chiết rễ Ngưu tất không có Alkaloid.
2.2.7.2. Định tính Acid amin:
Cho vào ống nghiệm lg bột dược liệu, thêm 5 ml nước cất, đun trong 5 phút. Lọc nóng cho thêm 2- 3 giọt thuốc thử Ninhydrin.0,2%, đun cách thuỷ 5-10 phút. Thấy xuất hiện màu xanh tím. Phản ứng dương tính.
Thí nghiệm được tiến hành song song với 3 mẫu thử lặp lại 3 lần đều cho kết quả trên.
Sơ bộ kết luận: Dịch chiết rễ Ngưu tất có Acid amin.
2.2.7.3. Định tính Glycosid tim và chất béo:
Chuẩn bị dịch chiết:
Cho khoảng 10,Og bột dược liệu vào bình nón dung tích 250ml, thêm 100ml nước ngâm trong 24h. Gạn dịch chiết vào cốc có mỏ dung tích 100ml. Loại tạp bằng dung dịch chì acetat 30% đến khi không còn tủạ Lọc loại tủa, cho dịch lọc vào bình gạn dung tích 100ml. Chiết glycosid tim bằng cloroform (31ần: 10ml, 10ml, 5ml). Gộp dịch chiết cloroform, loại nước, chia vào 5 ống nghiệm khô để làm phản ứng.
ạ Định tính Glycosỉd tim
Bốc hơi 4 ống nghiệm trên nồi cách thuỷ đến khô, cắn để làm các làm phản ứng định tính Glycosid tim:
* Phản ứng Liebermann- Burchard:
Cắn được hoà tan trong lml anhydrid acetic, sau đó thêm H2S04 đặc theo thành ống nghiệm, không thấy màu đỏ nâu ở mặt ngăn cách giữa hai lớp chất lỏng. Phản ứng âm tính.
Thí nghiệm được tiến hành song song với 3 mẫu thử và lặp lại 3 lần đều cho kết quả trên.
* Phản ứng Legal:
Cắn hoà tan trong lml ethanol 90°, thêm 2 giọt thuốc thử Natrinitroprusiat 0,5% và 2 giọt dung dịch NaOH 10%. Không thấy xuất hiện màu đỏ. Phản ứng âm tính.
Thí nghiêm được tiến hành song song với 3 mẫu thử và lặp lại 3 lần đều cho kết quả trên.
* Phản ứng Baliet:
Cắn hoà tan trong lml Ethanol 90°, thêm 2 giọt thuốc thử Baljet mới pha (1 phần dung dịch acid picric 1% và 9 phần dung dịch NaOH.10% ). Không thấy xuất hiện màu đỏ da cam. Phản ứng âm tính.
Thí nghiệm được tiến hành song song với 3 mẫu thử và lặp lại 3 lần đều cho kết quả trên.
* Phản ứng Keller-Kiliani:
Cắn hoà tan trong lml ethanol 90° , thêm 2 giọt dung dịch FeCl3 5% trong acid acetic. Nghiêng ống nghiệm và cho từ từ H2S04 đặc theo thành ống nghiệm. Không thấy xuất hiện vòng tím đỏ giữa hai lớp chất lỏng. Phản ứng âm tính. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Thí nghiệm được tiến hành song song với 3 mẫu thử và lặp lại 3 lần đều cho kết quả trên.
b. Định tính chất béọ
Nhỏ vài giọt dịch chiết Cloroform lên tờ giấy lọc, hơ khô.Quan sát thấy có vết mờ trên giấy lọc.Phản ứng dương tính.
Thí nghiệm được tiến hành song song với 3 mẫu thử và lặp lại 3 lần đều cho kết quả trên.
Sơ bộ kết luận: Trong dịch chiết rễ Ngưu tất có chất béọ
2.2.7.4. Định tính Coumarin và Flavonoid.
Chuẩn bị dịch chiết:
Cho khoảng 2g bột dược liệu vào bình nón dung tích 50ml, thêm 10ml ethanol 90°, khuấy đềụ Đun trong nồi cách thuỷ khoảng 5 phút. Lọc nóng qua giấy lọc. Dịch chiết thu được để làm các phản ứng định tính:
ạ Định tính Coumarin
* Phản ứng với thuốc thử Diazo:
Cho vào ống nghiệm lml dịch chiết, thêm vào đó 2ml dung dịch NaOH. 10%. Đun cách thuỷ đến sôi rồi để nguộị Thêm vài giọt thuốc thử Diazo, thấy vẩn đục, dung dịch có màu nâu đỏ. Phản ứng âm tính.
