Thực hiện theo chuyên luận troxerutin của Dược điển Anh năm 2010. Sử dụng sắc kí lỏng hiệu năng cao (HPLC).
- Chuẩn bị:
+ Dung dịch thử: Hòa tan 10mg chất thử trong 10ml dung môi pha động (có thể hòa tan bằng siêu âm).
+ Dung dịch đối chiếu a: Hòa tan 10mg troxerutin chuẩn trong 10 ml dung môi pha động (có thể hòa tan bằng siêu âm).
+ Dung dịch đối chiếu b: Pha loãng 1ml dung dịch đối chiếu a trong 10 ml dung môi pha động được dung dịch a1, pha loãng tiếp 1 ml dung dịch a1 trong 100ml dung môi pha động được dung dịch đối chiếu b.
+ Điều kiện sắc kí:
Cột C18 (octadecylsilyl silica gel): Chiều dài cột 0,25 m, đường kính cột 4,6 mm, đường kính hạt nhồi 5µm.
Dung môi pha động: Hỗn hợp gồm 20 thể tích acetonitril và 80 thể tích NaH2PO4 1,56% được điều chỉnh pH = 4,4 bằng dung dịch acid phosphoric hoặc NaOH.
Tốc độ dòng 0,5 ml/ phút.
Detecter UV ở 350 nm.
Thể tích tiêm 10 µl. - Tiến hành chạy sắc kí:
Thời gian lưu tương đối so với tri-(hydroxyethyl) rutin của tetra- (hydroxyethyl) rutin khoảng 0,5; mono-(hydroxyethyl) rutin khoảng 0,8; bis- (hydroxyethyl) rutin khoảng 1,1.
trB/ trA ≈ 0,5 trC/ trA ≈ 0,8 trD/ trA ≈ 1,1
Với trA: thời gian lưu của tri-(hydroxyethyl) rutin (trA = 25 phút).
trB: thời gian lưu của tetra-(hydroxyethyl) rutin. trC: thời gian lưu của mono-(hydroxyethyl) rutin. trA: thời gian lưu của bis-(hydroxyethyl) rutin. - Tiêu chuẩn cho phép
+ Tỉ lệ thành phần chính: (tri-(hydroxyethyl)-rutin): ≥ 80%.
+ Tỉ lệ các thành phần khác: (mono-, bis-, tetra-(hydroxyethyl)-rutin) mỗi thành phần không quá 5%, có thể chấp nhận một thành phần không quá 10%.