Các thành phần môi trường, nồng độ các chất điều hòa sinh trưởng thực vật (PGR), điều kiện nuôi cấy, giai đoạn sinh lý của nguồn mẫu cũng như các mô hay cơ quan dùng để nuôi cấy là các yếu tố làm ảnh hưởng đến việc ra hoa in vitro. Do đó, trong điều kiện nuôi cấy in vitro, các quy trình được kiểm soát và quản lý chặt chẽ để nghiên cứu việc ra hoa, cảm ứng hoa và phát sinh hình thái của hoa. Nó cũng có thể được áp dụng như một công cụ để đẩy nhanh quá trình nhân giống hoặc có thể được điều chỉnh để sản xuất các sản phẩm có nguồn gốc từ hoa. Các nồng độ và tỷ lệ các chất điều hòa sinh trưởng thực vật giảm trong môi trường đã được tìm thấy có mối tương quan chặt chẽ với sự sinh trưởng và phát triển các cơ quan hoa từ chồi hoặc mô sẹo. Gần đây, mức độ tăng trưởng đã được chứng minh là ảnh hưởng đến điều hòa gen và phát triển cơ quan trong nuôi cấy in vitro. Điều này bao gồm các khía cạnh khác nhau trong việc kiểm soát sự phát triển hoa và phát triển của các tế bào ngầm trong đất khi nuôi cấy in vitro. Nó nhấn mạnh tầm quan trọng của hệ thống nuôi cấy mô như dụng cụ để nghiên cứu nhiều khía cạnh khác nhau của việc ra hoa có kiểm soát tiến tới tiềm năng của cây có thân ngầm trong đất đưa vào các ngành công nghiệp trang trí, thực phẩm, dược liệu và CN ghép cành. Giai đoạn phát sinh hình thái hoặc quá trình ra hoa, là một trong những giai đoạn quan trọng trong phát triển thực vật, chu kỳ sống và sản xuất giống. Quá trình này liên quan đến sự cảm ứng và phát triển của hoa và cơ quan của chúng đã nghiên cứu và ứng dụng cho nhiều thực vật nuôi cấy in vitro. Những tiến bộ trong kỹ thuật nuôi cấy tế bào mô thực vật cung cấp một hệ thống tuyệt vời để nghiên cứu các khía cạnh sinh lý và sinh học phân tử của thực vật, bao gồm cả việc ra hoa.
Đồ án: Ra hoa in vitro có thân ngầm đất Mục lục LỜI CẢM ƠN LỜI MỞ ĐẦU I/ GIỚI THIỆU II/ NỘI DUNG .7 Điều kiện in vitro Sự tăng trưởng thực vật hoa in vitro Giai đoạn phát triển Tỷ lệ C / N mức khoáng chất 11 Hình thái hoa in vitro 12 III/ RA HOA IN VITRO TREN SỐ LỒI CĨ THÂN NGẦM DƯỚI ĐẤT 13 Tre (Bambusa spp) 13 Rau diếp xoăn (Cichorium intybus) .15 Diên hồ sách (Corydalis yanhusuo) 16 Nghệ tây (Crocus sativus) .17 Hoa diên vĩ (Iris) .18 Kniphofia leucocephala 19 Hoa loa kèn (Lilium x cv Star Gazer) 20 Hoa lan (Orchids) 21 Cymbidium spp 22 10 Doritis pulcherimma x Kingiella philipinensis .23 11 Ornithogalum arabicum 23 12 Nhân sâm (Panax ginseng) .24 13 Hyacinthus orientalis (lục bình) .25 14 Allium 25 TÀI LIỆU THAM KHẢO 27 Đồ án: Ra hoa in vitro có thân ngầm đất DANH MỤC CHÚ THÍCH A/ CHÚ THÍCH TÊN VIẾT TẮT PGR: Plant growth Regulators: chất điều hòa sinh trưởng thực vật TCL: Thin Cell Layer: Nuôi cấy mô lát mỏng tế bào TC: Tissue Culture: Nuôi cấy mô Cytokinin, gibberellin auxin: Các chất kích thích sinh trưởng MS: Mơi trường ức chế hoa thúc đẩy tăng trưởng thực vật NAA: α-Naphthalene Acetic Acid 2,4-D: 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid KN: Kinetin DFMO: Di-Flouro-me-thyl-Ornithine IBA: Indole Butyric Acid DFMA: Di-Flouro- me thyl-Arginine IAA:Indole Acetic Acid SAM: S-Adenosyl methionine GA: Gibberellic Acid DNP: Day Neutral Plant CM: Coconut Milk PBA: (n-benzyl-9-(2- BA: N6-Benzyl Adenine terahydropropanyl)-adenine B/ CHÚ THÍCH BẢNG 1 +: Tác động tích cực; -: Tác động tiêu cực; ?: Tác động không rõ ràng Adenine thêm vào CM: Sữa dừa Kinetin, BA, Zeatin, PBA adenine tác động hiệu LỜI CẢM ƠN Với lòng biết ơn sâu sắc nhất, chúng em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến TS Trịnh Thị Lan Anh, giảng viên Trường ĐH Công nghệ Tp HCM người giảng Đồ án: Ra hoa in vitro có thân ngầm đất dạy, nhiệt tình hướng dẫn q trình học hồn thành đồ án Công nghệ sinh học thực vật Trong thời gian làm đồ án, em nhận nhiều giúp đỡ, đóng góp ý kiến bảo nhiệt tình anh chị, đến chúng em hồn thành đồ án Cảm ơn phịng thí nghiệm hỗ trợ em thực tốt đồ án Chúng em xin chân thành cảm ơn! LỜI MỞ ĐẦU Ra hoa in vitro có nhiều thuận lợi, đặc biệt số lồi có giai đoạn trưởng thành dài có thân ngầm đất Các nghiên cứu đánh giá cho thấy Đồ án: Ra hoa in vitro có thân ngầm đất điều kiện nuôi cấy in vitro rút ngắn thời gian trưởng thành có thân ngầm đất Các thành phần mơi trường, nồng độ chất điều hịa sinh trưởng thực vật (PGR), điều kiện nuôi cấy, giai đoạn sinh lý nguồn mẫu mô hay quan dùng để nuôi cấy yếu tố làm ảnh hưởng đến việc hoa in vitro Do đó, điều kiện ni cấy in vitro, quy trình kiểm sốt quản lý chặt chẽ để nghiên cứu việc hoa, cảm ứng hoa phát sinh hình thái hoa Nó áp dụng công cụ để đẩy nhanh q trình nhân giống điều chỉnh để sản xuất sản phẩm có nguồn gốc từ hoa Các nồng độ tỷ lệ chất điều hịa sinh trưởng thực vật giảm mơi trường tìm thấy có mối tương quan chặt chẽ với sinh trưởng phát triển quan hoa từ chồi mô sẹo Gần đây, mức độ tăng trưởng chứng minh ảnh