Đánh giá mối liên quan giữa độ ngưng tập tiểu cầu với kiểu gen cyp2c192, CYP2C193 và một số yếu tố khác trên bệnh nhân đau thắt ngực không ổn định tại viện tim mạch việt nam

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC VŨ PHƯƠNG THẢO ĐÁNH GIÁ MỐI LIÊN QUAN GIỮA ĐỘ NGƯNG TẬP TIỂU CẦU VỚI KIỂU GEN CYP2C19*2, CYP2C19*3 VÀ MỘT SỐ YẾU TỐ KHÁC TRÊN BỆNH NHÂN ĐAU THẮT NGỰC KHƠNG ỔN ĐỊNH TẠI VIỆN TIM MẠCH VIỆT NAM KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Hà Nội - 2018 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC Người thực hiện: VŨ PHƯƠNG THẢO ĐÁNH GIÁ MỐI LIÊN QUAN GIỮA ĐỘ NGƯNG TẬP TIỂU CẦU VỚI KIỂU GEN CYP2C19*2, CYP2C19*3 VÀ MỘT SỐ YẾU TỐ KHÁC TRÊN BỆNH NHÂN ĐAU THẮT NGỰC KHÔNG ỔN ĐỊNH TẠI VIỆN TIM MẠCH VIỆT NAM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Khóa: QH.2013.Y Người hướng dẫn: ThS.BS Nguyễn Thị Thúy Mậu ThS.BS Vũ Ngọc Trung Hà Nội - 2018 LỜI CẢM ƠN Trong trình học tập thực khóa luận, tơi nhận rấ t nhiều quan tâm, giúp đỡ thầy cơ, nhà trường, bệnh viện, gia đình bạn bè Lời đầu tiên, với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc nhất, xin trân trọng cảm ơn ThS.BS Nguyễn Thị Thúy Mậu ThS.BS Vũ Ngọc Trung người hướng dẫn khoa học, người thầy tận tình bảo, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm quý báu, tạo điều kiện giúp đỡ suốt q trình thực hồn thành nghiên cứu Tôi xin cảm ơn đề tài khoa học công nghệ cấp ĐHQGHN, mã số QG.15.32 cung cấp kinh phí, tạo điều kiện để tơi hồn thành khóa luận tốt nghiệp Tôi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo Khoa Y Dược thầy cô môn Y Dược học sở hết lòng quan tâm, giúp đỡ, tạo điều kiện tốt để thực nghiên cứu hồn thành khóa luận Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến bác sỹ nhân viên Viện Tim mạch Việt Nam giúp đỡ tơi nhiều q trình thực nghiên cứu Xin bày tỏ lòng biết ơn yêu thương đến gia đình, người thân bạn bè, người bên cổ vũ, khuyến khích, động viên tạo điều kiện giúp đỡ thời gian học tập thực đề tài khóa luận Cuối tơi xin g ửi lời tri ân tới bệnh nhân tham gia vào nhóm nghiên cứu, đóng góp bệnh nhân giúp tơi hồn thành tốt khóa luận tốt nghiệp Hà Nội, ngày 28 tháng 05 năm 2018 Sinh viên Vũ Phương Thảo DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT ACC AHA ADP CK-MB COX CRP DNA dNTP ĐMV ĐTNKƠĐ American college of Cardiology: Trường mơn Tim mạch Hoa Kỳ ĐTĐ EDTA GTT GP G-protein HCĐMVC HDL LDL MCV MPV NMCT NTTC PCR PGH2 PGI2 PLT RBC RLCH lipid RFLP Đái tháo đường Ethylendiamin Tetraacetic Acid Giải trình tự Glycoprotein Group protein Hội chứng động mạch vành cấp High Density Lipoprotein: Lipoprotein có tỷ trọng phân tử cao Low Density Lipoprotein: Lipoprotein có tỷ trọng phân tử thấp Mean Corpuscular Volume: Thể tích trung bình hồng cầu Mean Platelet Volume: Thể tích trung bình tiểu cầu Nhồi máu tim Ngưng tập tiểu cầu Polymerase chain reaction: Phản ứng chuỗi polymerase Prostaglandin H2 Prostaglandin I2 Platelet Count: Số lượng tiểu cầu Red Blood Cell: Số lượng hồng cầu Rối loạn chuyển hóa lipid Restriction fragment length polymorphism: Đa hình chiều dài đoạn cắt giới hạn Single Nucleotide polymorphism: Đa hình đơn nucleotide Tăng huyết áp vWF SNP THA TXA2 American Heart Association: Hiệp hội Tim mạch Hoa Kỳ Adenosin diphosphate Creatine Kinase Myocardial Band isoenzyme Cyclooxygenase C-Reactive Protein: Protein phản ứng C Deoxyribonucleic Acid Deoxyrinucleotidtriphosphate Động mạch vành Đau thắt ngực không ổn định WBC XVĐM Thromboxan A2 von Willebrand factor: yếu tố von Willebrand White Blood Cell: Số lượng bạch cầu Xơ vữa động mạch DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Trình tự mồi nhân dịng alen CYP2C19*2 CYP2C19*3 24 Bảng 2.2 Quy trình PCR cho alen *2 25 Bảng 2.3 Quy trình PCR cho alen *3 25 Bảng 2.4 Quy trình RFLP để phân tích kiểu gen alen *2 26 Bảng 2.5 Quy trình RFLP để phân tích kiểu gen alen *3 26 Bảng 2.6 Cách đọc kết kiểu gen CYP2C19 27 Bảng 3.1 Phân bố yếu tố nguy nhóm nghiên c ứu 32 Bảng 3.2 Kết cận lâm sàng nhóm nghiên u 33 Bảng 3.3 Kết đo độ NTTC bệnh nhân ĐTNKÔĐ 34 Bảng 3.4 Kết đo nồng độ độ tinh c sản phẩm tách DNA 34 Bảng 3.5 Kết kiểu gen tần số alen CYP2C19*2 CYP2C19*3 39 Bảng 3.6 Tần số phân bố kiểu gen CYP2C19 nhóm nghiên cứu 39 Bảng 3.7 Tỉ lệ phân loại theo mức tác dụng dược lý kiểu gen quy định 40 Bảng 3.8 Độ NTTC kiểu gen CYP2C19*3 40 Bảng 3.9 Độ NTTC kiểu gen CYP2C19*2 40 Bảng 3.10 Độ NTTC kiểu tác dụng dược lý kiểu gen quy định 41 Bảng 3.11 Mối liên quan độ NTTC với số yếu tố nguy cơ: Hút thuốc lá, RLCH lipid, ĐTĐ, THA béo phì 42 Bảng 3.12 Mối liên quan độ NTTC với số lượng yếu tố nguy 43 Bảng 3.13 Mối liên quan độ NTTC với số yếu tố cận lâm sàng 43 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Phân bố số lượng bệnh nhân ĐTNKÔĐ theo giới 31 Biểu đồ 3.2 Đặc điểm tuổi bệnh nhân ĐTNKÔĐ 31 Biểu đồ 3.3 Phân bố số lượng yếu tố nguy bệnh nhân ĐTNKÔĐ .32 Biểu đồ 3.4 Độ NTTC kiểu gen CYP2C19*2 .41 Biểu đồ 3.5 Độ NTTC tác dụng (giảm + kém) tác dụng bình thường 41 Biểu đồ 3.6 Tần số alen gen CYP2C19 51 Biểu đồ 3.7 So sánh tần số phân bố alen CYP2C19 52 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cơ chế bệnh sinh ĐTNKÔĐ Hình 1.2 Các glycoprotein màng tiểu cầu chức chúng Hình 1.3 Bám dính ngưng tập tiểu cầu Hình 1.4 Cơ chế tác dụng aspirin lên trình NTTC Hình 1.5 Q trình chuyển hóa clopidogrel cơng thức cấu tạo chất sau bước chuyển hóa Hình 1.6 Cơ chế tác dụng clopidogrel lên trình NTTC 10 Hình 1.7 Mơ tả single nucleotide polymorphism (SNP) 10 Hình 1.8 Vị trí gen CYP2C19 nhiễm sắc thể số 10 12 Hình 1.9 Vị trí exon (hộp đen) s ố alen gen CYP2C19 12 Hình 1.10 Vai trị enzyme Cytochrome P450 chuyển hóa thuốc 15 Hình 1.11 Quy trình PCR 16 Hình 1.12 Các kiểu cắt RE 17 Hình 2.1 Nguyên lý xét nghiệm độ NTTC 28 Hình 3.1 Điện di DNA tổng số gel Agarose 0,7% 35 Hình 3.2 Điện di sản ph ẩ m PCR nhân vùng gen chứa alen CYP2C19*2 (719 bp) CYP2C19*3 (898 bp) gel agarose 1% 35 Hình 3.3 Kết giải trình tự alen CYP2C19*2 36 Hình 3.4 Kết giải trình tự alen CYP2C19*3 37 Hình 3.5 Kết điện di sản phẩm cắt alen CYP2C19*2 gel agarose 1,5% 38 Hình 3.6 K ế t điện di sản phẩm cắt alen CYP2C19*3 gel agarose 1,5% 38 MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Đau thắt ngực không ổn định 1.1.1 Định nghĩa 1.1.2 Cơ chế bệnh sinh ĐTNKÔĐ 1.1.3 Tiêu chuẩn chẩn đốn đau thắt ngực khơng ổn định 3 1.2 Tổng quan ngưng tập tiểu cầu 1.2.1 Sinh lý tiểu cầu 1.2.2 Quá trình ngưng tập tiểu cầu 1.2.3 Điều trị ức chế NTTC ĐTNKÔĐ 1.2.4 Thuốc chống NTTC aspirin clopidogrel 1.3 Tổng quan đa hình di truyền gen CYP2C19 10 1.3.1 Đa hình đơn nucleotide 1.3.2 Gen CYP2C19 vai trò chúng chuyển hóa thuốc 10 11 1.3.2.1 Gen CYP2C19…………………………………………… 11 1.3.2.2 Vai trị c CYP2C19 chuyển hóa thuốc 13 1.3.3 Các phương pháp phát kiểu gen CYP2C19 15 1.4 Tình hình nghiên cứu mối liên quan độ NTTC với kiểu gen CYP2C19 yếu tố khác bệnh nhân ĐTNKÔĐ giới nước 19 1.4.1 Tình hình nghiên cứu giới 19 1.4.2 Tình hình nghiên cứu nước 19 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .21 2.1 Đối tượng nghiên cứu 21 2.1.1 Tiêu chuẩn lựa chọn 21 2.1.2 Tiêu chuẩn loại trừ 21 2.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu 21 2.3 Phương pháp nghiên cứu 21 2.4 Nguyên liệu phương tiện nghiên cứu 21 2.4.1 Hóa chất 21 2.4.2 Thiết bị 22 2.5 Các bước nghiên cứu 22 2.5.1 Quy trình nghiên cứu22 2.5.2 Thu thập, xử lý bảo quản mẫu 23 2.5.3 Tách chiết kiểm tra chất lượng DNA tổng số 23 2.5.3.1 Tách chiết DNA tổng số 23 2.5.3.2 Kiểm tra chất lượng DNA tổng số 23 2.5.4 Khuếch đại đoạn gen chứa SNP CYP2C19*2, CYP2C19*3 PCR kiểm tra chất lượng sả n phẩm 24 2.5.4.1 Khuếch đại đoạn gen chứa SNP CYP2C19*2, CYP2C19*3 PCR 24 2.5.4.2 Kiểm tra chất lượng sả n phẩm PCR…………………… 24 2.5.5 Tinh sản phẩm PCR 25 2.5.6 Xác định kiểu gen SNP CYP2C19*2, *3 sử dụng phương pháp cắt enzyme giới hạn (RFLP) có đối chiếu với phương pháp giải trình tự 26 2.5.7 Cách đọc kế t kiểu gen CYP2C19 27 2.5.8 Xét nghi ệm đo độ ngưng tập tiểu cầu 27 2.6 Xử lý phân tích số liệu 29 2.7 Các loại sai số cách khắc phục 29 2.7.1 Sai số mắc phải 29 2.7.2 Cách khắc phục sai số 30 2.8 Đạo đức nghiên cứu 30 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 31 3.1 Kết quả…………………………… ……………………………… 31 3.1.1 Một số đặc điểm chung 3.1.2 Kết đo số số cận lâm sàng 31 32 3.1.3 Kết đo độ NTTC 34 3.1.4 Kết phân tích kiểu gen CYP2C19*2 CYP2C19*3 34 38.Chonlaphat S., Ramaimon T., Montri C et al (2013), "CYP2C19 polymorphisms in the Thai population and the clinical response to clopidogrel in patients with atherothrombotic-risk factors", Pharmacogenomics Pers Med, 6, 85–91 39 Corti R., Fuster V., Badimon J (2001), "New understanding of atherosclerosis (clinically and experimentally) with evolving MRI technology in vivo", Ann N Y Acad Sci, 947, 181–195 40 Davies M.J, Richardson P.D, Woolf N et al (1993), "Risk of thrombosis in human atherosclerotic plaques: role of extracellular lipid, macrophage, and smooth muscle cell content", Br Heart J, 69(5), 377–381 41.Ewa L., Małgorzata O., et al (2015), "The influence of genetic polymorphisms of CYP2C19 and ABCB1 on ADP-induced platelet aggregation in clopidogreltreated patients: comparison between the index hospitalization for myocardial infarction and the 3-month follow-up visit", Folia Medica Copernic, 3(2), 62–71 42 Ferreiro J, Bhatt D.L, Ueno M et al (2014), "Impact of smoking on long-term outcomes in patients with atherosclerotic vascular disease treated with aspirin or clopidogrel: insights from the CAPRIE trial (Clopidogrel Versus Aspirin in Patients at Risk of Ischemic Events)", J Am Coll Cardiol, 63(8), 769–777 43.Fuster V., Badimon L., Badimon J et al (1992), "The pathogenesis of coronary artery disease and the acute coronary syndromes (2)", N Engl J Med, 326(5), 310– 318 44 Genetics Home Reference What are single nucleotide polymorphisms (SNPs)? 45 Goldstein J.A, Ishizaki & Chiba K (1997), "Frequencies of the defective CYP2C19 alleles responsible for the mephenytoin poor metabolizer phenotype in various Oriental, Caucasian, Saudi Arabian and American black populations", Pharmacogenetics, 7(1), 59–64 46 Gupta A.K (1996), Ischemia and coronary heart disease, community outreach health information system, Boston university Medical Center 47 Gurbel P.A, Bliden K.P, Logan D.K et al (2013), "The influence of smoking status on the pharmacokinetics and pharmacodynamics of clopidogrel and prasugrel: the PARADOX study", J Am Coll Cardiol, 62(6), 505–512 48 Haberka M el al (2015), "Obesity and antiplatelet effects of acetylsalicylic acid and clopidogrel in patients with stable angina pectoris after percutaneous coronary intervention", Pol Arch Med Wewn, 125(9), 620-30 49 Holmes M.V., Perel P., Shah T et al (2011), "CYP2C19 genotype, clopidogrel metabolism, platelet function, and cardiovascular events: a systematic review and meta-analysis", JAMA, 306(24), 2704–2714 50 Investigators T.C in U.A to P R E T (2001), "Effects of Clopidogrel in Addition to Aspirin in Patients with Acute Coronary Syndromes without ST-Segment Elevation" N Engl J Med, 345(7), 494–502 51 Jeremy W.D et al (2011), "From genes to genomes: concepts and applications of DNA technology", Restrict Endonucleases, (3th ed) UK: University of Surrey, tr 36–74 52 Jian L.X, Chen Z.M, Chen Y.P (2005), "Addition of clopidogrel to aspirin in 45,852 patients with acute myocardial infarction: randomised placebo-controlled trial" Lancet Lond Engl, 366(9497), 1607–1621 53.Jneid H, Anderson J.L, et al (2012), "ACCF/AHA focused update of the guideline for the management of patients with unstable angina/Non-ST-elevation myocardial infarction (updating the 2007 guideline and replacing the 2011 focused update): a report of the American College of Cardiology Foundation/American Heart Association Task Force on practice guidelines", Circulation, 126(7), 875–910 54 John W E et al (2012), "Antiplatelet Drugs Antithrombotic Therapy and Prevention of Thrombosis, 9th ed: American College of Chest Physicians Evidence-Based Clinical Practice Guidelines", Chest, 14, e89S–e119 55.Kim K.A, Song W.H, Kim K.R and Park J.Y (2010), "Assessment of CYP2C19 genetic polymorphisms in a Korean population using a simultaneous multiplex pyrosequencing method to simultaneously detect the CYP2C19*2, CYP2C19*3, and CYP2C19*17 alleles", J Clin Pharm Ther, 35(6), 697-703 56 Kim Michael C, Kini Annapoorna S, Fuster Valentin (2002), "Definition of Acute Coronary Syndromes", Heart 11th Ed, chap 48, 12151222 57.Knobles H et al (1998), "Shear induced platelet adhesion and aggregation subendothelium are increased in diabetic patients", J Endocrinlogy, 90, 181–90 58 Lip G.Y, Edmunds E (2001), "A cross sectional diual and follow -up study of platelet activation and endothelial dysfuction in malignant phase hypertension", Am J Intern Med, 249(3), 205–214 59 Marchini J.F.M et al (2017), "Decreased platelet responsiveness to clopidogrel correlates with CYP2C19 and PON1 polymorphisms in atherosclerotic patients", Braz J Med Biol Res, 50(1), e5660 60 Marcus E C (2001), "Diabetes mellitus a hypercoagulable state", J Diabetes Its Complicat, 44–54 61 Matetzky S., Shenkman B., Guetta V (2004), "Clopidogrel resistance is associated with increased risk of recurrent atherothrombotic events in patients with acute myocardial infarction", Circulation, 109, 3171– 3175 62 Morais S.M, Wilkinson G.R, Blaisdell J et al (1994), "The major genetic defect responsible for the polymorphism of S-mephenytoin metabolism in humans", J Biol Chem, 269(22), 15419–15422 63.Morton J.K, Arnold H.S et al (2013), "Antithrombotic and Antiplatelet Therapy for Percutaneous Coronary Interventions", Card Catheter Handb, 130– 146 64.Nakamura K., Goto F and Ray W.A (1985), "Interethnic differences in genetic polymorphism of debrisoquin and mephenytoin hydroxylation between Japanese and Caucasian populations", Clin Pharmacol Ther, 38(4), 402–408 65 Oestreich J.H, Best L.G, and Dobesh P.P (2014), "Prevalence of CYP2C19 variant alleles and pharmacodynamic variability of aspirin and clopidogrel in Native Americans", Am Heart J 66 Price M.J, Murray S.S, Angiolillo D.J et al (2012), "Influence of genetic polymorphisms on the effect of high- and standard-dose clopidogrel after percutaneous coronary intervention: the GIFT (Genotype Information and Functional Testing) study", J Am Coll Cardiol, 59(22), 1928–1937 67 Scott M Grundy et al (2002), "Third Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP) Expert Panel on Detection, Evaluation, and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult Treatment Panel III) final report", Circulation , 106(25), 3143–421 68 Scott S.A, Sangkuhl K, Stein C.M et al (2013), "Clinical Pharmacogenetics Implementation Consortium Guidelines for CYP2C19 Genotype and Clopidogrel Therapy: 2013 Update", Clin Pharmacol Ther, 94(3), 317–323 69 Sharathkumar Anjali A, Shapiro Amy (2008), Platelet function disorders, World Federation of Hemophilia, Montreal 70 Shuldiner A.R, O’Connell J.R, & Bliden K.P (2009), "Association of cytochrome P450 2C19 genotype with the antiplatelet effect and clinical efficacy of clopidogrel therapy", JAMA, 302(8), 849-57 71 Sibbing D, Stegherr J, Latz W et al (2009), "Cytochrome P450 2C19 loss-of-function polymorphism and stent thrombosis following percutaneous coronary intervention", Eur Heart J, 30(8), 916–922 72 Steinlhubl S.R, Darrah S., & Brennan D (2003), "Optimal duration of pretreatment with clopidogrel prior to PCI: Data from the CREDO trial", Circulation, 108(Suppl I:I1742) 73 Stuart A.S., Katrin S., Alan R.S et al (2012), "PharmGKB summary: very important pharmacogene information for cytochrome P450, family 2, subfamily C, polypeptide 19", Pharmacogenet Genomics, 22(2), 159–165 74 Tassaneeyakul W., Mahatthanatrakul W., Niwatananun K and NaBangchang K (2006), "CYP2C19 genetic polymorphism in Thai, Burmese and Karen populations", Drug Metab Pharmacokinet, 21, 286–290 75 Tom Brody (2016), Chapter 19 – Biomarkers Clinical Trials 76 Tomoyuki N., Masatoshi M., Kaname N et al (2013), "Relationship Between CYP2C19 Loss-of-Function Polymorphism and Platelet Reactivities With Clopidogrel Treatment in Japanese Patients Undergoing Coronary Stent Implantation", Circ J, 77, 1436 – 1444 77 Ugorcakova J., Hlavat T., Novotna T et al (2012), "Detection of point mutations in KRAS oncogene by real-time PCR-based genotyping assay in GIT diseases", Bratisl Lek Listy, 113(2), 73–79 78 Vignal A., Milan D., SanCristobal M et al (2002), "A review on SNP and other types of molecular markers and their use in animal genetics", Genet Sel Evol, 34(3), 275–305 79 Wang T.H, Bhatt D.L & Topo E.J (2006), "Aspirin and clopidogrel resistance: an emerging clinical entity", Eur Heart J, 27(6), 647–654 80 Wrighton S.A et al (1992), "The Human Hepatic Cytochromes P450 Involved in Drug Metabolism", Crit Rev Toxicol, 22 (1), 1-21 81 Yang J, Zhao H.D, Tan J, Ding Y.L, Gu Z.Q and Zou J.J (2013), "CYP2C19 polymorphism and antiplatelet effects of clopidogrel in Chinese stroke patients", Pharm, 68, 183–186 82 Yang Y.S, Wong L.P, Lee T.C., Mustafa A.M., Mohamed Z and Lang C.C (2004) , "Genetic polymorphism of cytochrome P450 2C19 in healthy Malaysian subjects", Br J Clin Pharmacol 83 Zabalza M., Subirana and Sala J (2012), "Meta-analyses of the association between cytochrome CYP2C19 loss- and gain-of-function polymorphisms and cardiovascular outcomes in patients with coronary artery disease treated with clopidogrel", Heart, 98, 100–108 PHỤ LỤC MẪU BỆNH ÁN NGHIÊN CỨU Mã số BN: I Hành chính: 1.Họ tên: 2.Tuổi: Địa chỉ: Bệnh viện điều trị Chấn đoán: Đau thắt ngực không ổn định: Nhồi máu tim không ST chênh lên: Nhồi máu tim có ST chênh lên: II Lý vào viện: III Tiền sử yếu tố nguy bệnh động mạch vành - Béo phì - Tăng huyết áp - Rối loạn chuyển hóa Lipid - Hút thuốc - Đái tháo đường - Tiền sử đau thắt ngực - Tiền sử nhồi máu tim - Tiền sử bệnh mạch vành IV Tiền sử - Tiền sử gia đình: - Tiền sử thân: V Lâm sàng: - Cân nặng: - Chiều cao: - Huyết áp: - Hô hấp: - Tim mạch: VI/ Cận lâm sàng: Công thức máu - Số lượng Hồng cầu (T/l): - Số lượng Bạch cầu (G/l): - Số lượng Tiểu cầu (G/l): - Thể tích hồng cầu trung bình –MCV(fl): - Thể tích tiểu cầu trung bình – MPV(fl): Sinh hóa máu - Cholesterol (mmol/l): - Triglycerid (mmol/l): - HDL (mmol/l): - LDL (mmol/l): - CRP (mg/dL): - Fibrinogen (g/l): - Độ NTTC (%): VII/ Điề u trị: - Các thuốc: + Clopidogrel: liều nạp + Clopidogrel: liều trì + Aspirin: liều nạp + Aspirin: liều trì - Thuốc khác: VIII/ Kết phân tích alen kiểu gen: - CYP2C19*2: - CYP2C19*3: - CYP2C19*17: - Kiểu gen BN: - Hoạt tính chuyển hóa thuốc: Quy trình tách DNA tổng số sử dụng E.Z.N.A blood DNA Mini Kit: Rã đơng mẫu máu đá để hóa chất nhiệt độ phịng Lắc ống máu Chuyển 250µl mẫu vào ống ly tâm vô trùng Thêm 25 µl OB Protease Solutionvà 250 µl BL Buffer Vortex 10 giây Ủ 65 C 10 phút Chú ý: Sau ủ phút, vortex 15 giây Thêm 260 µl Ethanol 100% Vortex 20 giây Ly tâm 1000 vòng/ phút 15 giây để đảm bảo mẫu khơng dính thành nắp ống Chèn HiBind DNA Mini Column vào Collection Tube2ml Chuyển toàn mẫu vào cột (để pipet mức 790 µl) Ly tâm 14.000 vịng/ phút phút 10 Bỏ dịch lọc Collection Tube 11 Lắp HiBind DNA Mini Column vào Collection Tube 2ml 12 Thêm 500 µl HBC Buffer 13 Ly tâm 14.000 vòng/ phút phút 14 Bỏ dịch lọc sử dụng lại Collection Tub 15 Thêm 700 µl DNA Wash Buffer 16 Ly tâm phút 10.000g 17 Bỏ dịch lọc sử dụng lại Collection Tube 18 Lặp lại bước 14 đến 16 cho bước rửa thứ với DNA Wash Buffer 19 Ly tâm HiBind DNA Mini Column 14.000 vòng/ phút phút để làm khô cột 20 Chuyển HiBind DNA Mini Column vào ống ly tâm 2ml 0 21 Thêm 100 µl Elution Buffer (đã làm ấm đến 65 C) Ủ 65 C phút 22 Ly tâm t i 14.000 vòng/ phút phút 23 Thêm 50 µl Elution Buffer phút nhiệt độ phòng 24 Ly tâm 14.000 vòng/ phút phút 25 Thu bảo quản DNA -20 C DANH SÁCH BỆNH NHÂN NGHIÊN CỨU VIỆN TIM MẠCH VIỆT NAM STT Họ tên Nguyễn Thị N Nguyễn Văn Đ Nguyễn Đăng B Nguyễn Thị H Biện Thị T Nguyễn Văn H Bùi Huy C Nguyễn Thị Đ Trần Mạnh S 10 Tạ Văn T 11 Hoàng Ngọc C 12 Hà Văn E 13 Đàm Hữu T 14 Trần Trọng T 15 Đỗ Bích P 16 Nguyễn Văn G 17 Vũ Thị S 18 Nguyễn Văn C 19 Bùi Ngọc S 20 Nguyễn Văn O 21 Lê Văn H 22 Bùi Hải H 23 Nguyễn Văn Đ 24 Nguyễn Văn T 25 Nguyễn Văn Q 26 Trần Ngọc S 27 Vũ Văn T 28 Hoàng Thị N 29 Phạm Văn H XÁC NHẬN CỦA VIỆN TIM MẠCH VIỆT NAM 30 Lương Văn T 31 Hoàng Minh T 32 Sâm Ngọc Đ 33 Nguyễn Văn S 34 Ngơ Dỗn C 35 Nguyễn Văn M 36 Ngô Quang Đ 37 Vũ Đức T 38 Phạm Xuân Đ 39 Ngô Đức Q 40 Bùi Đức N 41 Hà Thế H 42 Trịnh Văn M 43 Phan Văn T 44 Nguyễn Thị T 45 Lê Quang H 46 47 48 49 50 51 52 53 54 Đinh Văn T Nguyễn Thị M Lưu Văn V Dương Đình M Nguyễn Văn A Vũ Duy K Hà Đăng Đ Trần Hồng N Nguyễn Ngọc T HỌC VIÊN ... THẢO ĐÁNH GIÁ MỐI LIÊN QUAN GIỮA ĐỘ NGƯNG TẬP TIỂU CẦU VỚI KIỂU GEN CYP2C19*2, CYP2C19*3 VÀ MỘT SỐ YẾU TỐ KHÁC TRÊN BỆNH NHÂN ĐAU THẮT NGỰC KHÔNG ỔN ĐỊNH TẠI VIỆN TIM MẠCH VIỆT NAM KHÓA LUẬN TỐT... Viện Tim mạch Việt Nam? ?? Đề tài tiến hành với mục tiêu: Xác định tần số phân bố kiểu gen CY2C19*2 CYP2C19*3 bệnh nhân đau thắt ngực không ổn định Đánh giá mối liên quan độ ngưng tập tiểu cầu với. .. nhu cầu thực tiễn đó, chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài: ? ?Đánh giá mối liên quan độ ngưng tậ p tiểu cầu với kiểu gen CYP2C19*2, CYP2C19*3 số yếu tố khác bệnh nhân đau thắt ngực không ổn định