Sau khi quét phổ phát hiện trans - RSV có một cực đại hấp thụ tại bước sóng 308,5 nm trong môi trường Triton 1% và đệm PBS pH 7,4.
Khảo sát ảnh hưởng của tá dược
Tại bước sóng 308,5 nm SPC và chol không hấp thụ quang như vậy hai tá dược này không ảnh hưởng tới phương pháp định lượng.
Khảo sát tính tuyến tính
Chuẩn bị một dãy 6 dung dịch chuẩn có nồng độ chất chuẩn RSV lần lượt là 2, 3, 4, 5, 6, 7 µg/ml từ dung dịch RSV gốc bằng cách hút chính xác lần lượt 0,5; 0,75; 1; 1,25; 1,5; 1,75 ml dung dịch gốc pha loãng bằng hỗn hợp Triton 9/1 vừa đủ 25 ml. Lắc đều đem đo quang ở bước sóng cực đại thu được các giá trị độ hấp thụ AS. Sử dụng chương trình Excel của bộ phần mềm Microsolf Office dựng đường chuẩn thể hiện sự tương quan giữa độ hấp thụ quang và nồng độ RSV trong dung dịch. Kết quả được trình bày ở bảng 3.1 và hình 3.1.
Bảng 3.1. Giá trị độ hấp thụ quang của các mẫu dung dịch RSV chuẩn ở bước sóng 308,5 nm
Nồng độ RSV
(µg/ml) 2 3 4 5 6 7
Gía trị độ hấp
thụ quang 0,236 0,341 0,452 0,562 0,664 0,775
H nh 3.1. Đồ thị biểu diễn mối tương quan giữa độ hấp thụ quang và nồng độ RSV trong môi trường đệm PBS và Triton 1% ở bước sóng 308,5 nm
Nhận xét: Từ đồ thị ở hình 3.1 ta thấy trong khoảng nồng độ RSV khảo sát (2 - 7 µg/ml), độ hấp thụ quang phụ thuộc tuyến tính vào nồng độ RSV. Đường chuẩn thu được dạng đường thẳng có phương trình hồi quy tuyến tính là y = 0,1078x + 0,0198 với hệ số tương quan R2
= 0,9999 rất gần 1. Như vậy có thể sử dụng phương pháp đo quang ở bước sóng 308,5 nm với khoảng nồng độ trên để định lượng RSV trong liposom.
Khảo sát độ lặp lại của phương pháp
Hút chính xác 5 ml dung dịch RSV gốc pha loãng bằng hỗn hợp Triton 9/1, định mức đủ 150 ml. Đo độ hấp thụ quang của dung dịch này tại bước sóng cực đại ở 6 thời điểm khác nhau trong ngày (mỗi thời điểm cách nhau khoảng 1 giờ) trên cùng một thiết bị và trong cùng một phòng thí nghiệm. Mỗi giá trị độ hấp thụ quang được đo ba lần lấy giá trị trung bình. Tính độ lệch chuẩn tương đối RSD của dãy giá trị thu được, nếu RSD < 2% thì có thể kết luận phương pháp có độ lặp lại cao. Kết quả khảo sát độ lặp lại được trình bày ở bảng 3.2. y = 0,1078x + 0,0198 R² = 0,9999 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Đ ộ hấp th ụ qu an g Nồng độ RSV µg/ml
Bảng 3.2. Kết quả đo độ lặp lại của phương pháp định lượng bằng kỹ thuật đo quang phổ UV – VIS
STT Gía trị độ hấp thụ quang 1 0,375 2 0,372 3 0,376 4 0,377 5 0,380 6 0,381 Atb 0,377 SD 0,003312 RSD% 0,88
Nhận xét: độ lệch chuẩn tương đối của giá trị độ hấp thụ quang là RSD = 0,88% < 2% phép đo có độ lặp lại tốt.
Phương pháp định lượng RSV bằng kỹ thuật đo quang không bị ảnh hưởng bởi tá dược SPC, chol, có độ lặp lại cao và có tính tuyến tính nên có thể áp dụng để định lượng RSV và đánh giá hiệu suất liposom hóa RSV.