hưởng đến điều hịa gen phát triển quan ni cấy in vitro Điều bao gồm khía cạnh khác việc kiểm soát phát triển hoa phát triển tế bào ngầm đất ni cấy in vitro Nó nhấn mạnh tầm quan trọng hệ thống nuôi cấy mô dụng cụ để nghiên cứu nhiều khía cạnh khác việc hoa có kiểm sốt tiến tới tiềm có thân ngầm đất đưa vào ngành cơng nghiệp trang trí, thực phẩm, dược liệu CN ghép cành Giai đoạn phát sinh hình thái trình hoa, giai đoạn quan trọng phát triển thực vật, chu kỳ sống sản xuất giống Quá trình liên quan đến cảm ứng phát triển hoa quan chúng nghiên cứu ứng dụng cho nhiều thực vật nuôi cấy in vitro Những tiến kỹ thuật nuôi cấy tế bào mô thực vật cung cấp hệ thống tuyệt vời để nghiên cứu khía cạnh sinh lý sinh học phân tử thực vật, bao gồm việc hoa I/ GIỚI THIỆU Tổng quan tập trung vào việc nuôi cấy có thân ngầm đất bẳng phương pháp ni cấy in vitro Nhiều tế bào thân ngầm đất có giá trị thương Đồ án: Ra hoa in vitro có thân ngầm đất mại quan trọng ngành cơng nghiệp trang trí, thực phẩm, dược liệu CN ghép cành Các giai đoạn nhân giống liên tục sử dụng để cải thiện đặc điểm chất lượng Tuy nhiên, giai đoạn trưởng thành chúng thường kéo dài qua trình nhân giống việc sử dụng đột biến cho nghiên cứu thực tế Kỹ thuật hoa in vitro công cụ quan trong mục tiêu Hệ thống bao gồm nuôi cấy mẫu thực vật vô trùng, phận quan rễ, lá, chồi hoa bình vơ trùng với mơi trường xác định kiểm soát (Ziv Altman, 2003) Để nghiên cứu khía cạnh khác việc hoa, loài thực vật chồi sinh sản nuôi cấy môi trường khác bao gồm thành phần vô cơ, hữu chất điều hịa sinh trưởng thực vật (PGR) Mục đích nghiên cứu tạo kiểm sốt q trình hình thành hoa thực vật Các nghiên cứu thực với loài thực vật có yêu cầu ánh sáng nhiệt độ khác nhau, nghiên cứu nghiên cứu phân lập giai đoạn sinh lý khác Ngồi ra, ni cấy mơ lát mỏng tế bào (TCL) từ phận thực vật quan sinh sản trưởng thành sử dụng cho nghiên cứu hoa in vitro (Trần Thanh Vân, 1999) Tuy nhiên, hoa in vitro khơng phải tượng phổ biến Nó xảy cách tự nhiên có chủ ý số loài cỏ thảo mộc (de Fossard, 1974; Scorza; 1982, Dickens van Staden, 1988; Rastogi Sawheny, 1989; Taixeira da Silva, 2003) Việc hoa có chủ ý ni cấy phục vụ công cụ để nghiên cứu cảm ứng phát triển hoa để kiểm sốt quy trình ni cấy lồi có thời kỳ trưởng thành dài chồi có thân ngầm đất (Lin et al 2003b) Một ứng dụng khác việc trồng hoa ống nghiệm sản xuất chất thứ cấp từ nghệ, nơi nuôi cấy hoa in vitro lợi nguồn sản xuất thương mại đầu nhụy với hợp chất thơm sắc tố Sự tăng trưởng trực tiếp quan sinh sản quy trình, phát triển cho nhân sâm tre, phục vụ nguồn sản xuất hợp chất dược phẩm (Lin et al 2003a) Ngược lại, hoa in vitro lồi khác khơng mong muốn sản xuất thương mại loài tre non (Chambers et al 1991) hoa Ornithogalum Gần nghiên cứu với hoa Ornithogalum, chồi sinh sản phát triển làm giảm tỷ lệ nhân giống sinh dưỡng Cây Đồ án: Ra hoa in vitro có thân ngầm đất có thân ngầm đất loài thực vật lâu năm với quan lưu trữ đất chồi thay Chúng nhân giống tồn khơng hạt mà cịn quan lưu trữ đất giả hành, thân củ, rễ củ (Raunkiaer, 1934) Bao gồm số hoa lan có cụm mọc từ giả hành (psedudobulb) loài tre lâu năm Chức quan lưu trữ lưu trữ chất dinh dưỡng nước cho tăng trưởng đảm bảo sống mùa có điều kiện mơi trường khắc ngiệt Các quan lưu trữ, phân loại theo cấu trúc hình thái chúng, thường chia thành nhóm củ giả hành (De Hertogh Le Nard, 1993) Cây có thân ngầm đất bao gồm hai loài mầm hai mầm Tùy theo điêu kiện khí hậu mơi trường mà chồi có giai đoạn sinh trưởng Những chế bao gồm quan lưu trữ lòng đất, nhận thức dấu hiệu thời tiết theo mùa Cảm ứng hoa nhiều có thân ngầm đất điều chỉnh phương diện môi trường thời lượng chiếu sáng, nhiệt độ, hai ( Le Nard De Hertogh 1993 ) Ở loài khác, hoa kiểm sốt tín hiệu lồi Trong đánh giá, Hartsema (1961) chia có thân ngầm đất thành nhóm thời gian bắt đầu hoa khác liên quan đến giai đoạn phát triển Sự hiểu biết mơ hình phát triển thực vật điều cần thiết cho việc nghiên cứu cảm ứng hoa phát triển nuôi cấy hoa in vitro II/ NỘI DUNG Lựa chọn nguồn mẫu để nuôi cấy định theo mục tiêu nghiên cứu khả tái sinh chồi trực tiếp hay gián tiếp thông qua mơ sẹo Các mẫu cấy quan, phần quan, lát mỏng mô (bao gồm TCL) tế bào Tuy nhiên, theo Dickens Van Staden (1988), để nghiên cứu hoa, trồng phải có nguồn gốc từ hạt giống, nghiên cứu phát triển hoa cần phải có từ trưởng thành phận hoa nụ hoa, đài hoa cánh hoa Cây thân ngầm đất có giai đoạn phân biệt rõ ràng từ giai đoạn trưởng thành Do đó, việc lựa chọn mẹ tương đối đơn giản phải xem xét theo mục tiêu nghiên cứu Khả phục hồi quan hoa thơng qua việc kích thích hoa chứng minh suốt q trình ni cấy liên tục Ở số loài tượng kéo dài nhiều năm (ví dụ, Đồ án: Ra hoa in vitro có thân ngầm đất Cymbidium 22 năm, Kostenyuk et al, 1999) Ngược lại, hoa in vitro bị biến đổi nhanh sau lồi ni Passiflora, bốn