Hiện nay có nhiều phương pháp để định lượng vitamin C như phương pháp chuẩn độ, phương pháp quang phổ UV-VIS hay HPLC. Trong đó:
Phương pháp chuẩn độ có thể dùng 2,6-Diclorophenol indophenol hoặc dung dịch iod.
Phương pháp UV-VIS có thể dùng các thuốc thử như KMnO4, K2Cr2O7 hoặc với DNPH (2,4-Dinitrophenylhydrazine).
Các phương pháp trên đều dễ thực hiện và có độ chính xác cao nhưng với điều kiện hóa chất và trang thiết bị tại phòng thí nghiệm hóa sinh 1 thì
phương pháp chuẩn độ với 2,6-Diclorophenol indophenol được chọn để định lượng vitamin C trong các mẫu trái cây.
Nguyên tắc
Việc định lượng vitamin C dựa trên tính khử của nó đối với 2,6- Diclorophenol indophenol có màu xanh bị khử bởi acid ascorbic có trong mẫu thí nghiệm thành dung dịch không màu. Ở thời điểm cân bằng khi tất cả acid ascrobic bị trung hòa thì thuốc thử màu dư thừa không bị khử có màu hồng trong môi trường acid.[9]
Chương 3: Phương tiện và phương pháp nghiên cứu
Tiến hành thí nghiệm
Cân khoảng 3 g trái cây, cho vào cối sứ sau đó cho 20 mL HCl 1% vào, ngâm khoảng 10 phút. Chắt lấy dịch ngâm giữ lại trong cốc, đem phần thịt nghiền mịn, xong chuyển sang bình định mức 100 mL cùng với dung dịch HCl vừa chiết ra. Rửa cối và tráng dụng cụ 3 lần với một ít acid oxalic 1%, tất cả cho vào bình định mức. Dùng acid oxalic để đưa lên thể tích 100 mL. Lắc kỹ, để yên 15 phút rồi lọc qua giấy lọc.
Chuẩn độ mẫu trắng: lấy 8 mL acid oxalic 1% và 2 mL HCl 1% cho vào bình tam giác dung tích 100 mL, dùng microburet với 2,6-Diclorophenol indophenol 0.001M để chuẩn độ đến khi xuất hiện màu hồng bền sau 30 giây. Đọc thể tích 2,6-Diclorophenol indophenol dùng để chuẩn độ. Lập lại thí nghiệm 3 lần lấy kết quả trung bình.
Chuẩn độ mẫu thật: Lấy 10 mL dịch lọc cho vào bình tam giác dung tích 100 mL, tiến hành chuẩn độ như mẫu đối chứng.
Tính kết quả số mg vitamin C trong 100 g mẫu được tính như sau:
m v V b a X . 100 . . 088 , 0 ). (
a: số ml 2,6-Diclorophenol indophenol chuẩn độ mẫu thật. b: số ml 2,6-Diclorophenol indophenol chuẩn độ mẫu trắng.
0,088: số mg acid ascorbic tương đương với 1 mL dung dịch chuẩn 2,6- Diclorophenol indophenol.
V: thể tích dịch chiết ban đầu.
v: thể tích dịch chiết lấy để định phân. m: trọng lượng mẫu cân ban đầu.
Tiến hành 3 lần cho mỗi mẫu phân tích.[9]
