XÉT NGHIỆM KHÁNG NGUYÊN SARS-COV-2 VÀ XÁC NHẬN PHƯƠNG PHÁP CHO XÉT NGHIỆM KHÁNG NGUYÊN SARS-COV-2

TRUNG TÂM KIỂM CHUẨN CHẤT LƯỢNG XÉT NGHIỆM Y HỌC - ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI XÉT NGHIỆM KHÁNG NGUYÊN SARS-COV-2 VÀ XÁC NHẬN PHƯƠNG PHÁP CHO XÉT NGHIỆM KHÁNG NGUYÊN SARS-COV-2 www.qcc.edu.vn Mục tiêu Trình bày chiến lược quốc gia việc sử dụng XNNKN SARS-CoV-2 Trình bày nguyên lý, yếu tố ảnh hưởng, biện giải kết quả, kiểm soát chất lượng, ATSH XNNKN SARS-CoV-2 Trình bày cách thức thực xác nhận phương pháp cho XNNKN SARSCoV-2 Nội dung Chiến lược quốc gia việc sử dụng XNNKN SARS-CoV-2 Nguyên lý, yếu tố ảnh hưởng, biện giải kết quả, kiểm soát chất lượng, ATSH XNNKN SARS-CoV-2 Xác nhận phương pháp cho XNNKN SARS-CoV-2 Tình hình COVID-19 Thế giới Tình hình COVID-19 Thế giới Tình hình COVID-19 Việt Nam Sáng 21.7.2021 Sáng 19/7/2021 SỐ CA NHIỄM ĐANG ĐIỀU TRỊ KHỎI TỬ VONG ĐÃ TIÊM VACXIN 65.607 53.830 11.443 334 4.283.906 liều (4,4%) Các phương pháp xét nghiệm SARS- CoV-2 CHIẾN LƯỢC QUỐC GIA XÉT NGHIỆM NHANH KHÁNG NGUYÊN SARS-COV-2 Ngưỡng phát SARS-CoV-2 Triệu chứng xuất Lây nhiềm hầu hết nhóm Ngưỡng phát xn nhanh KN Ngưỡng phát nuôi cấy vi rút Tải lượng vi rút -2 Ngưỡng phát RT - PCR Thời gian (ngày) 20 Các khuyến nghị (WHO 11/2020) • Đánh đổi cho đơn giản giảm độ nhạy so với xét nghiệm phân tử NAAT Triệu chứng xuất Tải lượng vi rút Ngưỡng phát xn nhanh KN Ngưỡng phát nuôi cấy vi rút Ngưỡng phát RT - PCR Những trường hợp bị bỏ sót thực XN kháng nguyên SARS-CoV-2 -2 2 Thời gian (ngày) Antigen-detection in the diagnosis of SARS-CoV-2 infection using rapid immunoassays Interim guidance – 11 September 2020 Geneva: World Health Organization; 2020 Sensitivity refers to the percentage of SARS-CoV-2 infected patients who are correctly identified as having SARS-CoV-2 infection Mối liên quan Prev với Se, Sp NewYork (Pre=20%) California (Pre=2%) PPV 80% 25% NPV 95% 99.5% Ở quần thể người New York: PPV NPV test số tốt để phát bệnh loại trừ bệnh Nhưng, test hữu ích cho việc xác định người khơng có bệnh xác định người có bệnh quần thể người California PPV= 25%, 10 ca dương tính có 7-8 ca KHƠNG có bệnh Do vậy, cần đặt Se, Sp quần thể có Prev khác để thấy mức ý nghĩa lâm sàng 68 XÁC NHẬN PHƯƠNG PHÁP 69 Yêu cầu mẫu để thực Loại xét nghiệm Số lượng mẫu XN nằm danh sách sử dụng khẩn cấp FDA WHO 10 mẫu dương 10 mẫu âm tính để so sánh với xét nghiệm XN không nằm danh sách sử dụng khẩn Realtime RT-PCR có cấp FDA, WHO, thẩm định danh sách FDA WHO nhà tài trợ tổ chức FIND XN không thuộc danh sách sử dụng khẩn cấp 30 mẫu dương tính 30 mẫu FDA, WHO, chưa tổ chức khác/ FIND âm tính để so sánh với xét thẩm định nghiệm Realtime RT-PCR có danh sách FDA WHO 70 Phương pháp xác nhận ❖Cách 1: Từ mẫu chuẩn bị từ PXN ni cấy virut ● Mẫu pha lỗng từ mẫu ni cấy có chứa virut bất hoạt ● Mẫu kiểm tra xét nghiệm Realtime RT-PCR với chu kỳ (Ct) ghi lại ● Dùng que ngoáy mẫu quết vào nồng độ virut pha loãng đặt vào buffer phù hợp theo Hướng dẫn NSX ● Tăm bơng gắn với KN tái tổ hợp SARSCoV-2 71 Phương pháp xác nhận ❖Cách 2: Từ mẫu bệnh phẩm lâm sàng bệnh nhân nghi ngờ nhiễm COVID19 ● Lấy mẫu ngoáy dịch đường hô hấp BN: cho xét nghiệm RT-PCR ban đầu để xác