Saccharum spp (Scorza, 1982) Tuy nhiên, cẩm chướng non tăng trưởng nuôi cấy mô TC, sản xuất hoa vị trí khác thường tiếp tục cho ni cấy cấp hai nhiều hai năm ( Daksha et al, 1994 ) Điều kiện in vitro Ưu điểm kỹ thuật nuôi cấy mô khả điều chỉnh điều kiện môi trường thành phần môi trường chất dinh dưỡng, vitamin, gia tăng làm giảm chất điều hòa sinh trưởng thực vật Các thành phần môi trường, điều kiện tăng trưởng nguồn mẫu ảnh hưởng đến phát sinh hình thái Những nghiên cứu ban đầu Aquilegia (Tepfer et al, 1963, tóm tắt Rastogi Sawheny 1989, Tepfer et al, 1966) nghiên cứu gần Hyacynthus (Lu et al 1988, 2000) cho thấy thành phần môi trường khác cần thiết để thúc đẩy phát triển lồi hoa khác Do đó, mơ hình phát triển phụ thuộc vào thành phần môi trường thay đổi thành phần mơi trường thay đổi biểu hình thái Mặc dù thành phần khác nhau, hoạt tính, yếu tố khác ( chẳng hạn tỷ lệ chất điều hòa sinh trưởng, nhu cầu dinh dưỡng, pH, nhiệt độ ánh sáng ) phải nghiên cứu riêng lẻ loài chí loại trồng (Rastogi Sawheny, 1989 ) Sự tăng trưởng thực vật hoa in vitro Vai trị chất điều hồ sinh trưởng thực vật tái tạo phát triển quan hoa in vitro thảo luận rộng rãi đánh giá trước (de Fossard 1974, Scorza, 1982; Dickens Van Staden, 1988; Rastogi Sawheny, 1989; Taixeira da Silva, 2003; Naor et al, 2004) Chất điều hòa sinh trưởng thực vật thường sử dụng nhiều cho hoa ống nghiệm cytokinin, gibberellin auxin Ở số chất GA3 IAA ức chế giảm hoa, chất cịn lại xem chất kích thích tăng trưởng (de Fossard, 1974; Scorza, 1982; Dickens Van Staden, 1988; Naor et al, 2004) Các nghiên cứu trước cho thấy mối tương quan nồng độ chất điều hịa sinh trưởng thực vật thay đổi hình thái hoa (Tepfer et al, 1966; Bilderback, 1972; Sano Himeno, Đồ án: Ra hoa in vitro có thân ngầm đất 1987; Lu et al, 1988; Lee et al, 1990, 1991; tóm tắt Dickens Van Staden 1988; Duan Yazawa, 1994; Kostenyuk et al, 1999; Lu et al, 2000; Luo Lan 2000; Tang, 2000; Chang Chang, 2003; Lin et al, 2003b, 2004, 2005) Sử dụng công cụ sinh học phân tử, nghiên cứu gần Hyacinthus chứng minh mối quan hệ qua lai chất sinh trưởng thưc vật phát triển quan hoa (Li et al, 2002; Xu et al, 2004) Có vẻ thay đổi tỷ lệ chất sinh trưởng thực vật cần thiết cho phát triển vỏ quan hoa khác Bảng tóm tắt tham gia chất sinh trưởng thực vật khác việc nở hoa chồi ống nghiệm Khi mẫu cấy chồi quan chất sinh trưởng thực vật ảnh hưởng đến hình thái phát triển quan khác hoa Tuy nhiên, mô cấy chồi sinh dưỡng mô, chất sinh trưởng thực vật ảnh hưởng giai đoạn gây cảm ứng hoa, phát triển quan hoa, hai Trong số trường hợp nuôi cấy hoa in vitro xảy mơi trường khơng có chất sinh trưởng thực vật (Bảng 1), dường xảy phản ứng quan hệ nội sinh chất sinh trưởng thực vật yếu tố sinh lý khác chồi Gibberellin kích thích tăng trưởng phát triển hoa in vitro Zantedeschia tương tự ảnh hưởng tế bào (Naor et al, 2004) gibberellin cytokinin kích thích hoa ống nghiệm Orichophragmus violaceus dường thay điều trị lạnh (Luo Lan, 2000) Giai đoạn phát triển Thực vật hạt kín qua ba giai đoạn vịng đời chúng: non, trưởng thành, sinh sản (Poethig 1990, Simpson et al 1999.).Thời gian giai đoạn thay đổi từ giai đoạn ngắn đến giai đoạn dài kéo dài nhiều năm (Scorza, 1982) Cây thân thảo hàng năm thường có giai đoạn chưa trưởng thành ngắn (nếu có), coi hình thành hoa giai đoạn tăng trưởng chúng Ngược lại, thân thảo lâu năm, bao gồm chồi non thân gỗ, giai đoạn chưa trưởng thành khác biệt rõ ràng với giai đoạn trưởng thành Ở chồi có thân ngầm đất chưa trưởng thành (tức khơng có khả nở hoa điều kiện tự nhiên) thường kéo dài 1-3 năm, loài có thời gian dài biết: Urginea (Dafni et al, 1981), Bambusa Đồ án: Ra hoa in vitro có thân ngầm đất (Nadgauda et al, 1990), Tulip (Fortanier, 1973; Le Nard De Hertogh, 1993).Sự chuyển đổi từ giai đoạn chưa trưởng thành sang giai đoạn trưởng thành thực vật kiểm soát hệ thống nội sinh (Simpson et al 1999).Về mặt sinh lý, thay đổi từ chưa trưởng thành đến trưởng thành thể thay đổi từ khơng có lực thành có lực (Poethig, 1990) Mơ phân sinh có khả đáp ứng với tín hiệu mơi trường tự trị mà cuối dẫn đến hình thành hoa Quá trình hoa thể thay đổi hình thái sinh lý phát triển mô phân sinh chồi (Simpson et al, 1999) Cuối cùng, sau hình thành quan hoa, hầu hết trường hợp, thay đổi thực cách chấm dứt hoạt động phân sinh (Poethig, 1990) Trong tế bào chồi dưới, chưa trưởng thành biểu quan lưu trữ đáy cho hoa mô phân sinh chồi (Halevy 1990, LangensGerrits et al 2003) Ở số loài, chồi chưa trưởng thành biểu số lượng củ ngưỡng quan trọng (Le Nard De Hertogh, 1993; Langens-Gerrits et al, 2003) Kích thước củ tối thiểu cho việc hoa chi loài phụ thuộc vào loài thay đổi theo điều kiện giống môi trường (Le Nard De Hertogh, 1993) Tuy nhiên, Langens-Gerrits et al( 2003 ) cho thấy Lilium phát triển ống nghiệm, tuổi sinh lý học