Tiến hành nuôi VKLCĐN trong môi trờng BG11. Đây là môi trờng thích hợp nhất cho sinh tr- ởng, phát triển của hầu hết các chủng VKL mà không gây biến thái hình dáng.
Thành phần môi trờng BG11 nh sau: [47].
Hoá chất Hàm lợng (g/l) Thành phần dung dịch A5(*)
Hoá chất Hàm lợng (g/l)
NaNO3 1,50 H3PO4 2,5
K2HPO4 0,04 MnCl2 . 4 H2O 1,81 MgSO4. 7 H2O 0,075 ZnSO4 . 7 H2O 0,2 CaCl2.2 H2O 0,036 NaMoO4 . 2 H2O 0,39 Axit citric 0,006 CuSO4 . 5 H2O 0,05 Sắt –
amoniumcitrat 0,006 Nớc cất 1 lít
EDTA 0,001 Thành phần dung dịch B6 (*)
Na2CO3 0,02 NH4WO3 0,022
Dung dịch A5 (*) 1ml K2Cr2(SO4). 24 H2O 0,096 Dung dịch B6 (*) 1 ml NiSO4. 7 H2O 0,048 Nớc cất 1 lít
Na2WO4 0,018 Ti2(SO4)3 0,04 Nớc cất 1 lít
Để có môi trờng BG11 không đạm, ta loại bỏ NaNO3 và sắt ammonium citrat ra khỏi môi trờng. Chuẩn bị môi trờng thạch bằng cách thêm 1,5 gam agar/100ml môi trờng lỏng. Khử trùng môi trờng dới áp suất 1,5 at trong 30 phút. Sau đó để nguội, chỉnh pH của môi trờng ở 7,1.
Các chủng VKLCĐN sau khi đợc phân lập thuần khiết sẽ đợc chuyển vào bình cầu dung tích 250 ml chứa 100 ml dung dịch dinh dỡng BG11 không đạm (với lợng thả ban đầu khoảng 0,1gVKL tơi/100ml dịch vẩn). Bình đợc đặt ở nhiệt độ 25 – 30 0C, độ ẩm 60 – 80%, thời gian chiếu sáng 12giờ/ 24 giờ, cờng độ chiếu sáng 1200 – 2000 lux. Xác định sinh khối VKL đợc theo dõi ở các thời điểm 15, 30, 45 ngày tuổi.
Để xác định sinh khối VKL tiến hành li tâm dịch chứa VKL (tốc độ 700 –
1000 vòng/phút). Sinh khối VKL lắng xuống đáy ống li tâm, gạn bỏ chất lỏng phía trên sau đó đổ thêm 10 ml nớc cất 2 lần rồi tiếp tục li tâm, loại bỏ và thấm khô nớc, cân xác định trọng lợng. Sinh khối VKL tơi đợc tính theo gam/100ml dung dịch môi trờng [4], [47], [57].