3. Nội dung nghiên cứu
3.2.NHÂN GEN PPO Ở CÁC MẪU CHÈ NGHIÊN CỨU
Gen mã hóa PPO được cho là chỉ có trình tự mã hóa có kích thước là 1,8 kb. Trình tự gen mã hóa PPO được phân lập từ mRNA và genome ở chè đã được công bố trên Genbank với mã số DQ513313, EF623826, EF635860, EU787433, EF650017, EF650016, JX465712, CQ192142 và FJ210643 [28]. Trên cơ sở đã tách chiết được DNA tổng số có chất lượng tốt từ các mẫu lá chè nghiên cứu làm DNA khuôn tối ưu cho phản ứng PCR. Chúng tôi đã tiến hành phản ứng PCR với các điều kiện nhiệt độ khác nhau và nhận thấy PCR ở nhiệt độ gắn mồi tốt nhất là 59 oC với 32 chu kì. Và sau khi tối ưu được nhiệt độ gắn mồi đặc hiệu chúng tôi đã tiến hành nhân bản gen mã hóa PPO bằng
phản ứng (bảng 2.2) được thiết kế
dựa trên trình tự nucleotide của gen.
Sản phẩm của phản ứng PCR được điện di kiểm tra trên gel agarose 1% trong dung dịch đệm TAE 1X, nhuộm gel trong ethidium bromide và chụp ảnh dưới ánh sáng đèn cực tím, kết quả thu được thể hiện trên hình 3.2.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/
Hình 3.2. Hình ảnh điện di kết quả PCR khuếch đại gen PPO
(M: Marker DNA 1 kb (Fermentas) 1, 2 và 3: sản phẩm PCR khuếch đại gen
PPO tương ứng từ giống Trung du, Keo Am Tích và LDP1)
Kết quả thu được ở hình 3.2 cho thấy, sản phẩm PCR ở cả 3 mẫu nghiên cứu Trung du và Keo Am Tích và LDP1 đều nhận được băng DNA có kích thước khoảng 1,8 kb, kích thước này phù hợp theo tính toán lý thuyết và tương ứng với chiều dài của gen PPO từ các công trình đã công bố [28]. Đồng thời, kết quả điện di cho thấy sản phẩm PCR là đặc hiệu và đủ hàm lượng sử dụng cho tách dòng gen PPO.