góp phần tạo nên thay đổi từ giai đoạn trưởng thành có kích thước bầu dục Các nghiên cứu gần Zantedeschia báo cáo hoa in vitro để đáp ứng với ứng dụng GA3 Các tác giả chồi, ngoại trừ cụm chồi nuôi cấy môi trường (BA) nồng độ cao cho hoa kích thước, vị trí chúng (Naor et al, 2005) Cây trưởng thành có thân ngầm mang đặc tính củ hạt củ hạt phát triển vơ tính từ trưởng thành rễ củ nhỏ củ lớn từ mô nuôi cấy chưa trưởng thành Vì vậy, tế bào ni cấy mơ đảo ngược giai đoạn trưởng thành thành giai đoạn chưa trưởng thành làm khả nở hoa điều kiện tự nhiên nuôi cấy mô (Chang Hsing 1980; Nadgauda et al, 1990), trái ngược với gỗ (Poethig, 1990).Tuy nhiên, giai đoạn chưa trưởng thành chồi Lilium tái tạo nuôi cấy mô thực vật ngắn nhiều so với giai đoạn nuôi cấy điều kiện tự nhiên (Langens-Gerrits et al 2003) Từ mô sinh sản hình thành đến mơ sinh dưỡng dùng loai có thân Đồ án: Ra hoa in vitro có thân ngầm đất ngầm đất Allium ampeloprasum, Dichelostemma multiflorum, Eucrosia radiate, Gladiolus grandiflorus, Haemanthus coccineus, Hyacinthus orientalis, Narcissus tazetta, Nerine sariniensis, Ornithogalum dubium, (Ziv Lillien-Kipnis 1997, 2000), Allium cepa (Keller 1990), A sativum (Xu et al 2005), A ampeloprasum (Ziv et al 1983), Amaryllis (Bapat) Narayanaswamy 1976), Bambosa (Prutpongse Gavinlertvatana, 1992), Iris enstata (Kawase et al,.1995; Boltenkov Zarembo, 2005), Iris setosa Iris sanguinea (Boltenkov Zarembo, 2005).Trong nghiên cứu này, phận quan hoa phân đoạn cuống hay đài hoa sử dụng làm nguồn phát tán Điều trái ngược với chồi trồng, nơi vơ khó khăn để đảo ngược tăng trưởng đến giai đoạn sinh dưỡng, sau chồi hoàn toàn chuyển đổi giai đoạn sinh sản (Rastogi Sawheny 1989, Poethig 1990) Ở nhiều lồi hoa chuyển từ mẹ sang nuôi cấy mô thực vật (Dickens Van Staden, 1988; Daksha et al, 1994) Tỷ lệ C / N mức khống chất Mơi trường ni cấy mơ chứa nguồn khống chất đường, ngồi cịn có chất điều hòa sinh trưởng thành phần khác Người ta khám phá hoa in vitro chịu ảnh hưởng nồng độ tỷ lệ hai thành phần carbohydrate khống chất Nồng độ nitơ cao môi trường MS ức chế hoa thúc đẩy tăng trưởng thực vật, cạnh tranh hiệu cho carbohydrate từ môi trường (Dielen, 2001) Theo giả thuyết chuyển hóa dinh dưỡng hoa, tỷ lệ C / N tăng chồi q trình kích thích hoa (Sachs,1977) Do đó, sử dụng mơi trường MS có nồng độ cao (Murashige Skoog, 1962) giảm hàm lượng nitơ tăng cường nở hoa in vitro chồi Bambusa vulgaris, Dendrocalamus giganteus, D strictus (Rout Das, 1994), Cymbidium (Kostenyuk et al, 1999), Doritis (Duan Yazawa, 1994), nhân sâm (Chang Hsing, 1980), Orichophragmus violaceus (Luo Lan, 2000) cà chua (Dielen et al, 2001) Ngược lại, khác biệt tỷ lệ nở hoa in vitro Bambusa edulis quan sát kết nồng độ sucrose nitơ khác môi trường (Lin et al, 2003b) Photpho cao mơi trường tìm thấy để kích 10 Đồ án: Ra hoa in vitro có thân ngầm đất nghiên cứu yếu tố liên quan đến khả mô phân sinh nghiên cứu Những kết đóng góp vào nghiên cứu thay đổi nội sinh PGR hệ thống di truyền mô phân sinh đỉnh trước hoa in vivo in vitro Hoa lan (Orchids) Nhiều lan coi có thân ngầm(các chồi sống qua mùa đơng nằm mặt đất, thông thường gắn với thân hành, thân củ v.v ) thân rễ thân hành giả (pseudobulb) hoạt động quan lưu trữ Một số nghiên cứu nuôi cấy hoa in vitro hoa lan báo cáo bao gồm bốn loài geophytic (Duan Yazawa 1994, 1995b, Kostenyuk I, 1999, Chang Chang, 2003) Phải 3-13 năm để tạo hoa từ hạt giống, làm cho chương trình nhân giống chậm (Duan Yazawa 1995b, Kostenyuk et al, 1999, Chang Chang 2003) Thời kỳ chưa trưởng thành rút ngắn đáng kể mô cấy vi mô (Duan Yazawa 1994, Yu Goh, 2001) Các hệ thống in vitro sử dụng để nghiên cứu sở sinh lý phân tử trình hoa phong lan, thúc đẩy hoa hoa lan trưởng thành chậm cải thiện khả kiểm soát thời gian hoa (Mudalige Kuehnle, 2004) Các sở phân tử hoa hoa lan 20 Đồ án: Ra hoa in vitro có thân ngầm đất xem xét gần Yu Goh (2001) Mudalige Kuehnle (2004) Bảy mươi gen nhân từ chi số liên quan đến hoa Thơng tin biểu gen trình chuyển đổi sang hoa thiết lập Dendrobium spp sử dụng hệ thống hoa in vitro (Yu Goh 2000) Cymbidium spp Trong tự nhiên, thời kỳ chưa trưởng thành Cymbidium niveo-marginatum C ensifolium var misericors kéo dài 4-7 năm Các nghiên cứu cho thấy hoa in vitro sau 40-100 ngày từ nuôi cuối (Kostenyuk et al.1999, Chang Chang 2003) Hiện tượng thể thí nghiệm C niveomarginatum sử dụng 22 năm nuôi cấy phụ (Kostenyuk et al 1999) từ calli có nguồn gốc từ rễ C ensifolium var misericors (Chang Chang 2003) Các hệ thống in vitro sử dụng để nghiên cứu vai trò PGR việc phát triển phát triển hoa Vì lan Cymbidium coi không phụ thuộc vào ánh sáng mặt trời (DNP) (Dole Wilkins, 2004), nên vai trò PGR cần thiết cho nghiên cứu kiểm soát di truyền để cải thiện trồng (Ko-stenyuk et al, 1999) C niveo-marginatum phản ứng với cytokinin auxin khác