Thí nghiệm được tiến hành song song với 3 mẫu thử và lặp lại 3 lần đều cho kết quả trên.
* Phản ứng mở và đổng vòng lacton:
Cho vào hai ống nghiệm, mỗi ống lml dịch chiết. Ống 1: Thêm 0,5ml dung dịch NaOH 10% Ống 2: Để nguyên.
Ậ,
Đun cách thuỷ cả hai ống n^iệm trong vài phút, thấy: Ống 1 : Có vẩn đục, dung dịch có màu nâu đỏ. Ống 2: Trong suốt.
Thêm vào mỗi ống nghiệm lml nước cất, lắc nhẹ, thấy: Ống 1: Có vẩn đục, dung dịch có màu nâu đỏ. Ống 2: Trong suốt.
Acid hoá ống 1 bằng vài giọt HC1 đặc, ống 1 tủa nâu đỏ lắng xuống, phần dung dịch có màu vàng đỏ. Phản ứng âm tính.
Thí nghiệm được tiến hành song song với 3 mẫu thử và lặp lại 3 lần đều cho kết quả trên.
* Vi thăng hoa:
Đặt 1 ít bột dược liệu trong một nắp nhôm. Hơ nhẹ trên đèn cồn cho đến khi bay hơi hết nước trong dược liệụ Đặt lên miệng nắp nhôm một phiến kính, trên phiến kính có để một miếng bông tẩm nước lạnh. Để nắp nhôm trực tiếp trên nguồn nhiệt. Sau 5-10 phút, lấy tấm kính ra, để nguộị Nhỏ một giọt dung dịch KI 10% lên phiến kính. Quan sát trên kính hiển vi không thấy có tinh thể hình kim. Phản ứng âm tính.
Thí nghiệm được tiến hành song song với 3 mẫu thử và lặp lại 3 lần đều cho kết quả trên.
Sơ bộ kết luận: Trong dịch chiết rễ Ngưu tất không có Coumarin.
b. Định tính Flavonoid
* Phản ứng Cvanidin:
Cho vào ống nghiệm lml dịch chiết, thêm một ít bột Mg kim loại (khoảng lOmg). Nhỏ từng giọt HC1 đậm đặc (3-5 giọt). Để yên vài phút, thấy dung dịch không chuyển màụ Phản ứng âm tính.
Thí nghiệm được tiến hành song song với 3 mẫu thử và lặp lại 3 lần đều cho kết quả trên.
* Phản ứng với kiềm:
- Cho vào ống nghiệm lml dịch chiết, thêm vài giọt dung dịch NaOH 10%. Không thấy xuất hiện tủạ Phản ứng âm tính.
Thí nghiệm được tiến hành song song với 3 mẫu thử và lặp lại 3 lần đều cho kết quả trên. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
- Nhỏ một giọt dịch chiết lên giấy lọc. Hơ khô rồi để lên miệng lọ amoniac đặc đã được mở nút, không thấy màu vàng tăng lên. Phản ứng âm tính.
Thí nghiệm được tiến hành song song với 3 mẫu thử và lặp lại 3 lần đều cho kết quả trên.
* Phản ứng với FeCl? 5%:
Cho vào ống nghiệm lml dịch chiết, thêm vài giọt dung dịch FeCl3 5%, không thấy xuất hiện tủạ Phản ứng âm tính.
Thí nghiệm được tiến hành song song với 3 mẫu thử và lặp lại 3 lần đều cho kết quả trên.
Sơ bộ kết luận: Trong dịch chiết rễ Ngưu tất không có Flavonoid.
2.2.1.s. Định tính Tanin:
Chuẩn bị dịch chiết
Cho khoảng lg bột rễ Ngưu tất vào bình nón dung tích 50ml.Thêm 10ml nước cất. Đun sôi trong 1 phút. Lọc. Dịch lọc thu được để làm phản ứng định tính:
* Phản ứng với FeClz 5%:
- Cho lml dịch lọc vào ống nghiệm, thêm 1 giọt dung dịch FeCl3 5%
không thấý xuất hiện tủạ Phản ứng âm tính.
Thí nghiệm được tiến hành song song với 3 mẫu thử và lặp lại 3 lần đều cho kết quả trên.
* Phản ứng với dung dich gelatin 1%:
- Cho lml dịch lọc vào ống nghiệm, thêm lml dung dịch gelatin 1%, không thấy xuất hiện tủa bông. Phản ứng âm tính.
Thí nghiệm được tiến hành song song với 3 mẫu thử và lặp lại 3 lần đều cho kết quả trên.
2.2.1.6. Định tính Anthranoid:
* Phản ứng Bc&traeger:
Cho lOg bột dược liệu vào bình nón dung tích 250ml, thêm lOOml acid H2S04 10%. Đun cách thuỷ 15 phút, lọc, chuyển dịch lọc vào bình gạn, lắc với 10ml CHC13 để phân thành 2 lớp. Gạn lấy dịch chiết CHCI3, cho vào dịch chiết
CHCI3 2ml NaOH 10%, lắc đều, thấy lớp nước không có màu đỏ sim. Phản ứng âm tính.
Thí nghiệm được tiến hành song song với 3 mẫu thử và lặp lại 3 lần đều cho kết quả trên.
* Vi hăng hoa:
Đặt 1 ít bột dược liệu trong 1 nắp nhôm. Hơ nhẹ trên đèn cồn cho đến khi bay hợi hết nước trong dược liệụ Đặt lên miệng nắp nhôm 1 phiến kính, trên phiến kính có để 1 miếng bông tẩm nước lạnh. Để nắp nhôm trực tiếp trên nguồn nhiệt Sau 5- 10 phút lấy phiến kính ra, để nguộị Quan sát trên kính hiển vi không thấy có các tinh thể hinh kim. Phản ứng âm tính.
Thí nghiệm được tiến hành song song với 3 mẫu thử và lặp lại 3 lần đều cho kết quả trên.
Sơ bộ kết luận: Trong dịch chiết rễ Ngưu tất không có Anthranoid.
22.1.1. Định tính Acid hữu cơ và đường khử tự dọ
Chuẩn bị dịch chiết
Cho vào ống nghiệm to: 2g bột dược liệu, thêm 10ml nước cất đun sôi 5 phút, lọc nóng, dịch lọc thu được để làm các phản ứng định tính sau:
ạ Định tính Acid hữu cơ
Lấy 3ml dịch lọc vào ống nghiệm nhỏ, thêm vài tinh thể Na2C 03, thấy có bọt khí bay lên. Phản ứng dương tính. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Thí nghiệm được tiến hành song song với 3 mẫu thử và lặp lại 3 lần đều cho kết quả trên.
b. Định tính đường khử tự do
Cho vào ống nghiệm khoảng 2 ml dịch chiết nước dược liệu, thêm 0,5ml thuốc thử Fehling A và 0,5ml thuốc thử Fehling B. Đun sôi cách thuỷ vài phút, thấy xuất hiện màu đỏ gạch. Phản ứng dương tính.
Thí nghiệm được tiến hành song song với 3 mẫu thử và lặp lại 3 lần đều cho kết quả trên.
Sơ bộ kết luận: Trong dịch chiết rễ Ngưu tất có đường khử tự dọ
2.2.7.8. Định tính Saponin:
Cho khoảng lOg bột dược liệu vào bình nón dung tích 100ml, thêm 20ml ethanol 90°. Ngâm lạnh qua đêm, lọc. Dịch chiết này dùng để làm phản ứng định tính Saponin:
* Phản ứng tao bot:
Trong ống nghiệm to chứa sẵn 10ml nước cất, thêm 2 ml dịch chiết cồn. Lắc mạnh dọc theo thành ống nghiệm trong 1 phút. Quan sát thấy cột bột cao hơn 2cm và bền sau 15 phút. Phản ứng dương tính.
Bảng 5: Kết quả phản ứng tạo bọt
Số mẫu Độ cao của cột bọt (ml) Trung bình (mi)
MI 2,2 2,4 2,1 2,2
M2 2,4 2,5 2,2 2,4
M3 2,1 2,3 2,4 2,3
Thí nghiệm được tiến hành song song với 3 mẫu thử và lặp lại 3 lần cho kết quả trên.
