3. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài
3.1. Ảnh hƣởng của HgCl2 đến khả năng tạo nguồn mẫu sạch
khoai môn – sọ in vitro
Sau khi theo dõi, chúng tôi thu đƣợc kết quả cụ thể nhƣ sau:
Bảng 3.1: Ảnh hƣởng của HgCl2 0,1% đến hiệu quả khử trùng
CT Tỷ lệ mẫu nhiễm (%) Tỷ lệ mẫu sạch (%) Tỷ lệ mẫu sống tạo cây (%) Tỷ lệ mẫu chết (%) CT1 60 30 10 CT2 40 60 0 CT3 30 70 0 CT4 20 70 10 CT5 10 60 30
Trong nhiều nghiên cứu về việc tạo vật liệu khởi đầu của khoai môn – sọ cho thấy tỷ lệ nhiễm khá cao, các mẫu nhiễm chủ yếu là nhiễm khuẩn. Nguyên nhân là do đặc tính của khoai môn – sọ là củ nằm dƣới đất, không có vảy củ lớn bảo vệ các mắt ngủ, vỏ củ sù sì là nơi vi khuẩn trú ngụ rất khó để khử trùng sạch. Đồng thời một đặc tính đặc trƣng của khoai môn – sọ là có độ nhớt cao, khi củ bị nhiễm nấm khuẩn ở bên trong mạch dẫn thì việc khử trùng rất khó khăn do độ nhớt cao sẽ làm cản trở sự thâm nhập của các chất khử trùng vào để làm sạch hoàn toàn mẫu cấy.
Theo nghiên cứu của H. Chand và cộng sự (1998) tỷ lệ mẫu nhiễm khuẩn khi vào mẫu môn sọ có thể lên tới 60%.
Theo nghiên cứu của Uông Thị Thảo (2007), khi khử trùng mẫu khoai môn – sọ với chế độ khử trùng kép lần 1 khử trùng 30 phút bằng dung dịch NaOCl 10%, lần 2 khử trùng 10 phút bằng dung dịch HgCl2 0,1%, tỷ lệ nhiễm
cũng lên tới 63,6%. Cũng theo nghiên cứu của Phạm Xuân Văn (2008) khi
khử trùng bằng chế độ khử trùng kép trong HgCl2 0.1% (15 phút) + Cefotaxime 600ppm (90phút) thì mẫu nhiễm khuẩn cũng khá cao [8].
Từ những khó khăn trong quá trình tạo nguồn vật liệu sạch bệnh chúng tôi tiếp tục nghiên cứu chế độ khử trùng và hóa chất thích hợp nhằm nâng cao tỷ lệ mẫu sạch.
Kết quả bảng 3.1 cho thấy hiệu quả khử trùng của HgCl2 0,1% riêng rẽ và kép đối với mắt ngủ ở củ là khác nhau.
Ở công thức sử dụng HgCl2 0,1% riêng rẽ tỷ lệ nhiễm nấm khuẩn khi vào mẫu khá cao (60%).
Nhìn chung, khi tăng thời gian ngâm mẫu trong dung dịch HgCl2 0,1% thì lƣợng mẫu nhiễm giảm đáng kể (từ 60% xuống còn 10%), chứng tỏ HgCl2 0,1% có tác dụng khử trùng tốt nhƣng khi ngâm mẫu quá lâu trong dung dịch HgCl2 0,1% sẽ ảnh hƣởng đến sức sống của mẫu.
Công thức sử dụng dung dịch HgCl2 0,1% kép, lần thứ nhất có thời gian ngâm mẫu vừa phải và lần kép sau có thời gian ngâm hợp lý thì đạt hiệu quả trong việc khử trùng.
Công thức thu đƣợc lƣợng mẫu sạch và mẫu sống cao nhất là CT 4: HgCl2 0,1% (7 phút) + HgCl2 0,1% (1 phút) đạt tỷ lệ lên tới 70%.
Sử dụng HgCl2 0,1% kép với thời gian hợp lý sẽ mang lại hiệu quả cao.