2.2.5.1. Nguyên lý
ELISA là mộ kĩ thuật hóa sinh được sử dụng trong miễn dịch học để tìm ra sự có mặt của kháng thể hoặc kháng nguyên trong mẫu. Vào năm 1960, Rosalyn Sussman Yalow và Solomon Berson Prior mơ tả phương pháp miễn dịch có gắn
chất phóng xạ (radioimmunoassay) dùng để xác định sự có mặt của kháng nguyên, kháng thể. Trong phương pháp này, kháng nguyên hay kháng thể có thể
gắn chất đánh dấu phóng xạ và sự hiện diện của chúng được xác định thơng qua tín hiệu phóng xạ. Tuy nhiên, các chất phóng xạ lại tiềm ẩn một mối nguy hiểm lớn, chính vì vậy người ta đã nghĩ đến một phương pháp mới, trong đó tín hiệu được phát ra khơng phải là nhờ chất phóng xạ. Khi đó người ta đã biết rằng, một
số loại enzyme như peroxidase phản ứng với một số cơ chất nhất định như Tetramethylbenzidine hay 3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonic axit sẽ phát mầu. Mầu sinh ra từ các phản ứng này có thể được sử dụng làm tín hiệu nhận biết (tín
hiệu chỉ thị).
Tuy nhiên, để tín hiệu này được sử dụng như chất phóng xạ trong phép phân tích miễn dịch phóng xạ, tín hiệu mầu phát ra phải đồng nghĩa với sự có mặt của kháng ngun hay kháng thể. Chính vì vậy, giải pháp được đưa ra là: enzyme sẽ
được gắn với kháng nguyên hay kháng thể. Kỹ thuật gắn kết enzyme với kháng nguyên hay kháng thể được phát triển bởi Stratis Avrameas và G.B. Pierce. Tiếp
sau đó, vào năm 1966, Wide và Porath phát triển phương pháp gắn kháng nguyên và kháng thể trên bề mặt rắn (bề mặt của các vi phiếm hay các đĩa) nhờ
đó mà kháng nguyên hay kháng thể không được gắn kêt sẽ dễ dàng bị rửa trôi. [17]
Peter Perlmann và Eva Engvall (Thụy Điển) cùng với nhóm Anton Schuurs và Bauke van Weemen (Hà Lan) công bố phương pháp được đặt tên
ELISA (EIA) dựa trên tất cả những bước phát triển nói trên. Phương pháp chính thức ra đời vào năm 1971.[18,19]
Đối với các ELISA phát quang, ánh sáng sẽ được phát ra từ mẫu chứa kháng nguyên- kháng thể. Sự hiện diễn của phức hợp kháng nguyên- kháng thể sẽ quyết định cường độ sáng phát ra. Trước đây các cơ chất tạo mầu sắc được sử dụng trong ELISA, nhưng ngày nay các chất phát quang được dùng rộng rãi làm
tăng tính đặc hiệu và độ chính xác của ELISA.
Với nguyên lý trên, ELISA giúp xác định sự có mặt hay khơng có mặt cũng như lượng kháng nguyên trong mẫu.