tCvn T i ª u c h u È n V i Ö t N a m TCVN 5147 : 1990 ThÞt vμ s¶n phÈm cña thÞt Ph−¬ng ph¸p x¸c ®Þnh d− l−îng Penicillin Hμ Néi - 1990 TCVN 5147:1990 2 Cơ quan biên soạn: Trung tâm kiểm dịch động vật xuất nhập khẩu H nội Cơ quan đề nghị ban hnh: Bộ nông nghiệp v Công nghiệp thực phẩm Cơ quan trình duyệt: Tổng cục Tiêu Chuẩn - Đo lờng Chất lợng Cơ quan xét duyệt v ban hnh: ủy ban khoa học Nh nớc Quyết định ban hnh số 736/ QĐ ngy 31 tháng 12 năm 1990 TCVN 5147 : 1990 3 T I ê u c h u ẩ n v I ệ t n a m tcvn 5147 : 1990 Thịt v sản phẩm của thịt. Phơng pháp xác định d lợng penixilin Meat and meat products. Determination of penicillin residues Tiêu chuẩn ny quy định phơng pháp xác định tổng penicillin tồn d trong thịt v sản phẩm của thịt dùng lm thực phẩm cho ngời v thức ăn gia súc. 1 Đặc tính chung Penicillin thuộc họ kháng sinh, l chất hữu cơ có phân tử lợng lớn, tồn tại trong thịt v sản phẩm của thịt với hm lợng rất nhỏ. Họ penicillin gồm nhiều dẫn xuất nh benzyl penicillin, potasium penicillin, phenoxymethyl penicillin, ampycillin, anhydrous, bezathyl penicillin G, procaine penicillin G, v.v 2 Nguyên tắc áp dụng phơng pháp gián tiếp, dựa vo phản ứng tạo phức đặc trng v hon ton định lợng của penicillin với thuốc thử phenaltrolin- cadimi sinh ra phức bền. Chiết phức ny bằng nitrobenzen v đo phổ hấp thụ nguyên tử của kim loại cadimi trong phức ở tớng hữu cơ, hay phân hủy tớng hữu cơ, lấy cadimi vo axit clohydric, dung dịch 1% v do phổ của caidimi. 3 Lấy mẫu Theo TCVN 4833 - 89 ( ST SEV 2433 - 80) 4 Dụng cụ, thiết bị v hoá chất 4.1 Dụng cụ, thiết bị: + Máy phổ hấp thụ nguyên tử SP - 9/800 hay loại tơng đơng. + Đèn catốt rỗng của cadimi + Bếp đun cách thủy + Máy xay sinh tố TCVN 5147:1990 4 + Bình định mức các loại + Pipet các loại + Cốc chịu nhiệt + Phễu chiết 250 ml. + Một số dụng cụ khác 4.2 Hóa chất: Dùng loại tinh khiết cao 99,99% hay tinh khiết quang phổ ( Specpure). + Thuốc thử Tris ( 1,10 - Phenaltrolin) Cadimi + Dung môi nitrobenzen ( C 6 H 5 NO 2 ) + Dung dịch gốc tiêu chuẩn của cadimi nồng độ 1mg/ ml + Axit nitric, dung dịch 65% + Hydroperoxyt (H 2 O 2 ) dung dịch 30% + Dung dịch 1% của 2 axitclohydric v nitric trong nớc + Nớc cất 2 lần. 5 Chuẩn bị thử 5.1 Chuẩn bị mẫu phân tích: Mẫu thịt cần phân tích đợc thái nhỏ, trộn đều, cân 1 lợng 10 g cho vo máy xay sinh tố. Thêm vo 30 ml nớc cất rồi cho máy chạy trong 5 phút. Cho ton bộ huyễn dịch vo cốc chịu nhiệt, điều chỉnh pH khoảng 5 - 6 rồi đun cách thủy ở 60 - 70 0 C trong 30 phút. Chuyển dung dịch ny vo bình định mức v định mức bằng nớc cất đến thể tích 50 ml. Sau đó ly tâm lắng cặn, lấy 25 ml dịch nớc trong cho tác dụng với 1 lợng d (15 lần) thuốc thử Tris (1,10 - Phenaltrolin) cadimi (khoảng 10 ml). Lắc kỹ trong 10 phút, sau đó cho 5ml dung môi nitrobenzen v lắc