định kết dương tính, mẫu cho xét nghiệm kháng ngun sau ● Nếu khơng có sẵn mẫu, que lấy mẫu làm PCR phải lưu giữ điều kiện NSX khuyến cáo thời gian khuyến cáo từ lấy mẫu đến làm xét nghiệm ● Số lượng mẫu âm dương tương đương 72 Phương pháp xác nhận ❖Cách 3: Mẫu hồi cứu ● Sử dụng mẫu bệnh phẩm lưu giữ que ngốy dịch hơ hấp người nghi ngờ mắc COVID-19 đồng ý cho việc lưu giữ mẫu bệnh phẩm họ để sử dụng cho mục đích nghiên cứu ● Các mẫu có kết RT-PCR với giá trị Ct ● Bổ sung thêm thông tin triệu chứng ngày lấy mẫu ngày thứ kể từ ngày khởi phát triệu chứng 73 Công cụ ghi chép liệu STT Mã bệnh phẩm Có triệu chứng lâm sàng khơng? Ngày lấy mẫu ngày thứ sau thời điểm khởi phát 74 Kết xét nghiệm KN Kết xét nghiệm RT-PCR (ghi rõ Ct) Phân tích kết Phương pháp cần xác Phương pháp so sánh nhận Dương tính Tổng số Âm tính (Negative) (Positive) Dương tính (Positive) a (True positive) b (False positive) a+b (True positive+ False positive) Âm tính (Negative) c (False negative) d (True negative) c+d (False negative+True negative) Tổng số a+c b+d N (True positive+ (False False negative) positive+ True negative ) Độ nhạy ước tính = a/(a+c)*100 Độ đặc hiệu ước tính = d/(b+d)*100 75 Khoảng tin cậy độ nhạy ❖Khoảng tin cậy 95% độ nhạy tính theo cơng thức sau: [100 X (Q1,se-Q2,se)/Q3,se, 100 X (Q1,se+Q2,se)/Q3,se] Giới hạn dưới: 100 X (Q1,se-Q2,se)/Q3,se Giới hạn trên: 100 X (Q1,se+Q2,se)/Q3,se Trong đó: 76 Khoảng tin cậy độ đặc hiệu Trong đó: Trong đó: sp độ đặc hiệu FP: dương tính giả TN: âm tính thật Độ nhạy lâm sàng độ đặc hiệu lâm sàng giá trị để đánh giá hiệu suất xét nghiệm phải xem xét giá trị dự đoán (Prevalence of disease-Prev) quần thể kiểm tra 77 Tiêu chuẩn chấp nhận Độ nhạy ≥ 80 % độ đặc hiệu ≥ 97% so với xét nghiệm Realtime RT-PCR (theo khuyến cáo WHO) 78 Lưu ý thực xác nhận phương pháp ❖Trước thu thập liệu, phòng XN cần chứng minh đầy đủ lực thực phương pháp XN • Cách lấy lưu mẫu • Quy trình xét nghiệm diễn giải kết • QC phù hợp 79 Lưu ý thực xác nhận phương pháp • Xác nhận điều kiện khuyến cáo nhà sản xuất: Loại mẫu bệnh phẩm, nhiệt độ bảo quản, tình trạng lâm sàng, thời gian nhiễm bệnh BN • Nếu lưu mẫu thừa nhiệt độ âm để sử dụng cần giải kết khác biệt 80 Lưu ý thực xác nhận phương pháp ❖ Kiểm tra kết quả: Nếu có kết khác biệt, định xem lỗi có giải thích khơng? ●Nếu giải thích được, ghi lại lỗi, khơng đưa kết vào phân tích ● Nếu khơng giải thích được, giữ kết lại để phân tích - Các kết khác biệt phát sinh lỗi phương pháp so sánh phương pháp XN - Xem xét tất liệu lâm sàng để định xem có điều kiện tiên mẫu dẫn đến kết khác biệt không? 81 TRÂN TRỌNG CẢM ƠN! ... việc sử dụng XNNKN SARS-CoV-2 Trình bày nguyên lý, yếu tố ảnh hưởng, biện giải kết quả, kiểm soát chất lượng, ATSH XNNKN SARS-CoV-2 Trình bày cách thức thực xác nhận phương pháp cho XNNKN SARSCoV-2... lược quốc gia việc sử dụng XNNKN SARS-CoV-2 Nguyên lý, yếu tố ảnh hưởng, biện giải kết quả, kiểm soát chất lượng, ATSH XNNKN SARS-CoV-2 Xác nhận phương pháp cho XNNKN SARS-CoV-2 Tình hình COVID-19... triển khai thực XNNKN việc giám sát bệnh COVID-19 PXN thực đánh giá giá trị chẩn đoán SPXNNKN Sars-CoV-2 trước triển khai chịu trách nhiệm CLXN Việc lấy mẫu, thực xét nghiệm PXN điểm giám sát