với C ensifolium var misericors Trong cấy hoa in vitro xảy lồi với có mặt NAA cytokinin khác nhau.Trong C niveo-marginatum với 44,4 µM 21 Đồ án: Ra hoa in vitro có thân ngầm đất BA cho kết tốt (Kostenyuk I 1999), cụm hoa C ensifolium var misericors phát triển với diện 10 µM 2iP (N6- (2-sopentenyl) adenine), với BA mơi trường (Chang Chang 2003) Khơng có cụm hoa quan sát thấy diện NAA môi trường (Chang Chang 2003, Kostenyuk et al 1999), vai trị auxin khởi đầu phát triển hoa không rõ ràng TDZ có hiệu cho việc khởi đầu hoa hai lồi Tuy nhiên, dẫn đến phát triển C niveo-marginatum nụ hoa héo sau thời gian ngắn (Kostenyuk et al 1999) Sự khác biệt phản ứng liên quan đến lồi, nguồn gốc mô cấy, giai đoạn sinh lý mẹ Phản ứng tích cực với cytokinin phù hợp với báo cáo khác việc hoa sớm hoa lan sử dụng cytokinin cao (Duan Yazawa, 1995a) Tuy nhiên, loài này, khơng rõ liệu cytokinin có cần thiết cho phát triển hoa phát triển hoa hay không.(Kostenyuk et al.1999) Nó gợi ý GA3 tương tác với PGR khác cảm ứng hoa phát triển C niveo marginatum Giảm lượng nitơ thúc đẩy hoa in vitro C niveo-marginatum BA có mặt môi trường Nguồn P cung cấp điều kiện thuận lợi cho việc trồng hoa ống nghiệm Cymbidium (Kostenyuk et al 1999, Chang Chang 2003) 10 Doritis pulcherimma x Kingiella philipinensis 22 Đồ án: Ra hoa in vitro có thân ngầm đất Ảnh hưởng thành phần môi trường đến phát triển hoa nghiên cứu Doritis pulcherrima x Kingiella philippiensis (xDoriella Tiny) có nguồn gốc từ cuống hoa Những hoa in vitro thể màu sắc, kích cỡ hình dạng bình thường so sánh với hoa điều kiện tự nhiên (Duan Yazawa, 1994, 1995b) Trong hoa in vitro xảy sau 6-7 (Duan Yazawa, 1994) 10-12 (Duan Yazawa, 1995b) tháng phịng ni trái ngược với năm điều kiện tự nhiên Tuy nhiên, nụ héo từ chuyển sang môi trường khơng có BA Chồi hoa quan sát thấy mơi trường nitơ thấp bổ sung với 14,4 µM BA sau 80 ngày Nồng độ nitơ tối ưu 6-9 mM có lợi tỷ lệ cao ion NH4 + / NO3- bổ sung Ngoài ra, loại bỏ rễ kích thích hình thành nụ hoa in vitro Các tác giả kết luận BA cần thiết cho hình thành nụ hoa ức chế phát triển hoa hoàn chỉnh 11 Ornithogalum arabicum Các tín hiệu mơi trường liên quan đến cảm ứng hoa GA3 thay cho tín hiệu bên ngồi sử dụng hoa in vitro (Halaban et al, 1965) Sự chuyển đổi từ giai đoạn sinh dưỡng sang giai đoạn sinh sản nụ Ornithogalum xảy bên củ mùa trước hoa Sự thay đổi phát triển tượng quang hợp theo điều kiện nhiệt động cụ thể để kích thích, bắt đầu kéo dài cụm hoa Các tác giả thấy 16 tuần 30ºC gây thay đổi giai đoạn nụ cắt bỏ ống nghiệm Cụm hoa phát triển in vitro nụ giữ tuần 20ºC, sau tuần 13ºC Tốc độ 23 Đồ án: Ra hoa in vitro có thân ngầm đất phát triển hoa ống nghiệm tăng lên với kích thước đầu chồi (một đầu chồi lớn tạo thành từ đỉnh) Các mơ vảy đóng góp vào tốc độ tăng so với nguyên thủy Các cụm hoa phát triển môi trường với yếu tố vĩ mô Knop (Knop, 1865) vi mô Heller (Heller, 1953), bổ sung 2% sucrose agar 0,8% Tuy nhiên, hoa in vitro thể chồi Trong nghiên cứu GA chất điều chỉnh tăng trưởng thử nghiệm GA3 (0,29 mM) khơng thể kích thích hoa ống nghiệm mà gây tắc nghẽn mô phân sinh ức chế kéo dài Khơng có khác biệt hoa quan sát thấy đỉnh 12 Nhân sâm (Panax ginseng) Rút ngắn thời gian chưa trưởng thành phương pháp điều chỉnh khơng khí (CA) Các chương trình nhân giống nhân sâm có khoảng thời gian thuận lợi năm (Chang Hsing, 1980) Hoa nhân sâm in vitro lấy từ phát triển từ nguồn giống chưa trưởng thành (Lee et al, 2003a, 2005) Nuôi cấy hoa in vitro thời kỳ chưa trưởng thành rút ngắn thu trực tiếp từ phôi zygotic (Lee cộng 1991), gián tiếp từ phôi soma (Lee cộng 1990, Tang 2000) Nuôi cấy in vitro từ nguồn thực vật trưởng thành thu từ phôi soma có nguồn gốc từ mơ sẹo gốc trưởng thành (Chang Hsing 1980, Lin et al 2005) khuếch đại từ cụm hoa phát triển từ trồng trưởng thành 24 Đồ án: Ra hoa in vitro có thân ngầm đất (Lin et al 2003a) Hoa xuất sau 1-1.5 tháng nuôi cấy mơi trường có nửa nồng độ MS, nồng độ B5 đầy đủ MS trung bình BA (4.4-5 µM) môi trường cần thiết cho phát triển hoa, hiệu bị chặn µM ABA (Lee et al, 1991) BA thay thành cơng 0,5-4,5 µM TDZ với diện 0,3-2,9 µM GA3 (Lin et al 2005) GA (5 µM) cần thiết có diện ABA (Lee et al, 1991) Tuy nhiên, Tang (2000) cho thấy tỷ lệ thấp (ít 6%) hoa in vitro diện 5.8 11,6 µM GA3, có nguồn gốc từ chồi phơi soma Điều cho thấy vai trị gibberellin cảm ứng phát triển hoa không rõ ràng Sự hình thành hoa in vitro bị ức chế nồng độ NAA cao (27 µM) Ngược lại, liều thấp (5.4 µM) dường khơng có hiệu (Lin et al 2005) Những bơng hoa hình thành nhánh nách dài Chúng nhỏ vài lần so với hoa in vivo, mang lỗ hổng phát triển tốt (Lee et al, 1990) với phấn hoa màu mỡ (Chang Hsing, 1980) Trái non chưa trưởng thành phát triển từ hoa (Lee et al, 1990, 1991), cuối thối hóa trước trưởng thành Phấn hoa vô trùng quan sát thấy cụm