BÀI THỰC HÀNH CỦA HẠNH

BÀI 2: CÁC PHẢN ỨNG ĐỊNH TÍNH MONOSACCHARIDE CÁC PHẢN ỨNG CỦA MONOSACCHARIDE I NGUYÊN TẮC: - Do có chứa chức aldehyde ceton monosaccharide có tính khử gọi đường khử Nếu monosaccharid kết hợp với hydroxyl glucoside disacccharide tạo thành bị tính khử Cịn nhóm OH glucoside nhóm liên kết với nhóm OH alcol monosaccharid disaccharid tạo thành cịn tính khử - Phản ứng quan trọng dùng nhiều định tính định lượng monosaccharide phản ứng khử, tính khử thể ta cho monosaccharide tác dụng với muối kim loại nặng môi trường kiềm tác dụng nhiệt độ - Những phản ứng phản ánh tính chất đặc trưng monosaccharide II MỤC TIÊU: - Phản ứng Trome dựa theo nguyên tắc môi trường kiềm, tác dụng nhiệt độ monosaccharide khử Cu2+  Cu+ - Ở phán ứng với thuốc thử Fehling: thực chất phản ứng trome cải tiến.Ở Cu 2+ dạng kết hợp với muối K-Na- tartrate Phản ứng đặc trưng cho tính khử mono- số disaccharide, sở phương pháp xác định lượng đường khử theo phương pháp Bertrand - Ở phản ứng tráng gương: thực chất phản ứng tác dụng NH 4OH AgNO3 tạo thành phức [Ag(NH3)2]OH, phức tác dụng với glucose tạo thành muối giải phóng kim loại III HỐ CHẤT,DỤNG CỤ, VẬT DỤNG THÍ NGHIỆM: 1.Phản ứng Trome: +1 Ống nghiệm + giá ống nghiệm + 3ml dung dịch glucose 5% + 1ml dung dịch NaOH 5% + dung dịch CuSO4.5H2O 5% + đèn cồn, kẹp ống nghiệm + pipet loại 5ml 2.Phản ứng với thuốc thử Fehling: + dung dịch fehling A (4g CuSO4.5H2O pha 100ml nước cất.) + dung dịch fehling B (20g K-Na-tartrate 15g NaOH pha 100ml nước cất) +1ml glucose 5% + đèn cồn, kẹp ống nghiệm + giá ống nghiệm 3.Phản ứng tráng gương: +0,1ml AgNO3 +dung dịch NH4OH +3ml glucose 5% +giá đựng ống nghiệm, kẹp ống nghiệm IV CÁCH TIẾN HÀNH 1.Phản ứng Trome: Cho vào ống thí nghiệm: - 3ml dung dịch glucose 5% - 1ml dung dịch NaOH 5% - giọt dung dịch CuSO4.5H2O 5% xuất kết tủa xanh Cu(OH)2 Đun sôi, quan sát kết tủa tạo thành giải thích kết Phản ứng với thuốc Fehling Cho vào ống nghiệm : - 0,5ml fehling A 0,5ml fehling B, 1ml glucose 5% lắc đun đến bắt đầu sôi - Quan sát giải thích tượng phản ứng Phản ứng tráng gương Cho vào ống nghiệm : 0,1ml AgNO3 Sau cho vào 1-2 giọt NH4OH để tạo thành kết tủa tan Sau cho vào ống nghiệm 3ml glucose 5% đun sôi Quan sát lớp kết tủa bao phủ thành ống nghiệm giải thích V KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM: 1.Phản ứng Trome: Ban đầu Sau thí nghiệm Kết - Xuất kết tủa màu đỏ gạch - Dựa nguyên tắc môi trường kiềm, tác dụng nhiệt độ monosaccharide khử Cu2+Cu+ Phương trình phản ứng: CuSO4 + NaOH Cu (OH)2 + Na2 SO4 CHO COOH (CH2OH)4 + Cu(OH)2 (CH2OH)4 + Cu2O + 2H2O CH2OH CH2OH Phản ứng với thuốc thử Fehling Ban đầu Sau thí nghiệm Kết - Xuất kết tủa màu đỏ gạch(Cu2O) - Dựa nguyên tắc môi trường kiềm, tác dụng nhiệt độ monosaccharide khử Cu2+Cu+ Phương trình phản ứng: CuSO4 + NaOH Cu (OH)2 + Na2 SO4 COONa CH-OH COONa + Cu(OH)2 + H2 O Cu CH-OH CH-O COOK COOK COONa CH-O CH-O CH-O CHO Cu + COOH (CH-OH)4 +2 H2O (CH-OH)4 CH2OH CH2OH COOK COONa + CH-OH +2 Cu2O CH-OH COOK 3.Phản ứng tráng gương: Ban đầu Sau thí nghiệm Kết Xuất lớp chất màu trắng bạc bám