Sàng lọc các chủng Klebsiella pneumoniae sinh β-lactamases phổ rộng (ESBL).
b. Nguyên lí
Thử nghiệm sàng lọc, khi chủng cho đường kính vòng kháng khuẩn nhỏ hơn
22mm đối với đĩa ceftazidime, cho thấy sự kháng đối với cephalosporins thế hệ thứ III. Chủng đó được nghi ngờ sinh ESBL.
Thử nghiệm đĩa đôi được thực hiện trên nguyên tắc tìm tác dụng cộng hưởng
giữa đĩa ceftazidime (CAZ) và amoxicilline/clavulanic acid (AMC/CLA) hoặc
cefotaxim (CTX) và cefotaxim/clavulanic acid (CTX/CLA). Sự kết hợp chất ức chế
lactamase như clavulanic acid sẽ làm tăng hoạt tính của cephalosporins thể hiện bằng sự giãn rộng của vùng kháng khuẩn.
c. Thực hiện
+ Chuẩn bị huyền dịch vi khuẩn có độ đục 0,5 McFarland: dùng que cấy lấy 1 khuẩn lạc từ khóm kháng ceftazidime cho vào ống nước muối sinh lý 2ml, vortex, đo độ đục McFarland bằng máy đo độ đục. Điều chỉnh cho đến khi độ đục vi khuẩn đạt
0,5 McFarland (tương đương 108
McFarland trên để được huyền dịch nồng độ 106
CFU/ml.
+Láng đều huyền dịch vi khuẩn lên đĩa thạch Mueller-Hinton: để khô mặt các đĩa thạch bằng cách đặt chúng vào trong tủ ấm 15 phút trước khi đặt kháng sinh.
+ Đặt khoanh giấy kháng sinh ceftazidime (CAZ) và amoxicilline/clavulanic acid (AMC-CLA) lên đĩa thạch. Để các đĩa thạch ở nhiệt độ phòng trong 30 phút cho
kháng sinh từ các khoanh giấy khuếch tán trên mặt thạch.
Lộn ngược các đĩa thạch và ủ ấm ở 35 ± 20
C trong vòng 16-18 giờ [85].
+ Đọc và phân tích kết quả theo tiêu chuẩn CLSI 2014
Kết quả được đọc dựa theo hướng dẫn của CLSI 2014. Khi đường kính vòng
kháng khuẩn của đĩa amoxicilline/clavulanic acid (AMC/CLA) > 5mm so với đường
kính của vòng kháng khuẩn cephalosporin và tạo nên vòng kháng khuẩn dạng “nút
chai champagne” thì chủng đó được ghi nhận là mang kiểu hình ESBL [85].