hoa khuếch đại trực tiếp từ cụm hoa khác (Lin et al, 2003a) 13 Dạ lan (Hyacinthus orientalis) Sự tái sinh quan hoa hoa hồn chỉnh Hyacinthus từ phân đoạn bao hoa (Lu et al, 1988).Sự phát sinh quan trực tiếp được quan sát vịng 50-200 ngày ni cấy, cung cấp hệ thống nghiên cứu yếu tố kiểm soát phát triển hoa Hoa lục bình phát triển bốn vòng liên 25 Đồ án: Ra hoa in vitro có thân ngầm đất tiếp Việc chuyển từ vịng sang vịng khác kiểm sốt mặt di truyền qua trung gian thông qua thay đổi mức độ PGR Ở Hyacinthus nồng độ BA cao (8,9 µM) auxin (2,4-D, 0,5 µM) dẫn đến phát triển cánh hoa không xác định ống nghiệm Một mức độ cao BA (8.9 µM) mức độ thấp auxin (2,4-D 0,5 mm) khiến nhị hoa (Lu et al, 2000) noãn (Lu et al, 1988) phát triển Các tác giả cho thấy kiểm soát phytohormone phát triển quan hoa hồn tồn phụ thuộc vào nồng độ Khi khơng có thay đổi nồng độ hormone, quan hoa cụ thể phân biệt không xác định sản xuất 100 cánh hoa, 20 nhụy hoa, 40 noãn hoa (Lu et al, 1988, 2000) 14 Allium Allium sativum (Tizio, 1979) Allium ampeloprasum ( Ziv et al, 1983; Ziv Lillien – Kipnis, 2000) báo cáo việc hoa in vitro Trong hình thành hoa, Allium satium cạnh tranh với phát triển thân ngầm bổ sung 10-5 M GA3 adenine biotin môi trường, adenine đối kháng GA3 tăng cường hình thành củ (Tizio, 1979) Nụ hoa A ampeloprasum hình thành từ mơ phân tử hoa giai đoạn đầu quan sinh sản với việc thêm vào 5,4 µM NAA 25,0 µM BA môi trường Trong khám phá này, đảo ngược hình thành nụ sinh dưỡng khơng thành công (Ziv Lillien-Kipnis, 2000) Các chồi thực vật phát triển từ đoạn thân hoa (A ampeloprasum, Ziv 26 Đồ án: Ra hoa in vitro có thân ngầm đất et al 1983), từ mô nằm mảng hoa (A ampeloprasum, Ziv Lillien-Kipnis, 2000, A sativum, Xu et al 2005) BẢNG Phản ứng phát triển mơi trường có PGR Nguồn Gibbereli Cytokinin Auxin Loài mẫu Tác giả n Hoa Allium sativum cạnh tranh Cuống hoa GA3+ KN- Tizio 1979 với củ Allium ampeloprasum Nụ hoa Bambusa vulgaris, Dendrocalamus giganteus, D strictus với hoa B arundinacea, Hoa D brandisii với hoa Cơ quan BA+ sinh sản Hạt giống GA3+ IBA+ Rout and Das 1994 hạt với hoa; Gốc rề từ Độ lớn trưởng hoa thành Hoa Hạt giống Nadgauda et al Hạt giống BA+,CM+ NAA+, GA3+ TDZ+ NAA tương tác Lin et al 2003a, b, với TDZ Cichorium intybus Ziv and Lilien-Kipnis Hoa Hoa B edulis NAA+ Bais et al 2000 GA3+ Mô phân sinh hoa, Crocus sativus Hoa BA + NAA + phận Sano and Himeno1987, Plessner and Ziv hoa Thân rễ nuôi cấy 22 Cymbidium spp Hoa năm, củ Không + ngầm phản ứng với IAA đất 27 1974, Kostenyuk et al 1999, Chang and Chang Đồ án: Ra hoa in vitro có thân ngầm đất Doritis pulcherimma x Kingiella philippinnsis Hoa Thân hoa Duan and Yazawa, 1994,1995b + Hoa Hyacinthus orentalis Hoa BA+ 2,4-D+ Hoa Hạt giống BA/TDZ + tương tác với GA3 Liều cao - Hoa chưa Bộ phận trưởng mô phân thành Hoa chưa sinh phận hoa Panax ginseng Kniphofia leucocephala Zantedecchia spp phân hóa Củ thân GA3+ (GA1, GA3, GA4 Lu et al 1988, Li et al 2000, 2002, Xu et al 2004 Chang and Hsing1980, Lee et al 1990, 1991, Tang 2000, Lin et al 2005 BA+ Taylor et al 2005 BA tương tác với GA3) Naor et al 2004 ngầm giới tính Phản ứng phát triển mơi trường khơng có PGR (sử dụng mơi trường cảm ứng) Cichorium intybus Hoa Mô rễ Dendrocalamus hamiltonii Hoa Hạt giống Iris Hoa Củ Củ chưa Lilium x cv Star Gazer trưởng thành Ornithogalum arabicum Demeulemee ster et al 1995b, Demeulemee ster and De Proft, 1999 Nuôi cấy tuần môi trường khơng có PGR sau tuần có BA Chambers et al.1991 Rodrigues Pereira,1961 Vảy Lin et al 2003a, củ Vảy Hoa Halaban et al 1965 củ trưởng thành 28 Đồ án: Ra hoa in vitro có thân ngầm đất TÀI LIỆU THAM KHẢO Bais H P., Sudha G S., Ravishankar G A (2000).Putrescine and silver nitrate influences shoot multiplication, in vitro flowering and endogenous titers of polyamines in Cichorium intybus L cv Lucknow Local Journal of Plant Growth Regulation, 19:238-248 Bapat V A., Narayanaswamy S (1976) Growth and organogenesis in explanted tissues of Amaryllis in culture Bulletin of the Torret Botanical Club, 103:53-56 Bilderback D E (1972) The effects of hormones upon the development of excised floral buds of Aquilegia American Journal of Botany, 59: 525-529 Boltenkov E V., Zarembo E V (2005) In vitro regeneration and callogenesis in tissue culture of floral organs of the genus Iris (Iridaceae) Biology Bulletin, 32: 138-142 Chambers S M., Heuch J H R., Pirrie A (1991) Micropropagation and in vitro flowering of the bamboo Dendrocalamus hamiltonii Munro Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 27: 45-48 Chang C., Chang W C (2003) Cytokinin promotion of flowering in Cymbidium ensifoium var misiricors in vitro Plant Growth Regulation, 39: 217-221 Chang W C., Hsing Y I (1980) In vitro flowering of embryoids derived from mature root callus of ginseng (Panax ginseng) Nature, 284: 341-342 Corr, B E., Widmer, R E (1987) Gibberellic acid increases flower number in Zantedeschia elliottiana and Z rehmannii HortScience, 22: 605-607 Dafni A., Cohen D., Noy-Meir I (1981) Life-cycle variation in geophytes Annals of the Missouri Botanical Gardens, 68: 652-660 10 Daksha S., Davis T D., Sankhla N., Upadhyaya A.