tiếp trong 30 phút. Để yên cho phân lớp hon ton trong phễu chiết rồi tách lấy phần dung môi hữu cơ chứa phức liên hợp ra. Tro hóa ớt dung dịch chiết ny bằng 30 ml axit nitric 65% v vi giọt hydropeoxyt 30% trong bình keldan đến khi thu đợc dung dịch mẫu trong. Chuyển ton bộ mẫu ra cốc chịu nhiệt v cô cạn để đuổi axit. Sau đó thêm 5ml axit clohydric 1% vo cốc, chuyển dung dịch ny sang bình định mức v định mức bằng axit clohydric 1% đến thể tích 20 ml rồi tiến hnh xác định cadimi. TCVN 5147 : 1990 5 5.2 Pha dãy chuẩn: Dùng dung dịch gốc tiêu chuẩn của cadimi nồng độ 1 mg/ml v axit clohydric 1% để pha loãng. Tính lợng phù hợp để pha dãy chuẩn có nồng độ của cadimi l 0, 1 - 0,5 - 1,0 - 1,5 - 2,0 - 2,5 g/ml trong bình định mức có thể tích 25 ml 5.3 Chuẩn bị mẫu trắng: Đồng thời với việc chuẩn bị mẫu phân tích phải chuẩn bị thêm mẫu trắng để so sánh v bổ chính nền. Mẫu trắng đợc chuẩn bị nh mẫu phân tích nhng không có mẫu phân tích. 5.4 Các điều kiện thực nghiệm: + Vạch phổ đo của cadimi 228,8nm; + Khe đo máy AAS 0,5 nm + Burner: Loại khe di 10 cm + Cờng độ đến catốt rỗng : dùng 80% giá trị cực đại + Hỗn hợp khí: không khí nén v axetylen 4,2/1,2 lít/ phút + Tốc độ dẫn mẫu : 4, 5 - 5 ml / phút + Thời gian đo: 5 - 10 giây + Các điều kiện khác chọn phù hợp với máy AAS 6 Tiến hnh thử + Đặt các thông số đã chọn ở mục 5.4 cho máy để đo cadimi + Cho máy chạy để ổn định (15 phút) + Đo phổ hấp thụ của cadimi lần lợt từ các mẫu chuẩn, mẫu trắng. Rồi đến mẫu phân tích. Mỗi mẫu đo 3 lần lấy giá trị l trung bình cộng của 3 lần thử đồng thời có sai lệch giá trị không vợt quá 15%. + Hiệu chỉnh giá trị của mẫu trắng (nếu có) + Dựng đờng chuẩn theo hệ tọa độ D -C. Trong đó D l cờng độ của vạch phổ hấp thụ của cadimi trong các mẫu chuẩn tơng ứng với các nồng độ C của nó trong dãy chuẩn. + Xác định nồng độ Cx của cadimi trong mẫu phân tích theo đờng chuẩn trên. TCVN 5147:1990 6 7 Tính kết quả Tổng hm lợng của cadimi trong mẫu phân tích đợc tính theo công thức sau C - Cx .V ở đây V = 20 ml v C tính bằng Mg Sau khi xác định đợc hm lợng cadimi trong mẫu phân tích ta suy ra lợng penicillin theo phản ứng sau: Penicillin + Tris ( 1,10 - phenal trolin) Cd phức liên hợp Cd( phenaltrolin) 3 (Penicillin) 2 Theo thnh phần của phức liên hợp ta thấy rằng: 1 nguyên tử cadimi tơng ứng với 2 phân tử penicillin hay 112,4 g cadimi tơng ứng với 2 mol penicillin hay 112,4 g cadimi tơng ứng với 2 mol penicillin Vậy 1 g cadimi tơng ứng với 2/112,4 mol penicillin. Do đó Cg 2.C/112,4 mol Suy ra công thức tính hm lợng tổng penicillin l G = 2.C/112,4.a Tính bằng mol/g Chú thích Nếu sau khi chiết phức bằng nitrobenzen m tiến hnh đo ngay cadimi trong phức thì mẫu chuẩn cũng phải chiết bằng nitrobenzen rồi mới đo. ở đây cần lu ý vì thuốc thử ở Tris (1,10 - Phenaltrolin) