CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM 2.1 Nguyên liệu:
2.2.3Quy trình thử nghiệm kháng nấm hồng:
• Chuẩn bị giống gốc
Nấm Corticium salmonicolor được phân lập từ trong vỏ cây cao su bị bệnh nấm hồng để thu đơn nấm trong môi trường Potato Dextrose Agar (PDA) theo qui trình phân lập, nuôi cấy nấm.
Từ ống nghiệm được giữ trên thạch nghiêng, chủng nấm bệnh được nuôi cấy trên các đĩa petri chứa môi trường PDA. Cấy tơ nấm một điểm ở giữa thạch, để ở nhiệt độ phòng cho nấm mọc lan tỏa trên đĩa thạch.
• Chuẩn bị môi trường và dung dịch nano đồng để thử nghiệm
Dung dịch nano đồng thử nghiệm được lọc vô khuẩn qua màng lọc millipore (kích thước lỗ 0,45 μm), sau đó hút lượng dung dịch nano đồng cần khảo sát vào đĩa petri đã được vô trùng và thêm 25 ml môi trường nuôi cấy PDA chưa đông (đã hấp khử trùng bằng thiết bị autoclave và để nguội khoảng 40oC). Sau đó khuyếch tán dung dịch nano đồng đều vào môi trường nuôi cấy và để nguội.
Thu thập mẫu bệnh
Xử lý mẫu bệnh
Phân lập
• Phương pháp thử in vitro
Dùng que cấy hình thước thợ được khử trùng trên ngọn đèn cồn lấy tơ nấm sinh trưởng trên môi trường PDA (giống gốc), đem cấy vào giữa các đĩa môi trường chứa dung dịch nano đồng ở các nồng độ cần khảo sát. Tất cả mẫu đối chứng (ĐC) được thay dung dịch nano đồng bằng nước cất vô trùng. Mỗi thí nghiệm được lặp lại 3 lần. Ủ các đĩa đã cấy nấm ở nhiệt độ phòng. Theo dõi đường kính sinh trưởng của tơ nấm theo dạng tỏa tròn (mm) trong các khoảng thời gian xác định sau 2 ngày, 4 ngày, 6 ngày. • Tính kết quả
Từ dữ liệu trung bình đường kính tơ nấm (mm), tính phần trăm ức chế sinh trưởng theo công thức:
% ức chế sinh trưởng 100 1 2 1− × = DK DK DK
Trong đó: DK1 đường kính tơ nấm trung bình ở lô đối chứng. DK2 đường kính tơ nấm trung bình ở lô thí nghiệm. • Xử lý kết quả và rút ra kết luận.