thành ống nghiệm Phương trình phản ứng: AgNO3 + NH4OH AgOH + NH4NO3 AgOH + NH4OH [Ag(NH3)2] OH +2 H2O CHO COONH4 (CH-OH)4 + [Ag(NH3)2]OH (CH-OH)4 CH2OH CH2OH +2Ag + NH3 + H2O VI GIẢI THÍCH, BIỆN LUẬN: 1, Phản ứng Trome: -Trong phân tử glucose có nhóm OH hemiaxetal nên ln có chuyển hóa mạch vịng mạch thẳng, ln có tái tạo lại nhóm CHO (aldehyde) từ nhóm OH C5 mạch vịng nên có tính chất nhóm CHO.Vì co khả khử từ Cu(OH)2 thành Cu2Okết tủa tạo thành màu đỏ gạch - Sự chuyển biến màu từ màu xanh vàng camđỏ gạch glucose 5% + NaOH 5%+ CuSO4, lượng NaOH, CuSO4 dư tiếp tục tác dụng với glucose nên màu kết tủa ngày sậm - Glucose có nhóm CHO có tính khử mạnh, chức –CHO, –CO monosaccharide bị oxi hóa từ Cu2+ chuyển sang Cu+ 2,Phản ứng với thuốc thử Fehling: -Thuốc thử fehling A dung dịch CuSO4 Fehling B dung dịch muối KNa-tartrate.Muối phức hợp chất không bền - Trong môi trường kiềm, mono số dixacarit khử Cu 2+ dạng alcolat đồng thành Cu+(đỏ gạch), chức aldehit bị oxi hóa thành axit muối tương ứng -Glucose có tính khử phân tử có chứa nhóm aldehyde (-CHO) nên đun với dung dịch Fehling khử Cu(OH)2 thành Cu2O 3,Phản ứng tráng gương - Do phân tử glucozo có nhóm aldehyde - CHO ⇒ tỉ lệ glucozo → 2Ag - Dung dịch AgNO3 NH3 oxi hóa glucose thành axit gluconic giải phóng kim loại bạc - Các monosaccharide có khả khử bạc dạng muối thành bạc kim loại (Ag+Ag) BÀI 6: XÁC ĐỊNH CÁC CHỈ SỐ CỦA MỠ I CHỈ SỐ XÀ PHỊNG XĨA 1, Mục tiêu, ngun tắc: Chỉ số xà phịng hóa số mg KOH cần thiết dùng để trung hòa lượng acid béo tự lượng acid béo liên kết với glycerin có 1g chất béo Dưới tác dụng kiềm, glyxerit bị thủy phân tạo thành glyxerin xà phòng ( muối Natri Kali axit béo) 2, Nguyên liệu hóa chất, dụng cụ, vật dụng thí nghiệm: - Dầu thực vật - KOH 0,5N, phenolphtalein 1% - Bình tam giác - HCL 0,5N - hệ thống sinh hàn ngược - dụng cụ để nấu cách thủy 3, Các bước tiến hành: Lấy bình nón, bình làm bình thí nghiệm, bình làm bình kiểm tra, Cho vào: - Bình 1: 1,2ml dầu lạc, 15ml KOH 0,5N - Bình 2: 1ml nước, 15ml KOH 0,5N Lắp bình vào hệ thống sinh hàn ngược, đun nồi cách thủy 50 phút, sau lấy bình làm nguội Thêm vào bình 15ml nước cất giọt phenolphtalein, lắc đều, dung dịch có màu hồng, chuẩn độ dung dịch có màu hồng, chuẩn độ dung dịch hai bình HCL 0,5N màu hồng 4, Tính kết quả: Lượng mg KOH dùng để trung hòa acid béo 1g chất béo C= ( A  B ) * 28 a C: Chỉ số xà phịng hóa A: Lượng HCL 0,5N dùng để chuẩn độ bình kiểm tra B: Lượng HCL 0,5N dùng để chuẩn độ bình thí nghiệm a: trọng lượng chất béo tính gam 28: Số mg KOH tương ứng với 1ml KOH 0,5N Thay số : A=16; B=15,8; a=1  C= 5,6 5, Giải thích, kết luận: Dưới tác dụng enzyme, axit kiềm, đun nóng, mỡ bị thủy phân tạo thành glixerin axit béo muối axit béo bậc cao gọi xà phòng II, CHỈ SỐ ACID 1, Mục tiêu, nguyên tắc: –Chỉ số acid số mg KOH cần thiết dùng để trung hòa lượng acid béo tự có 1g chất béo Chỉ số acid phản ánh mức dộ ôi mỡ – Dưới tác dụng enzyme thủy phân, có nước nhiệt độ cao, triglyceride bị phân cắt mối liên kết este bị thủy phân thành acid béo tự – Trung hòa lượng axit béo tự có chất béo dung dịch