* Vi khuẩn E. coli
Mẫu bệnh phẩm ban đầu cho vào môi trường NB ủ 37oC trong 24 giờ, sau đó cấy mẫu bệnh phẩm vào môi trường chuyên biệt (EMB) ở 37oC trong 24 giờ: Khuẩn lạc có màu tím ánh kim.
Cấy vi khuẩn vào đĩa NA để nhân mật số vi khuẩn. Kiểm tra đặc tính sinh hóa của vi khuẩn (37oC, 24 giờ).
Môi trường KIA thử khả năng sử dụng đường glucose, lactose (thạch chuyển từ màu đỏ sang vàng), sinh gas (thạch bị nứt), sinh H2S (nếu xuất hiện tủa màu nâu đen bên trong môi trường là dương tính, không xuất hiện tủa màu nâu đen là âm tính).
24
Môi trường Pepton thử khả năng sinh indol của vi khuẩn E. coli. Vi khuẩn nhờ
có tryptophanase sẽ li giải tryptophanase thành indol. Để nhận diện indol, nhỏ vài giọt thuốc thử Kowacs. Thử nghiệm dương tính khi có sự xuất hiện lớp màu đỏ trên bề mặt môi trường.
Methyl Red (MR): Cho 2-3 giọt thuốc thử Methyl Red vào ống nghiệm chứa
môi trường Methyl Red-Voges Proskauer, E. coli tạo nồng độ H+ cao (pH<4,5) môi
trường có màu đỏ thì phản ứng dương tính.
Voges Proskauer (VP): Cho 2-3 giọt thuốc thử VP1, sau đó cho 2-3 giọt thuốc thử VP2 vào ống nghiệm chứa môi trường Methyl Red-Voges Proskauer, E. coli có VP âm tính (không có màu đỏ).
Môi trường Simmons citrate agar: Vi khuẩn sử dụng Citrate sẽ kiềm hóa môi
trường làm đổi màu môi trường từ xanh lục sang xanh dương. E. coli có phản ứng
Citrate âm tính.
Xác định giống vi khuẩn:
Bảng 1:Đặc tính sinh hóa đặc trưng của vi khuẩn E.coli
Vi Khuẩn
Lactose/glucose H2S gas Citrate Di
động
VP MR Indol
E.coli +/+ - + - + - + +
25
Quy trình phân lập E. Coli
Sơ đồ 1:Quy trình phân lập vi khuẩn E.coli.
Phân lập trên môi trường EMB Nhuộm gram Mẫu bệnh phẩm (dịch viêm, dịch tiết…) TSA 370C/24giờ, khuẩn lạc, bóng, màu tím ánh kim
Kiểm tra đặc tính sinh hóa
Escherichia coli
TSI/ KIA Simmons Citrate
(-) VP (+) MR (+) Indol (+) Glucose (+) Lactose (+) H2S (-) Kháng sinh đồ 370C/24giờ NB
26
* Vi khuẩn Staphylocoocus aureus
Mẫu bệnh phẩm ban đầu cho vào môi trường NB ở 37oC trong 24 giờ, sau đó cấy vào môi trường chuyên biệt MSA (37oC, 24 giờ), thu khuẩn lạc cần nuôi cấy. Cấy vi khuẩn vào đĩa NA để nhân mật số lên.
Kiểm tra đặc tính sinh hóa của vi khuẩn (37oC, 24 giờ).
+ Men Catalase: nhỏ H2O2 lên lame, dùng que cấy lấy vi khuẩn đặt vào giọt H2O2. Nếu có sủi bọt thì có sinh men Catalase (Staphylococcus +).
+ Tính đông huyết tương: sử dụng huyết tương thỏ để kiểm tra tính đông huyết tương. Nếu có men coagulase sẽ làm huyết tương sánh lại, men nhiều sẽ làm huyết tương đặc lại (+).
+ Tính dung huyết: Môi trường thạch máu: xung quanh chỗ vi khuẩn phát triển xuất hiện vòng tan huyết (+).
Xác định giống vi khuẩn: Staphylococcus aureus.
Bảng 2: Đặc tính sinh hóa đặc trưng của vi khuẩn Staphylococcus aureus
Vi Khuẩn Sinh men catalase Đông huyết
tương thỏ Dung huyết Staphylococcus aureus + + +
27
Quy trình phân lập Staphylococcus aureus
Sơ đồ 2: Quy trình phân lập vi khuẩn Staphylococcus aureus
Phân lập trên môi trường MSA
Nhuộm gram
370C/24giờ, khuẩn lạc S. aureus
tròn, màu vàng, rìa gọn, khô.
Cấy chuyển lên TSA
Phản ứng Catalase (+)
Phản ứng đông huyết tương thỏ
(+) Phản ứng dung huyết (+) Mẫu bệnh phẩm 370C/24giờ Staphylococcus aureus Kháng sinh đồ 370C/24giờ 370C/24giờ Cho mẫu bệnh phẩm vào
môi trường NB 370C/24giờ
28