Nấm men Yarrowia lipolytica Po1g từ công ty YEASTERN Biotech Co. Ltd, đƣợc cung cấp bởi phòng thí nghiệm Kỹ Thuật Sinh Học, Đại Học Khoa Học Công Nghệ Quốc Gia Đài Loan. Các tế bào đƣợc duy trì trong môi trƣờng YPDA chứa: 10 g/L cao men, 10 g/L peptone, 20 g/L D-glucose và 20 g/L agar ở 4 °C (Hình 3.4)
Sản phẩm thủy phân CGTB thủy phân đã khử độc Lọc Điều chỉnh pH bằng H2SO4 Khử độc bằng Ca(OH)2
CHƢƠNG 3 PHƢƠNG TIỆN VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
SVTH: Ngô Tƣờng Vi 23
Sau đó, nấm men từ môi trƣờng YPDA đƣợc nuôi cấy sơ bộ trong môi trƣờng gồm D-glucose 20 g/L, peptone 10 g/L, cao men 10 g/L ở nhiệt độ 26 °C, trong tủ nuôi cấy vi sinh JSSI 100C với tốc độ lắc 160 vòng/phút, trong 24 h.
Nấm men đã nuôi cấy sơ bộ tiếp tục đƣợc nhân rộng trong môi trƣờng CGTB thủy phân với tỷ lệ thể tích 1/10. Quá trình lên men đƣợc tiến hành trong các bình tam giác 500 mL với thể tích môi trƣờng nuôi cấy là 250 mL, nhiệt độ 26 °C và tốc độ lắc 160 vòng/phút. Môi trƣờng nuôi cấy bao gồm: sản phẩm CGTB thủy phân, bổ sung 5 g/L peptone.
Quá trình nuôi cấy nấm men Y. lipolytica có thể bị ảnh hƣởng bởi nhiều yếu tố khác nhau nhƣ nồng độ đƣờng, các chất ức chế trong môi trƣờng, nguồn nitrogen, nhiệt độ, oxy, thời gian nuôi cấy... Trong giới hạn nội dung, đề tài chỉ khảo sát một số yếu quan trọng ảnh hƣởng đến sự sinh trƣởng và tích lũy chất béo nhƣ: (i) nồng độ đƣờng tổng của CGTB thủy phân trong môi trƣờng nuôi cấy với khoảng khảo sát từ 20 - 40 g/L; (ii) thời gian nuôi cấy 1 – 6 ngày.