Khóa luận đánh giá mối liên quan giữa độ ngưng tập tiểu cầu với kiểu gen CYP2C192, CYP2C193 và một số yếu tố khác trên bệnh nhân đau thắt ngực không ổn định tại viện tim mạch việt nam

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC VŨ PHƯƠNG THẢO ĐÁNH GIÁ MỐI LIÊN QUAN GIỮA ĐỘ NGƯNG TẬP TIỂU CẦU VỚI KIỂU GEN CYP2C19*2, CYP2C19*3 VÀ MỘT SỐ YẾU TỐ KHÁC TRÊN BỆNH NHÂN ĐAU THẮT NGỰC KHƠNG ỔN ĐỊNH TẠI VIỆN TIM MẠCH VIỆT NAM KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Hà Nội - 2018 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC Người thực hiện: VŨ PHƯƠNG THẢO ĐÁNH GIÁ MỐI LIÊN QUAN GIỮA ĐỘ NGƯNG TẬP TIỂU CẦU VỚI KIỂU GEN CYP2C19*2, CYP2C19*3 VÀ MỘT SỐ YẾU TỐ KHÁC TRÊN BỆNH NHÂN ĐAU THẮT NGỰC KHÔNG ỔN ĐỊNH TẠI VIỆN TIM MẠCH VIỆT NAM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Khóa: QH.2013.Y Người hướng dẫn: ThS.BS Nguyễn Thị Thúy Mậu ThS.BS Vũ Ngọc Trung Hà Nội - 2018 VN U LỜI CẢM ƠN Trong trình học tập thực khóa luận, tơi nhận nhiều cy , quan tâm, giúp đỡ thầy cô, nhà trường, bệnh viện, gia đình bạn bè Ph ar ma Lời đầu tiên, với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc nhất, xin trân trọng cảm ơn ThS.BS Nguyễn Thị Thúy Mậu ThS.BS Vũ Ngọc Trung người hướng dẫn khoa học, người thầy tận tình bảo, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm quý báu, tạo điều kiện giúp đỡ tơi suốt q trình thực hồn thành nghiên cứu Tơi xin cảm ơn đề tài khoa học công nghệ cấp ĐHQGHN, mã số QG.15.32 ed ici ne an d cung cấp kinh phí, tạo điều kiện để tơi hồn thành khóa luận tốt nghiệp Tôi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo Khoa Y Dược thầy cô mơn Y Dược học sở hết lịng quan tâm, giúp đỡ, tạo điều kiện tốt để thực nghiên cứu hồn thành khóa luận Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến bác sỹ nhân viên Viện Tim mạch Việt Nam giúp đỡ nhiều trình thực nghiên cứu of M Xin bày tỏ lịng biết ơn u thương đến gia đình, người thân bạn bè, người bên cổ vũ, khuyến khích, động viên tạo điều kiện giúp đỡ thời gian học tập thực đề tài khóa luận Sc ho ol Cuối xin gửi lời tri ân tới bệnh nhân tham gia vào nhóm nghiên cứu, đóng góp bệnh nhân giúp tơi hồn thành tốt khóa luận tốt Hà Nội, ngày 28 tháng 05 năm 2018 Sinh viên Vũ Phương Thảo Co py rig ht @ nghiệp PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma American college of Cardiology: Trường môn Tim mạch Hoa Kỳ American Heart Association: Hiệp hội Tim mạch Hoa Kỳ ADP Adenosin diphosphate CK - MB COX Creatine Kinase Myocardial Band isoenzyme Cyclooxygenase CRP DNA C-Reactive Protein: Protein phản ứng C Deoxyribonucleic Acid dNTP ĐMV ĐTNKÔĐ ĐTĐ Deoxyrinucleotidtriphosphate Động mạch vành Đau thắt ngực không ổn định Đái tháo đường EDTA GTT Ethylendiamin Tetraacetic Acid Giải trình tự GP Glycoprotein G-protein HCĐMVC Group protein Hội chứng động mạch vành cấp HDL LDL High Density Lipoprotein: Lipoprotein có tỷ trọng phân tử cao Low Density Lipoprotein: Lipoprotein có tỷ trọng phân tử thấp MCV MPV Mean Corpuscular Volume: Thể tích trung bình hồng cầu Mean Platelet Volume: Thể tích trung bình tiểu cầu py rig ht PLT RBC RLCH lipid RFLP SNP THA Ph ar ma ed ici ne an d of M @ PGH2 PGI2 Sc ho ol NTTC PCR cy , ACC AHA NMCT Co VN U DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Nhồi máu tim Ngưng tập tiểu cầu Polymerase chain reaction: Phản ứng chuỗi polymerase Prostaglandin H2 Prostaglandin I2 Platelet Count: Số lượng tiểu cầu Red Blood Cell: Số lượng hồng cầu Rối loạn chuyển hóa lipid Restriction fragment length polymorphism: Đa hình chiều dài đoạn cắt giới hạn Single Nucleotide polymorphism: Đa hình đơn nucleotide Tăng huyết áp PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma vWF von Willebrand factor: yếu tố von Willebrand WBC XVĐM White Blood Cell: Số lượng bạch cầu Xơ vữa động mạch VN U Thromboxan A2 Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ici ne an d Ph ar ma cy , TXA2 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma VN U DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Trình tự mồi nhân dòng alen CYP2C19*2 CYP2C19*3 .24 cy , Bảng 2.2 Quy trình PCR cho alen *2 25 Ph ar ma Bảng 2.3 Quy trình PCR cho alen *3 25 Bảng 2.4 Quy trình RFLP để phân tích kiểu gen alen *2 26 Bảng 2.5 Quy trình RFLP để phân tích kiểu gen alen *3 26 Bảng 2.6 Cách đọc kết kiểu gen CYP2C19 .27 Bảng 3.1 Phân bố yếu tố nguy nhóm nghiên cứu 32 ed ici ne an d Bảng 3.2 Kết cận lâm sàng nhóm nghiên cứu 33 Bảng 3.3 Kết đo độ NTTC bệnh nhân ĐTNKÔĐ 34 Bảng 3.4 Kết đo nồng độ độ tinh sản phẩm tách DNA .34 Bảng 3.5 Kết kiểu gen tần số alen CYP2C19*2 CYP2C19*3 39 Bảng 3.6 Tần số phân bố kiểu gen CYP2C19 nhóm nghiên cứu 39 Bảng 3.7 Tỉ lệ phân loại theo mức tác dụng dược lý kiểu gen quy định 40 Bảng 3.8 Độ NTTC kiểu gen CYP2C19*3 40 of M Bảng 3.9 Độ NTTC kiểu gen CYP2C19*2 40 Bảng 3.10 Độ NTTC kiểu tác dụng dược lý kiểu gen quy định 41 Bảng 3.11 Mối liên quan độ NTTC với số yếu tố nguy cơ: Hút thuốc lá, Sc ho ol RLCH lipid, ĐTĐ, THA béo phì 42 Bảng 3.12 Mối liên quan độ NTTC với số lượng yếu tố nguy 43 Co py rig ht @ Bảng 3.13 Mối liên quan độ NTTC với số yếu tố cận lâm sàng .43 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma VN U DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Phân bố số lượng bệnh nhân ĐTNKÔĐ theo giới .31 cy , Biểu đồ 3.2 Đặc điểm tuổi bệnh nhân ĐTNKÔĐ 31 Ph ar ma Biểu đồ 3.3 Phân bố số lượng yếu tố nguy bệnh nhân ĐTNKÔĐ .32 Biểu đồ 3.4 Độ NTTC kiểu gen CYP2C19*2 41 Biểu đồ 3.5 Độ NTTC tác dụng (giảm + kém) tác dụng bình thường 41 Biểu đồ 3.6 Tần số alen gen CYP2C19 .51 Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ici ne an d Biểu đồ 3.7 So sánh tần số phân bố alen CYP2C19 52 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma VN U DANH MỤC HÌNH cy , Hình 1.1 Cơ chế bệnh sinh ĐTNKÔĐ Hình 1.2 Các glycoprotein màng tiểu cầu chức chúng Ph ar ma Hình 1.3 Bám dính ngưng tập tiểu cầu Hình 1.4 Cơ chế tác dụng aspirin lên trình NTTC .8 Hình 1.5 Quá trình chuyển hóa clopidogrel cơng thức cấu tạo chất sau bước chuyển hóa Hình 1.6 Cơ chế tác dụng clopidogrel lên trình NTTC .10 ed ici ne an d Hình 1.7 Mơ tả single nucleotide polymorphism (SNP) 10 Hình 1.8 Vị trí gen CYP2C19 nhiễm sắc thể số 10 12 Hình 1.9 Vị trí exon (hộp đen) số alen gen CYP2C19 12 Hình 1.10 Vai trị enzyme Cytochrome P450 chuyển hóa thuốc .15 Hình 1.11 Quy trình PCR 16 Hình 1.12 Các kiểu cắt RE .17 Hình 2.1 Nguyên lý xét nghiệm độ NTTC 28 of M Hình 3.1 Điện di DNA tổng số gel Agarose 0,7% 35 Hình 3.2 Điện di sản phẩm PCR nhân vùng gen chứa alen CYP2C19*2 (719 bp) Sc ho ol CYP2C19*3 (898 bp) gel agarose 1% 35 Hình 3.3 Kết giải trình tự alen CYP2C19*2 36 Hình 3.4 Kết giải trình tự alen CYP2C19*3 37 Hình 3.5 Kết điện di sản phẩm cắt alen CYP2C19*2 gel agarose 1,5% 38 @ Hình 3.6 Kết điện di sản phẩm cắt alen CYP2C19*3 gel agarose 1,5% Co py rig ht .38 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma VN U MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ cy , CHƯƠNG TỔNG QUAN .3 1.1 Đau thắt ngực không ổn định Ph ar ma 1.1.1 Định nghĩa .3 1.1.2 Cơ chế bệnh sinh ĐTNKÔĐ .3 1.1.3 Tiêu chuẩn chẩn đốn đau thắt ngực khơng ổn định 1.2 Tổng quan ngưng tập tiểu cầu .5 1.2.1 Sinh lý tiểu cầu ed ici ne an d 1.2.2 Quá trình ngưng tập tiểu cầu 1.2.3 Điều trị ức chế NTTC ĐTNKÔĐ 1.2.4 Thuốc chống NTTC aspirin clopidogrel .8 1.3 Tổng quan đa hình di truyền gen CYP2C19 10 1.3.1 Đa hình đơn nucleotide 10 1.3.2 Gen CYP2C19 vai trị chúng chuyển hóa thuốc .11 1.3.2.1 Gen CYP2C19…………………………………………… 11 of M 1.3.2.2 Vai trị CYP2C19 chuyển hóa thuốc .13 1.3.3 Các phương pháp phát kiểu gen CYP2C19 15 1.4 Tình hình nghiên cứu mối liên quan độ NTTC với kiểu gen Sc ho ol CYP2C19 yếu tố khác bệnh nhân ĐTNKÔĐ giới nước 19 1.4.1 Tình hình nghiên cứu giới 19 1.4.2 Tình hình nghiên cứu nước 19 @ CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .21 Co py rig ht 2.1 Đối tượng nghiên cứu 21 2.1.1 Tiêu chuẩn lựa chọn .21 2.1.2 Tiêu chuẩn loại trừ 21 2.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu 21 2.3 Phương pháp nghiên cứu 21 2.4 Nguyên liệu phương tiện nghiên cứu 21 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma VN U 2.4.1 Hóa chất 21 2.4.2 Thiết bị 22 2.5 Các bước nghiên cứu .22 cy , 2.5.1 Quy trình nghiên cứu .22 2.5.2 Thu thập, xử lý bảo quản mẫu 23 Ph ar ma 2.5.3 Tách chiết kiểm tra chất lượng DNA tổng số 23 2.5.3.1 Tách chiết DNA tổng số .23 2.5.3.2 Kiểm tra chất lượng DNA tổng số .23 2.5.4 Khuếch đại đoạn gen chứa SNP CYP2C19*2, CYP2C19*3 PCR kiểm tra chất lượng sản phẩm .24 ed ici ne an d 2.5.4.1 Khuếch đại đoạn gen chứa SNP CYP2C19*2, CYP2C19*3 PCR .24 2.5.4.2 Kiểm tra chất lượng sản phẩm PCR…………………… 24 2.5.5 Tinh sản phẩm PCR .25 2.5.6 Xác định kiểu gen SNP CYP2C19*2, *3 sử dụng phương pháp cắt enzyme giới hạn (RFLP) có đối chiếu với phương pháp of M giải trình tự 26 2.5.7 Cách đọc kết kiểu gen CYP2C19 27 2.5.8 Xét nghiệm đo độ ngưng tập tiểu cầu 27 Sc ho ol 2.6 Xử lý phân tích số liệu 29 2.7 Các loại sai số cách khắc phục 29 2.7.1 Sai số mắc phải 29 2.7.2 Cách khắc phục sai số 30 2.8 Đạo đức nghiên cứu 30 @ CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 31 3.1.1 Một số đặc điểm chung 31 3.1.2 Kết đo số số cận lâm sàng 32 3.1.3 Kết đo độ NTTC .34 3.1.4 Kết phân tích kiểu gen CYP2C19*2 CYP2C19*3 34 Co py rig ht 3.1 Kết quả…………………………… ……………………………… 31 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma VN U KẾT LUẬN Nghiên cứu thực 54 bệnh nhân ĐTNKÔĐ điều trị kháng tiểu cy , cầu kép (aspirin clopidogrel) Viện Tim mạch Việt Nam từ tháng 1/2017 đến tháng 1/2018, rút số kết luận theo mục tiêu đề sau: Ph ar ma Tần số phân bố kiểu gen CYP2C19*2 CYP2C19*3 bệnh nhân đau thắt ngực không ổn định ➢ Alen CYP2C19*2 (c.681G>A): - Tần số kiểu gen: GG (51,9%), GA (37%), AA (11,1%) Tần số alen: G/A: 0,7/0,3 ➢ Alen CYP2C19*3 (c.636G>A): Tần số kiểu gen: GG (88,9%), GA (11,1%), AA (0%) ed ici ne an d - - Tần số alen: G/A: 0,94/0,06 ➢ Tần số kiểu gen: *1*1 (44,4%), *1*2 (33,3%), *1*3 (7,4%), *2*2 (11,1%), *2*3 (3,7%) ➢ Tỉ lệ phân loại theo mức tác dụng dược lý kiểu gen quy định: - Tác dụng bình thường: 44,4% - Tác dụng giảm: 40,7% Tác dụng kém: 14,9% of M Mối liên quan độ ngưng tập tiểu cầu với kiểu gen CYP2C19*2 CYP2C19*3 số yếu tố khác bệnh nhân đau thắt ngực không ổn định ➢ Trong alen CYP2C19*2 CYP2C19*3 alen CYP2C19*2 có mối liên quan chặt chẽ với độ NTTC Ở bệnh nhân mang alen CYP2C19*2 độ Sc ho ol NTTC cao hẳn so với bệnh nhân không mang alen (p