(1994) In vitro production of flowering shoots in ‘German Red’ carnation: effect of uniconazole and gibberellic acid Plant Cell Reports, 13: 514-518 11 De Fossard R A (1974) Flower initiation in tissue and organ cultures In: Street H D (Ed.) Tissue culture and plant science Academic Press, New York: 29 Đồ án: Ra hoa in vitro có thân ngầm đất 193-211 12 De Hertogh A A., Le Nard M (1993) Botanical as-pects of flower bulbs In: De Hertogh A., Le Nard M (Eds.) The Physiology of Flowering Bulbs.Elsevier, Amsterdam, The Netherlands: 7-20 13 De Munk W J., Schipper J (1993) Iris - bulbous and rhizomatous In: De Hertogh A., Le Nard M (Eds) The Physiology of Flowering Bulbs Elsevier, Amsterdam, The Netherlands: 349-379 14 Demeulemeester M A C., De Proft M P (1999) In vivo and in vitro flowering response of chicory (Chicorium intybus L.): influence of plant age and vernalization Plant Cell Reports, 18: 781-785 15 Demeulemeester M A C., Rademacher W., Van De Mierop A., De Prfot M P (1995a) Influence of gibberellin biosynthesis inhibitors on stem elonga-tion and floral initiation on in vitro chicory root explants under dark and light conditions Plant Growth Regulation, 17: 47-52 16 Demeulemeester M A C., Voet A., Van De Mierop A., De Proft M P (1995b) Stem elongation and floral initiation on in vitro chicory root explants: influence of photoperiod Plant Growth Regulation, 16: 233-238 17 Dickens C W S., Van Staden J (1988) The induction and evocation of flowering in vitro South African Journal of Botany, 54: 325-344 18 Dielen V., Lecouvet V., Dupont S., Kinet J M (2001) In vitro control of floral transition in tomato (Lyco-persicon esculentum Mill.), the model for autonomously flowering plants, using the late flowering uniflora mutant Journal of Experimental Botany, 52: 715-723 19 Dole J M., Wilkins H F (2004) Floriculture – Princi-ples and Species Prentice Hall Upper Saddle River New Jersey 2nd edition, 1040 pp 20 Duan J Z., Yazawa S (1994) In vitro floral develop-ment in X Doriella Tiny (Doritis pulcherima X Kingella philippinensis) Scientia Horticulturae, 59: 253-264 21 Duan J X., Yazawa S (1995a) Floral induction and development in 30 Đồ án: Ra hoa in vitro có thân ngầm đất Phalaenopsis in vitro Plant Cell,Tissue and Organ Culture, 43: 71-74 22 Duan J Z., Yazawa S (1995b) Induction of precocious flowering and seed formation of x Doriella Tiny (Doritis pulcherrima x Kingiella philippin-ensis) in vitro and in vivo Acta Horticulturae, 397:103-110 23 Fortanier E J (1973) Reviewing the length of the generation period and its shortening, particularly in tulips Scientia Horticulturae, 1: 107-116 24 Funnell K A (1993) Zantedeschia In: De Hertogh A., Le Nard M (Eds.) The physiology of flower-ing bulbs Elsevier, Amsterdam, The Netherlands: 683-704 25 Gambourg O L., Miller R A., Ojima G (1968) Nutrient requirements of suspension culture of soybean root cells Experimental Cell Research, 50: 148-151 26 Gielis J., Peeters H., Gillis J K., Debergh P C (2002) Tissue culture strategies for genetic improvement of bamboo Acta Horticulturae, 552: 195-203 27 Halaban R., Gallun E., Halevy A H (1965) Experi-mental morphogenesis of stem tips of Ornithogalum arabicum L cultured in vitro Phytomorphology, 15: 379-387 28 Halevy A H (1990) Recent advances in control of flowering and growth habit of geophytes Acta Horticulturae, 266: 35-42 29 Hartsema A M (1961) Influence of temperature on flower formation and flowering of bulbous and tuberous plants In: Ruhland W (Ed.) Handbuch der Pflanzenphysiologie, Springer-Verlag, Berlin, 16:123-167 30 Heller R (1953) Recherches sur la nutrition minerales des tissues végétaux cultives in vitro Annales de Sciences Naturelles Botanique et Biologie Vegetale, 14: 1-22 31 Henny R J., Hamilton R L (1992) Flowering of An-thurium following treatment with gibberellic acid HortScience, 27: 12 32 Henny R J., Norman D J., Mellich T A (1999) Spathiphyllum cultivars vary in flowering response after treatment with gibberellic acid Hortechnol-ogy, 9: 177- 31 Đồ án: Ra hoa in vitro có thân ngầm đất 178 33 Imanishi H., Halevy A H., Kofranek A M., Han S., Reid M S (1994) Respiratory and carbohydrate changes during ethylene-mediated flower induction in Dutch iris Scientia Horticulturae, 59: 275-284 34 John C K., Nedgauda R S (2001) Nature watch-En-igmatic bamboos Resonance January: 54-65 35 Kawase K., Mizutani H., Yoshioka M., Fukuda S (1995) Shoot formation on floral