Sản xuất glycoprotein trị liệu trong tế bào động vật có vú

Sản xuất Glycoprotein trị liệu tế bào động vật có vú Giảng viên hướng dẫn: Lê Thị Hà Thanh Thành viên thực hiện: Hoàng Lan Phương Nguyễn Hoàng Cát Nguyên Nguyễn Kiều Giang Nguyễn Thị Khả Hân Huỳnh Kim Vũ Lê Xuân Nhật Vinh NỘI DUNG: Giới thiệu Glycoengineering Tế bào vật chủ Quan điểm “Omics” Kỹ thuật tế bào Kết luận Giới thiệu: Rất nhiều loại protein tái tổ hợp sản xuất thông qua hệ thống biểu tế bào động vât có vú Glycosyl hóa ảnh hưởng đến trình tổng hợp protein tái tổ hợp Tăng tính ổn định thời gian bán hủy protein tuần hoàn máu Giảm khả sinh miễn dịch protein Glycosyl hóa liên kết N liên kết O protein liên kết màng sinh chất Các tế bào CHO lai xa dòng tế bào sử dụng phổ biến • Đa số sử dụng để sản xuất kháng thể đơn dòng (mAbs) Hệ thống biểu sử dụng để sản xuất glycoprotein ngành dược phẩm sinh học Tế bào vật chủ: 2.1 Tế bào buồng trứng chuột Hamster Trung Quốc: Tế bào CHO sử dụng rộng rãi để sản xuất glycoprotein vơ số lợi thế: Tốc độ sinh trưởng nhanh Thích hợp cho ni cấy huyền phù công nghiệp quy mô lớn Phát triển mơi trường ni cấy khơng có huyết Tế bào CHO sử dụng rộng rãi để sản xuất glycoprotein vơ số lợi thế: Tế bào CHO sản xuất glycoprotein tái tổ hợp giống với glycans người Có khả chống lại lây nhiễm virus người, điều giúp giảm thiểu rủi ro an toàn sinh học Năng suất cao Một số glycoprotein trị liệu Cơ quan Thực phẩm Dược phẩm Mỹ (FDA) Cơ quan Thuốc Châu Âu (EMA) phê duyệt: Một số kháng thể đơn dịng Siltuximab (SYLVANT®) Pertuzumab (PERJETA®) Rituximab (RITUXAN®) Ví dụ: Biểu thuốc Nicotiana benthamiana biến đổi gen để mang theo đường sialyl hóa kiểu người tạo cấu trúc mono- disialylaed với liên kết α2,3 α2,6 (Kallolimath et al, 2016) Hạn chế Việc tăng trình sialyl hóa protein làm giảm tần suất tiêm Các enzym hạn chế sản xuất quy trình sinh học quy mơ lớn Qúa trình sialyl hóa ống nghiệm IgG1 Fc glycans không cho thấy tác động đến hoạt động ADCC Các thành tựu Một nghiên cứu trình bày thí nghiệm kích hoạt ST6Gal1 người tế bào CHO loại trực tiếp ST3Gal4/6  gia tăng 2,6 sialyl hóa Nghiên cứu enzyme glycosyl hóa khác tế bào CHO- K1, đạt 19 gen glycosyltransferase q trình glycosyl hóa EPO đặc trưng để đo lường tác động chúng ( yang et al, 2015) Quan điểm “Omics“ Xác định định vị gen Giải Công bố hai gen chuột đồngchúng và hầu hết trình tự sáu dòng tế bào CHO Trung liên gen Quốc (2013) quan đến glycosyl CHO-K1 hóa người Cơ hội việc phát triển kỹ thuật tế bào CHO để cải thiện sản xuất Các tế bào CHO, nơi đồng thời gián đoạn glycoprotein gen FUT8, BAX BAK CRISP / Ví dụ Cas9 đạt xác nhận giải trình tự -> thấy khả chống lại trình apoptosis tăng lên Trình tự gen dịng tế bào trứng hamster Trung Quốc CHO -K1 Ví dụ Đánh giá chi tiết chiến lược kỹ Trình tựcơng xếp dịng thuật sử dụng nghệ CRISP / Cas9 tế bào cóCHO thể đạt cho phiên bảnloại bỏ genhiện để xác định tự cơng dịng tế bào người Hơn nữatrình chínhnày xác chúng vàgiúp đảmích nghệ omics chắn bảoquy trình ổn định vềvà cho tuân thủchúng cGMP mặtsản sắpxuất xếp lại gen sinhbộhọc Tạo điều kiện thuận lợi cho việc xác định rộng rãi đặc tính dịng tế bào di truyền So sánh cấu hình biểu gen dòng CHO sản xuất cao thấp Xác định đoạn vùng telomeric nhiễm sắc thể số tế bào tương quan với suất cao Sự trợ giúp công cụ phiên mã RNA-seq, biểu microRNA tế bào CHO có sẵn Bằng chứng vai trị ngày tăng lên chúng q trình sinh học đa dạng Một số gen microRNA đóng vai trò mục tiêu cho chiến lược kỹ thuật tế bào Trình tự gen CHO Tăng đột biến nghiên cứu protein Giải tần số codon tế bào góp phần lớn vào việc tối ưu hóa trình tự gen mã hóa protein tái tổ hợp Một phân tích protein quy mô lớn xác định 6164 protein từ proteome glycoproteome tế bào CHO ‐ K1 Kết luận quan điểm Các dòng tế bào động vật có vú đặc biệt tế bào CHO sử dụng rộng rãi để sản xuất glycoprotein trị liệu Công nghệ CRISPR / Cas9 ngành RMCEcơng nghiệp phẩm đóng góp phầndược lớn vào sinh phát học triển sản xuất glycoprotein tương lai Nhiều ưu điểm mặt nuôi cấy tế bào có khả tạo hiệu cao Cơ chế hoạt dộng CRISPR / Cas9 trường hợp gây biến đổi trình tự gen Chiến lược glycoengineering phát triển Cuộc cách mạng “omics” mang đến thách thức nhà khoa học việc tích hợp phân tích lượng lớn liệu Giảm fucosyl hóa hoặc tăng sialyl hóa sinh học Việc kết hợp tất liệu "omics" cách sử dụng mơ hình tính tốn giúp mở rộng hiểu biết cải thiện hệ thống biểu khác ngành dược phẩm sinh học sử dụng để sản xuất glycoprotein ... sản xuất glycoprotein trị liệu tế bào HEK293 HT-1080, có nguồn gốc từ thận u xơ phơi thai người Drotrecogin alfa (Xigris®) glycoprotein trị liệu sản xuất nhờ tế bào người (HEK293) Một số glycoprotein. .. mơi trường ni cấy khơng có huyết Tế bào CHO sử dụng rộng rãi để sản xuất glycoprotein vơ số lợi thế: Tế bào CHO sản xuất glycoprotein tái tổ hợp giống với glycans người Có khả chống lại lây nhiễm... số glycoprotein trị liệu Cơ quan Thực phẩm Dược phẩm Mỹ (FDA) Cơ quan Thuốc Châu Âu (EMA) phê duyệt: Chất hoạt hóa plasminogen mơ tPa, ACTILYSE®, ACTIVASE® Human DNAse (PULMOZYME®) Một số glycoprotein