2.2.3.1. Khả năng nổi in vitro
Viên thuốc được thả vào cốc nước chứa 100ml dung dịch acid clohydric 0,1M. Thời gian từ khi thử đến khi viên thuốc bắt đầu nổi lên trên bề mặt môi trường được tính là thời gian tiềm tàng (phút) và tổng thời gian viên thuốc nổi trên bề mặt môi trường được tính là thời gian nổi (phút).
2.2.3.2. Khả năng trương nở
Khả năng trư ng nở của viên nén bào chế được đánh thông qua xác định lượng nước được hấp thụ trong viên bằng phư ng pháp phân tích khối lượng: Viên
thuốc có khối lượng (Wv) được cho vào giỏ làm bằng thép không gỉ có kích thước
mắt lưới 381μm, đường kính sợi dây là 254µm và cân xác định khối lượng ban đầu
của giỏ và viên (W0). Sau đó giỏ thuốc được nhúng vào trong 100ml dung dịch acid
HCl 0,1 N ở 37°C. Sau từng khoảng thời gian nhất định (10 phút) giỏ thuốc được lấy ra, dùng giấy lọc thấm hết phần dịch trên bề mặt viên và cân xác định khối
lượng (Wt). Mức độ trư ng nở của viên thuốc (S) được xác định theo công thức:
S =
100 (%).
2.2.3.3. Khả năng kết dính sinh học in vitro
Thiết bị đánh giá lực kết dính sinh học được chế tạo từ cân Roberval được mô tả trong hình 2.2.
Phương pháp xử lý niêm mạc dạ dày – ruột thỏ: m không khí vào tĩnh mạch vành tai để làm chết thỏ. Ngay lập tức phẫu thuật cắt lấy dạ dày và ruột non thỏ. Làm sạch bề mặt niêm mạc bằng dung dịch nước muối sinh lý sao cho không làm
mất lớp chất nhày trên bề mặt. Cắt thành những mảnh niêm mạc diện tích 4 cm2 (2×
xử lý. Bảo quản dạ dày trong môi trường nước muối sinh lý và nhiệt độ phòng 20oC.
Tiến hành: Gắn cố định dạ dày lên giá đỡ, làm ướt niêm mạc bằng một thể tích chính xác 0,1 ml dung dịch HCl pH 1,2. Ở một bên đĩa cân, đặt viên thuốc lên niêm mạc dạ dày rồi tác động lên viên thuốc một lực 250g trong 1 phút ( đặt quả nặng có khối lượng tư ng đư ng). Ở bên đĩa cân khác, điều chỉnh nước nhỏ từ buret xuống cốc nhựa với tốc độ 3ml/phút cho đến khi viên thuốc bị kéo chuyển dịch dưới tác động của trọng lượng nước. Cân cốc nước để xác định lực KDSH của viên thuốc.
Lực KDSH tính cho 1cm2 được tính như sau:
F = 0,00981 (N/cm2).
Trong đó:
F: Lực KDSH tính cho 1cm2
(N/cm2) m: Khối lượng nước (g)
S: Diện tích bề mặt viên (cm2) được quét h nh ảnh và xác định bằng phần mềm
Image J 1.46. Kết quả với viên nén bào chế được là S = 1,59 ± 0,05 cm2 (n = 6).
H nh 7. Thiết bị đánh giá khả năng kết dính sinh học của viên nén [10]
2.2.3.4. Thử độ đồng đều khối lượng
Tiến hành theo chuyên luận viên nén phụ lục 11.3 Dược điển Việt Nam IV [5].
2.2.3.5. Định lượng
Định lượng hàm lượng AMX bằng phư ng pháp sắc kí lỏng hiệu năng cao với các điều kiện như sau:
- Pha tĩnh: Cột ZORBAX Eclipse XDB - CN (4,6×150mm, 5µm) và bảo vệ cột ZORBAX XDB - CN (4,6×12,5mm, 5µm).
- Pha động: Dung dịch đệm phosphat pH 5,0 – acetonitril (95:5). - Tốc độ dòng pha động: 0,5 ml/phút.
- Thể tích tiêm mẫu: 20 µl.
- Detector UV bước sóng: 230 nm.
Mẫu chuẩn
Cân chính xác một lượng DC khoảng 120mg, hòa tan hoàn toàn bằng dung dịch đệm phosphat pH 5,0 trong b nh định mức 100 mL, bổ sung vừa đủ thể tích, thu được dung dịch gốc nồng độ 1,2 mg/ml.
Tiếp tục pha loãng dung dịch gốc 20 lần với dung dịch đệm phosphat pH 5,0 để thu được mẫu chuẩn có nồng độ khoảng 60 µg/ml. Lọc qua màng lọc 0,45 µm.
Mẫu thử
Định lượng DC có trong mẫu viên: Cân chính xác khối lượng của 20 viên. Nghiền viên thành bột mịn bằng chày cối, hòa tan bột viên bằng dung dịch đệm phosphat pH 5,0 trong b nh định mức 100ml, siêu âm 15 phút. Pha loãng dung dịch gốc 20 lần với dung dịch đệm phosphat pH 5,0. Lọc qua màng lọc 0,45µm.
Cách tính kết quả:
Hàm lượng amoxicillin được tính theo công thức sau:
%AMX=
Trong đó: Sthử, Schuẩn lần lượt là diện tích pic sắc kí của mẫu thử và mẫu chuẩn. mthử, mchuẩn lần lượt là khối lượng của mẫu viên thử và mẫu chuẩn. Fthử, Fchuẩn lần lượt là hệ số pha loãng của mẫu thử và mẫu chuẩn. mtb là khối lượng trung bình của viên.
HLghi nhãn là hàm lượng amoxicillin được ghi trên nhãn. Khc là hệ số hiệu chỉnh.
2.2.3.6. Đánh giá khả năng giải phóng dược chất của viên amoxicillin kết dính sinh học
Khả năng giải phóng dược chất của viên AMX bào chế được tiến hành trong điều kiện sau:
- Thiết bị cánh khuấy, tốc độ khuấy 75 1 vòng/phút.
- Môi trường hoà tan 900 ml dung dịch nước cất.
- Nhiệt độ 37 ± 0,50C.
- Tiến hành thử nghiệm trong 5 giờ, lấy mẫu ở các khoảng thời gian 1h, 3h, 5h.
- Lấy mẫu: Hút 10 ml mẫu, bổ sung lại 10ml môi trường.
- Định lượng bằng phư ng pháp đo mật độ quang ở bước sóng λ= 272 nm.
- Cách tính kết quả: Nồng độ AMX ở thời điểm t được tính theo công thức:
∑
Dt0: Độ hấp thu của dung dịch thử.
C0: Nồng độ dung dịch chuẩn (µg/ml).
D0: Độ hấp thu của dung dịch chuẩn.
Ct: Nồng độ hiệu chỉnh ở thời điểm thứ t (µg/ml). V0: Thể tích dịch hòa tan đã hút (V0=5ml).
V: Thể tích môi trường hòa tan (V=900ml).
Ci: Nồng độ chưa hiệu chỉnh ở lần lấy mẫu thứ i (µg/ml).
α: Độ pha loãng.
Phần trăm AMX (C%) giải phóng tại thời điểm t được tính theo công thức sau:
Ct: Nồng độ hiệu chỉnh ở thời điểm t (µg/ml).
m: Lượng AMX trong viên bào chế (mg).