* Phản ứng phân biẽt Saponin steroid và Sa ponin triterpenoid:
Cho vào ông nghiệm to: lg dược liệu,thêm 5ml nước, đun sôi cách thuỷ trong 15 phút, lọc. Lấy 2 ống nghiệm:
Ống 1: 5ml HC1. 0,1N (pH = 1). Ông 2: 5ml NaOH. 0,1N (pH = 13).
Cho thêm vào mỗi ống nghiệm 5 giọt dịch chiết, lắc mạnh 2 ống nghiệm trong 1 phút, để yên.Thấy cột bột ở cả 2 ống nghiệm cao bằng nhau và bền như nhaụ
Thí nghiệm được tiến hành song song với 3 mẫu thử và lặp lại 3 lần đều cho kết quả trên. Sơ bộ kết luận trong dịch chiết có Saponin triterpenoid.
* Phản ứng Liebermann - Burchard:
Lấy 1 ml dịch chiết cồn cho vào ống nghiệm, bốc hơi đến cạn.Hoà tan cắn trong lml cloroform, thêm lml anhydrid acetic, cho từ từ lml acid sulfuric đặc theo thành ống nghiệm.Thấy xuất hiện vòng màu tím đỏ giữa 2 lớp phân cách. Phản ứng dương tính.
Thí nghiệm được tiến hành song song với 3 mẫu thử và lặp lại 3 lần đều cho kết quả trên.
* Phản ứng Salkowski:
Lấy lml dịch chiết cồn cho vào ống nghiệm, bốc hơi đến cạn. Hoà tan cắn trong lml cloroform, cho từ từ lml acid sulfuric đậm đặc (d = 1,76) theo thành ống nghiệm.Thấy xuất hiện vòng nâu đỏ giữa 2 lớp phân cách. Phản ứng dương tính.
Thí nghiệm được tiến hành song song với 3 mẫu thử và lặp lại 3 lần đểu cho kết quả trên.
Sơ bộ kết luận: Trong dịch chiết rễ Ngưu tất có Saponin triterpenoid. Phương pháp và kết quả định tính một số nhóm chất trong rễ Ngưu tất được tóm tắt ở bảng 6.
Bảng 6: Kết quả định tính 1 số nhóm chất trong rễ Ngưu tất
STT Nhóm chất Phương pháp định tính Kết quả
Kết quả SBKL (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
1. Alkaloid. - Với TT Mayer. —
- Với TT Bouchardat. _ Không
- Với TT Dragendorff. —
1 2. Acid amin - Với TT Ninhydrin.0,2%. + + Có
! 3. Glycosid tim - Phản ứng Liebermann. —
- Phản ứng Legal. _ Không
- Phản ứng Baljet.
- Phản ứng Keller- Kiliani —
4. Coumarin - Với TT Ninhydrin. — Không
- Phản ứng mở đóng vòng _
lacton.
- Vi thăng hoạ —
5. Flavonoid - Phản ứng Cyanidin.
- Phản ứng với NaOH 10%. Không
-Phản ứng với hơi amoniac đặc.
- Phản ứng với FeCl3 5%. —
6. Tanin. - Với FeCl3 5%. — Không
- Với dung dịch gelatin 1%. —
7. Anthranoid. - Phản ứng Bomtraeger. Không
- Vi thăng hoạ —
8. Acid hữu cơ. - Phản ứng với bột Na2CỘ + + Có 9. Đường khử tự - Với TT Fehling A, B. + + + Có
do
10. Saponin. - Phản ứng tạo bọt. + + + Có
- Phân biệt 2 loại Saponin. + + + Saponi-
- Phản ứng liebermann- + + n Burchard. triterpe -Phản ứng Salfawskị + + -noid 11. Chất béọ - Vết mờ trên giấy lọc. + Có Chú thích: (-): Phản ứng âm tính; (+): Phản ứng dương tính; (++): Phản ứng dương tính rõ; (+ + +): Phản ứng dương tính rất rõ.
*Kết luân: Trong rễ Ngưu tất có acid amin, acid hữu cơ, đường khử tự do, saponin và chất béọ