organs of Japa-nese iris in vitro Journal of Japanese Society for Horticultural Science, 64: 143-148 36 Keller J (1990) Culture of unpollinated ovules, ova-ries, and flower buds in some species of the genus Allium and haploid induction via gynogenesis in onion (Allium cepa) Euphytica, 47: 241-247 37 Kleinhenz V., Midmore D J (2001) Aspects of bamboo agronomy Advances in Agronomy, 74: 99-145 38 Knop W (1865) Qantitative Untersuchung Über die Ernährungsprozesse der Pflanzen Die Landwirt-schaftlichen Versuchs-Station, Berlin Verlag Paul Prey, 30: 292-294 39 Kostenyuk I., Oh B J., So I S (1999) Induction of early flowering in Cymbidium niveo -marginatum Mak Plant Cell Report, 19: 1-5 40 Kuehny J S (2000) Calla history and culture Hort-echnology, 10: 267-274 41 Kuo C., Sagare A P., Lo S F., Lee C Y., Chen C C., Tsay H S (2002) Abscisic acid promotes development of somatic embryos on converted somatic embryos of Corydalis yanhuso (Fumariaceae) Journal of Plant Physiology, 159: 423427 42 Langens-Gerrits M., De Klerk G.-J., Croes A (2003).Phase change in lily bulblets regenerated in vitro Physiologia Plantarum, 119: 590-597 43 Le Nard M., De Hertogh A A (1993) Bulb growth and development and 32 Đồ án: Ra hoa in vitro có thân ngầm đất flowering In: De Hertogh A., Le Nard M (Eds.) The Physiology of Flower-ing Bulbs Elsevier, Amsterdam, The Netherlands: 29-44 44 Lee H S., Lee K.-W., Yang S G., Liu J R (1991) In vitro flowering of ginseng (Panax ginseng C A Meyr) zygotic embryos induced by growth regulators Plant Cell Physiology, 32: 1111-1113 45 Lee H S., Liu J R., Yang S G., Lee Y H., Lee K W (1990) In vitro flowering of plantlets regenerated from zygotic embryo-derived somatic embryos of Ginseng HortScience, 25: 1652-1654 46 Li Q Z., Li X G., Bai S N., Lu W L., Zhang X S (2002) Isolation of HAG1 and its regulation by plant hormones during in vitro floral organognesis in Hyacinthus orientalis L Planta, 215: 533-540 47 Lin C.-S., Chen C.-T., Chang W.-C (2003a) A method for inflorescence proliferation Plant Cell Report, 21: 838-843 48 Lin C.-S., Lin C.-C., Chang W.-C (2003b) In vitro flowering of Bambusa edulis and subsequent plant-let survival Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 72: 71-78 49 Lin C.-S., Vidmar J., Chang W.-C (2004) Effects of growth regulators on inflorescence proliferation of Bambusa edulis Plant Growth Regulation, 43:221225 50 Lin C.-S., Chen C.-T., Hasiao H.-W., Chang W.-C (2005) Effects of growth regulators on direct flow-ering of isolated ginseng buds in vitro Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 83: 241-244 51 Linsmaier E., Skoog F (1965) Organic growth factors requirements of tobacco tissue cultures Physiologia Plantarum, 18: 100-127 52 Lu W., Enomoto K., Fukunaga Y., Kuo C (1988).Regeneration of tepals, stamens and ovules in explants from perianth of Hyacinthus orientalis L.importance of explant age and exogenous hormones.Planta, 175: 478-484 53 Luo P Y E Q., Lan Z.-Q (2000) A study on floral biology in vitro in 33 Đồ án: Ra hoa in vitro có thân ngầm đất Orichophragmus violaceus: induction of flowers in seedlings of O violaceus cultured in vitro Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 63: 73-75 54 Lu W L., Bai S N., Zhang X S (2000) The exogenous hormonal control of the development of regenerated flower buds in Hyacinthus orientalis Acta Botanica Sinica, 42: 996-1002 55 McCarten S A., Van Staden J (2003) Micropropaga-tion of the endangered Kniphofia leucocephala Baijnath In vitro Cell Development Biology – Plant, 39: 496-499 56 Mudalige R G., Kuehnle A R (2004) Orchid bio-technology in production and improvement Hort Science, 39: 11-17 57 Murashige T., Skoog F (1962) A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue culture Physiologia Plantarum, 15: 473-497 58 Nadgauda R S., Parasharami V A., Mascarenhas A F (1990) Precocious flowering and seedling behavior in tissue-cultured bamboos Nature, 344: 335-336 59 Nadgauda R S., John C K., Parasharami V A., Joshi M S., Mascarenhas A F (1997) A comparison of in vitro with in vivo flowering in bamboo: Bambusa arundinacea Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 48: 181-188 34 ... việc hoa I/ GIỚI THIỆU Tổng quan tập trung vào việc ni cấy có thân ngầm đất bẳng phương pháp nuôi cấy in vitro Nhiều tế bào thân ngầm đất có giá trị thương Đồ án: Ra hoa in vitro có thân ngầm đất. .. (2000) A study on floral biology in vitro in 33 Đồ án: Ra hoa in vitro có thân ngầm đất Orichophragmus violaceus: induction of flowers in seedlings of O violaceus cultured in vitro Plant Cell, Tissue... Từ mơ sinh sản hình thành đến mơ sinh dưỡng dùng loai có thân Đồ án: Ra hoa in vitro có thân ngầm đất ngầm đất Allium ampeloprasum, Dichelostemma multiflorum, Eucrosia radiate, Gladiolus grandiflorus,