127 mẫu thử Lao thưòng:
4.2.2. Phương pháp ly trích ADN
Khác với phương pháp xử lý mẫu bệnh phẩm, phương pháp ly trích ADN có ít chọn lựa hơn. Do đặc điểm cấu trúc của vách tế bào vi khuẩn lao chứa 60% lipid, có tính chất kỵ nước rất cao điều này đã làm cho việc ly giải tế bào trong quá trình ly trích ADN trở nên khó khăn.Trong nghiên cứu này chúng tôi đã chọn quy tình ly trích ADN bằng phương pháp Boom được xuất bản bởi Standard Unit (Evaluation and Standards Laboratory Centre for Infections-UK) vì phương pháp này có những ưu điểm mà chúng tôi có thể áp dụng một cách dễ dàng nhằm loại trừ những yếu tố có khả năng ảnh hưởng đến chất lượng cũng như nồng độ của ADN thu được trong dịch trích. Các loại hóa chất sử dụng trong phương pháp này như: GuSCN có khả năng ly giải tế bào rất mạnh đồng thời nó cũng có thể làm bất họat enzyme nuclease, với nồng độ GuSCN cao có trong dung dịch ly trích, ADN sẽ gắn kết rất chặt với các hạt diatom (được xem như là nucleotide acid carrier (NA-carrier) để hình thành nên phức hợp và khi mẫu thử được ly tâm phức hợp diatom - ADN này sẽ lắng một cách nhanh chóng.
Chuyên ngành Công nghệ Sinh học45 Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học
Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Tr ưòng ĐHCT Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Tr ưòng ĐHCT
-Ethanol 70% đóng vai trò quan trọng ttong việc kết tủa ADN, nhưng sau khi kết tủa, dung dịch ethanol phải bị loại bỏ hoàn toàn vì nếu không nó sẽ là nguyên nhân chủ yếu gây ức chế cho phản ứng PCR. Ở bước rửa cuối cùng dung dịch aceton phải được làm khô hoàn toàn. Đe giải hấp ADN điều quan trọng là mẫu thử phải được vortex thật kỷ trong dung dịch TE IX.
Tóm lại phương pháp mà chúng tôi thực hiện trong nghiên cứu này là phương pháp ly trích ADN đơn giản dễ thực hiện, hạn chế sự ngoại nhiễm do thao tác trên một ống nghiệm duy nhất và có thể làm giảm tối đa các chất có khả năng gây ức chế cho phản ứng PCR.