- Mẫu thử: cắn ethyl acetat đƣợc hòa tan trong methanol.
Tiến hành thăm dò trên các hệ dung môi khai triển.
Hệ I: Dichloromethan - Ethyl acetat - Methanol - Acid formic (6:3:0,2:1) Hệ II: Ethyl acetat - Methanol - Nƣớc (12:2:1)
Hệ III: Toluen - Aceton (2:3)
Hệ IV: Chloroform - Aceton - Acid acetic băng (3:2:0,1) Hệ V: Ethyl acetat - Aceton - Nƣớc (30:5:2)
- Thuốc thử hiện màu: vanilin/H2SO4 10%.
- Tiến hành: Chấm dịch chấm sắc ký lên bản mỏng, sấy nhẹ cho bay hết dung môi, đặt vào bình sắc ký đã bão hòa dung môi. Sau khi khai triển, lấy bản mỏng ra, sấy khô, quan sát dƣới AST, UV365nm, UV254nm. Sau đó phun thuốc thử, sấy ở 1100C, quan sát tiếp dƣới AST.
Hình ảnh SKLM cắn ethyl acetat với các hệ dung môi khác nhau thu đƣợc nhƣ hình 3.2.
I II III IV V
Hình 3.2. Sắc ký đồ của cắn ethyl acetat với 5 hệ dung môi dƣới UV365nm
Sau khi thăm dò 5 hệ dung môi trên thấy hệ I cho kết quả tách rõ ràng và nhiều vết nhất.
Tiến hành sắc ký lớp mỏng cắn ethyl acetat với hệ dung môi I và quan sát ở các điều kiện khác nhau. Kết quả thể hiện ở hình 3.3 và bảng 3.1.
Hình 3.3 trình bày sắc ký đồ của cắn ethyl acetat khi khai triển với hệ dung môi I và quan sát ở các điều kiện khác nhau (ánh sáng thƣờng, UV254nm, UV365nm và thuốc thử vanilin/H2SO4 10%.)
a b c d
Hình 3.3. Sắc ký đồ của cắn ethyl acetat với hệ I ở các điều kiện quan sát
a) Không phun TT, AST c) Không phun TT, UV365nm
b) Không phun TT, UV254nm d) Phun TT, AST
Bảng 3.1 trình bày kết quả định tính của cắn ethyl acetat khi khai triển với hệ dung môi I và quan sát ở các điều kiện khác nhau (ánh sáng thƣờng, UV254nm, UV365nm và thuốc thử vanilin/H2SO4 10%.)
Bảng 3.1. Kết quả định tính cắn ethyl acetat bằng SKLM khai triển với hệ
dung môi I.
Vết số Không phun TT Phun TT Rf x 100
AST UV254nm UV365nm AST
1 Xanh lam ++ 14,67 2 Xanh lam + 20,00 3 Vàng + 26,32 4 Xanh lam ++ 30,76 5 Xanh lam + 38,67 6 Tím + 51,32 7 Xanh lam + 56,00 8 Vàng +++ Nâu ++++ Vàng +++ Tím ++ 61,33
9 Nâu ++++ Xanh lam +++ Xanh lam ++ 62,67
10 Xanh lam +++ 66,67 11 Xanh lam + 88,00 12 Xanh lam ++ 92,00 Ghi chú: (+) rất mờ (++) mờ (+++) rõ (++++) rất rõ 3.4. PHÂN LẬP 3.4.1. Phân lập
Lót một lớp bông mỏng dƣới đáy cột. Nhồi cột bằng phƣơng pháp nhồi cột ƣớt với chất nhồi cột là silicagel pha đảo, cỡ hạt 30 - 50µm dùng cho sắc ký cột. Ổn định cột trong 24h.
Cắn ethyl acetat (AR-E) đƣợc phân lập trên cột silicagel pha đảo, rửa giải với hệ dung môi methanol - nƣớc (1:1) thu đƣợc 5 phân đoạn AR-E1,
AR-E2, AR-E3, AR-E4, AR-E5. Kiểm tra các phân đoạn thu đƣợc bằng SKLM.
Phân đoạn AR-E4 tiếp tục đƣợc phân lập trên cột silicagel pha thƣờng, cỡ hạt 40 - 60µm, rửa giải với hệ dung môi ethyl acetat - methanol - acid formic (5:1:0,1). Kiểm tra thành phần của dịch rửa giải bằng SKLM để dồn các ống có cùng thành phần, thu đƣợc 3 phân đoạn AR-4A, AR-4B, AR-4C.
Tiến hành sắc kí lớp mỏng điều chế với phân đoạn AR-4C với hệ dung môi khai triển là ethyl acetat - methanol - acid formic (5:1:0,1), thu đƣợc 2 chất là AR1 và AR2.
Hình 3.4. Sơ đồ phân lập các hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat chiết xuất từ (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
lá Sa kê. Cắn AR-E
AR-E1 AR-E2 AR-E3 AR-E4 AR-E5
AR-4A AR-4B
AR1
AR-4C
AR2 Silicagel pha đảo,
Methanol-nƣớc (1:1)
Silicagel pha thƣờng, Ethyl acetat-methanol-acid formic
(5:1:0,1)
SKLM điều chế,
Ethyl acetat-methanol-acid formic (5:1:0,1)