- Chiết lần lượt với hexan, etyl axetat, butanol
3.4. Xác định cấu trúc củ aC
Hợp chất C là chất bột không màu, nhiệt độ nóng chảy 120 − 121 °C. Phổ khối luợng phân giải cao cho pic ion giả phân tử [M+Na]+ m/z = 523,41 tuơng ứng với công thức C33H56O3. Trong phổ 1H-NMR, có 5 tín hiệu singlet ở δH 0,82 (3H, s, CH3-18), 0,91 (3H, s, CH3-21), 0,97 (3H, s, CH3-22), 0,98 (3H, s, CH3-19) và 1,60 (3H, s, CH3-30); hai tín hiệu doublet ở δH 0,80 (3H, d, J = 9,5 Hz, CH3-32) và 0,93 (3H, d, J = 6,0 Hz, CH3-33). Thêm vào hai tín hiệu doublet của proton cyclopropyl ở δH 0,40 (1H, d, J = 4,5 Hz, H-20) và 0,62 (1H, d, J = 4,5 Hz, H-20) từ đó cho ta dự đoán đây là một dẫn xuất triterpen khung cycloartanol. Phổ 13C-NMR cho thấy có tổng số 33 nguyên tử cacbon trong phân tử, bao gồm một nhóm metylen gắn với C bậc bốn (δC
111,9; 147,4), 3 cacbon gắn với oxy (δC 62,8; 71,0; 83,2) và 7 nhóm metyl (δC 15,1; 18,1; 19,0; 19,3; 20,7; 21,3; 25,7). Ngoài ra, trong vùng truờng thấp có 4 tín hiệu của proton gắn với oxygenat ở δ 3,01 (1H, d, J = 9,5 Hz, H-3), 3,54 (1H, dd, J = 11,0; 6,0 Hz, H-24), 3,64 (1H, br dd, J = 16,0; 9.0 Hz, H- 92), và 3,70 (1H, br d, J = 11.0 Hz, H-24) đuợc gắn với C-2, -3, và -24 xác định bởi tuơng quan 2J, 3J-HMBC qua H-2 với C-3 (δ 83,2), C-4 (δ 40,3); H- 3 với C-1 (δ 25,7), C-2 (δ 71,0), C-4, và C-18 (δ 15,1); và H-24 với C-23 (δ 46,2), C-25 (δ 27,7). Vị trí của nhóm methylen bậc bốn ở δH 4,64 (1H, br s, H-29) và 4,77 (1H, br s, H-29) cũng đuợc thiết lập bởi sự phân tích phổ HMBC qua sự tuơng quan giữa H-29 và C-27 (δC 55,4), C-30 (δC 19,0). Trong phân tích phổ HMBC, có sự tuơng quan các pic H-32 và C-33, C-31, C-27; H-33 và C-32, C-31, C-27, cho thấy rằng nhóm isopropyl đuợc liên kết với C-27. Các tín hiệu doublets truờng cao ở δH 0,40 và 0,62 cho thấy mối tuơng quan HMBC với các nguyên tử cacbon ở δ 25,7 (C-1), 39,7 (C-11), và δ 47,1 (C-5) cũng khẳng định sự có mặt của nhóm cyclopropyl như C-20 nối với C-9 và C-10. Số liệu phổ cộng hưởng từ của hợp chất C được xác định trong bảng 3.3.
Bảng 3.3: Số liệu phổ NMR của hợp chất C
Cacbon DEPT δC(ppm) δH(ppm)
1 CH2 25,7 1,31
4 C 40,3 5 CH 47,1 6 CH2 20,9 0,78 7 CH2 26,5 1,04 8 CH 47,7 9 C 25,1 10 C 19,2 11 CH2 39,7 12 CH2 35,3 13 C 45,0 14 C 48,7 15 CH2 31,8 16 CH2 26,8 1,20 17 CH 43,1 18 CH3 15,1 0,82 19 CH3 18,1 0,98 20 CH2 29,7 0,40; 0,62 21 CH3 19,3 0,91 22 CH3 25,7 0,97 23 CH 46,2 24 CH2 62,8 25 CH2 27,7 1,10 26 CH2 27,3 27 CH 55,4 28 C=C 147,4 29 C=C 111,9 30 CH3 19,0 31 CH 30,2 32 CH3 21,3 0,80 33 CH3 20,7 0,93
Hình 3.13 Phổ HR-ESI-MS của hợp chất C
Hình 3.15 Phổ 1H của hợp chất C (phổ dãn)
Hình 3.17 Phổ 13C của hợp chất C
Hình 3.20 Phổ DEPT của hợp chất C
Hợp chất C là hợp chất lần đầu tiên được phân lập từ cây Annona reticulata và đuợc đề nghị đặt tên là annonaretin A.
Annonaretin A
KẾT LUẬN
Nghiên cứu thành phần hoá học lá cây Bình bát ở Việt Nam chúng tôi đã thu được một số kết quả như sau:
- Bằng các phương pháp ngâm chiết với các dung môi chọn lọc rồi cất thu hồi dung môi đã thu được các cao tương ứng là cao hexan (31g), cao etylaxetat (82g), cao butanol (47g), pha nước.
- Phân lập các hợp chất từ cao n-hexan bằng các phương pháp sắc ký thu được hợp chất A (2,968mg) và hợp chất C (5mg).
- Phân lập các hợp chất từ cao etylaxetat bằng các phương pháp sắc ký thu được hợp chất B (9,38mg).