Kiểm tra tính nhạy cảm đối với kháng sinh của vi khuẩn Staphylococcus aureus, E. coli dựa trên nguyên tắc kháng sinh từ đĩa giấy sẽ khuếch tán làm ức chế vi sinh vật kiểm nghiệm, tạo nên vòng vô khuẩn quanh đĩa giấy.
Môi trường
Môi trường tiêu chuẩn là môi trường NA (Nutrient Agar).
Chuẩn bị canh khuẩn: dùng tampon chuyển khuẩn lạc Staphylococcus aureus, E. coli vào ống có chứa 3-4 ml nước muối sinh lý 9o/oo sao cho canh khuẩn được chế có độ đục tương đương độ đục ống chuẩn Mc. Farland 0,5 (tương đương 108 CFU/ml).
Các loại đĩa kháng sinh: Cefquinome, Gentamycin, Enrofloxacin, Norfloxacin, Doxycyclin, Marbofloxacin, Danofloxacin, Cefotaxim, Fosfomycin.
Tiến hành
Dùng pipet hút 200μl canh khuẩn, trãi đều vi khuẩn trên mặt thạch NA. Chờ mặt thạch khô dùng kẹp vô trùng lấy các đĩa kháng sinh dán trên mặt thạch. Các tâm đĩa kháng sinh không gần nhau dưới 24mm. Không nên dời chỗ kháng sinh sau
khi đã đặt lên mặt thạch. Ủ đĩa thạch ở 370C, sau 16 – 24 giờ, đọc kết quả (Phạm
Hùng Vân, 2002).
Đọc kết quả kháng sinh đồ
Đọc kết quả kháng sinh đồ bằng cách đo đường kính vòng vô khuẩn, rồi so sánh với bảng tiêu chuẩn vòng vô khuẩn.
29
Bảng 3: Tiêu chuẩn đường kính vòng vô khuẩn của một số loại kháng sinh (Phạm Hùng Vân, 2002)
Kháng sinh Hàm lượng Đường kính vòng vô khuẩn (mm)
ks/đĩa (µg) Kháng (≤) Trung bình Nhạy (≥) Gentamycin 10 12 13-14 15 Cefquinome 10 15 16-21 22 Norfloxacin 10 12 13-16 17 Marbofloxacin 5 14 15-19 20 Danofloxacin 30 12 13-15 14 Flofenicol 30 14 15-18 19 Fosfomycin 50 12 13-15 16 Doxycylin 30 12 13-16 17 Cefotaxim 30 14 15-17 18
30
Một số hình ảnh
Hình 1: Khuẩn lạc E. coli trên EMB Hình 2: Phản ứng sinh hóa của E. coli
Hình 3: Khuẩn lạc S. aureus trên MSA Hình 4: Đĩa kháng sinh đồ
31