Lập kháng sinh đồ bằng phương pháp khuếch tán trên thạch theo Kirbry- Bauer. Đề tài thử nghiệm 13 loại kháng sinh và xác định các loại kháng sinh nhạy, trung bình và kháng dựa vào chuẩn đường kính vòng vô trùng (mm) theo Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) 2014 được trình bày bảng 3.2.
Chuẩn bị canh khuẩn: vi khuẩn E. coli ESBL được pha thành huyển dịch vi khuẩn có độ đục tương đương với độ đục khuẩn Macfarland 0.5 (108 CFU/ml, sau đó pha loãng bằng nước muối sinh lý 9 để được huyễn dịch vi khuẩn có độ đục 106 CFU/ml
Tiến hành
Cấy huyễn dịch vi khuẩn lên thạch MHA bằng cách dùng tampon vô trùng nhúng vào huyễn dịch vi khuẩn (106 CFU/ml), sau đó chan đều lên khắp mặt thạch MHA dưới ngọn đèn cồn để tránh tạp nhiễm. Chờ cho mặt thạch khô gắp lấy các kháng sinh đặt nhẹ lên mặt thạch. Đặt các kháng sinh sao cho hai đĩa kháng sinh cách nhau 2,5-3,5cm và cách mép thạch 2-2,5cm, phải đảm bảo các đĩa kháng sinh tiếp xúc thẳng với mặt thạch (1 đĩa thạch MHA đặt tối đa 7 loại
20
kháng sinh). Các đĩa được lật úp lại sau khi đặt kháng sinh. Sau đó đem ủ ở 370C trong 24 giờ, đọc kết quả.
Huyễn dịch vi khuẩn
MHA, đặt các đĩa kháng sinh ủ 16-18 giờ/370C
Đo đường kính vòng vô khuẩn (mm)
Đọc kết quả kháng sinh nhạy, kháng và trung gian dựa vào chuẩn đường kính vòng kháng khuẩn theo CLSI (2014)
21
Bảng 3.2 Tiêu chuẩn đường kính vòng kháng khuẩn của một số loại kháng sinh CLSI 2014
Kháng sinh
Hàm lƣợng
Đƣờng kính vùng ức chế (mm) Nhạy Trung gian Kháng
Ampicillin 10 µg ≥17 14-16 ≤13 Cefuroxime 30 µg ≥23 15-22 ≤14 Cefaclor 30 µg ≥18 15-17 ≤14 Gentamycin 10 µg ≥15 13-14 ≤12 Streptomycin 10 µg ≥15 12-14 ≤11 Kanamycin 30 µg ≥18 14-17 ≤13 Amikacin 30 µg ≥17 15-16 ≤14 Tetracycline 30 µg ≥15 12-14 ≤11 Doxycycline 30 µg ≥14 11-13 ≤10 Norfloxacin 10 µg ≥17 13-16 ≤12 Ofloxacin 5 µg ≥16 13-15 ≤12 Fosfomycin 50 µg ≥16 13-15 ≤12 Ceftazidime-clavulanic 30/10 µg ≥18 13-15 ≤12
Amoxicillin + acid clavulanic 20/10 µg ≥18 14-17 ≤13
Trimethoprim +Sulfamethoxazol 5 µg ≥16 11-15 ≤10