KOH phản ứng xảy ra: RCOOH + KOH  RCOOK + H2O –Dùng KOH 0,1N để trung hòa acid béo tự nguyên liệu với phenolphtalein làm chất thị màu 2, Nguyên liệu hóa chất, dụng cụ, vật dụng thí nghiệm: - dầu thực vật - cồn 96° - KOH 0,1N, phenolphtalein 1% cồn 96° - dụng cụ chuẩn độ 3, Các bước tiến hành: Cho vào bình tam giác 1g dầu lạc (=1,12ml) sau cho thêm vào 10ml cồn 96° để hịa tan dầu lạc hồn tồn.Cho vào bình giọt phenolphtalein chuẩn độ dung dịch KOH 0,1N có màu hồng nhạt bền 30 giây 4,Tính kết quả: X=V x f x 5,6 X: Chỉ số acid V: Số ml KOH 0,1N dùng để chuẩn độ (V=0,4) f: Hệ số điều chỉnh nồng độ KOH (f=1) 5,6: số mg KOH tương đương với 1ml KOH 0,1N Thay số: V=0,4 ; f=1  X =0,4 x x 5,6=2,24 5, Biện luận, giải thích: + Chỉ số acid số mg KOH cần thiết dùng để trung hòa lượng acid béo tự có 1g chất béo + Chỉ số acid cho biết chất lượng chất béo, số acid cao chứng tỏ chất béo khơng tươi, bị phân hủy bị oxi hóa phần III, CHỈ SỐ ESTER -Chỉ số ester số mg KOH dùng để trung hòa lượng acid béo liên kết với glyxerin có 1g chất béo Chỉ số ester tính gián tiếp sau: Chỉ số ester = số xà phòng – số acid =5,6-2,24=3,36 IV, ĐỊNH LƯỢNG PROTEIN 1,Mục tiêu, nguyên tắc: Để xác định protein mẫu, ta xây dựng đường chuẩn với dung dịch protein chuẩn biết trước nồng độ BSA Sau cho dung dịch protein vào thuốc thử, sau phút Tiến hành đo dung dịch máy quang phổ kế ta ODX, độ hấp thụ tỷ lệ với lượng mẫu.Thực đối chứng nước cất(OD0).Lấy giá trị OD=ODX – OD0 2,Ngun liệu hóa chất, dụng cụ, vật dụng thí nghiệm: ** Nguyên liệu: **Dụng cụ - Hóa chất: Thuốc thử Bradford - Micropipette - Mẫu tinh bột - Cuvette - Sữa - Paraffilm - Sữa chua - Đầu cồn - Nước cất - Máy đo OD 3, Các bước tiến hành: Chuẩn bị ống cuvette lau khô Dùng micropipette găm vào đầu côn, cho vào cuvette 950µl dung dịch Bradford Sau cho vào:  Ống O: 50µl nước cất  Ống A: 50µl mẫu sữa chua (A)  Ống B: 50µl mẫu sữa (B)  Ống C: 50µl tinh bột (C) 4, Kết thí nghiệm : Protein: OD – Nước cất: 0,648 10 – Tinh bột: 0,282 – Sữa chua: 0,29 – Sữa: 1,164 y = 0,0063x 0,0123 (y giá trị OD; x lượng protein mẫu dung dịch) y = 0,0063x 0,0123 Nước cất y =0,648 x = 0,96 Tinh bột y =0,282 x = 0,31 Sữa chua y =0,29 x = 0,33 Sữa y =1,164 x = 1,86 5, Giải thích - Biện luận: Đây phương pháp đơn giản để đo nồng độ protein dung dịch Phương pháp khơng dùng cho dung dịch có nồng độ Protein thấp (0,05 -0,1 mg/ml) có mặt nhiều chất khác mà hấp thụ vùng cực tím đêm, acid nucleic, số chất béo,… protein dung dịch huyền phù 11 ... AgNO3 NH3 oxi hóa glucose thành axit gluconic giải phóng kim loại bạc - Các monosaccharide có khả khử bạc dạng muối thành bạc kim loại (Ag+Ag) BÀI 6: XÁC ĐỊNH CÁC CHỈ SỐ CỦA MỠ I CHỈ SỐ XÀ PHỊNG... alcolat đồng thành Cu+(đỏ gạch), chức aldehit bị oxi hóa thành axit muối tương ứng -Glucose có tính khử phân tử có chứa nhóm aldehyde (-CHO) nên đun với dung dịch Fehling khử Cu(OH)2 thành Cu2O 3,Phản... (aldehyde) từ nhóm OH C5 mạch vịng nên có tính chất nhóm CHO.Vì co khả khử từ Cu(OH)2 thành Cu2Okết tủa tạo thành màu đỏ gạch - Sự chuyển biến màu từ màu xanh vàng camđỏ gạch glucose 5% + NaOH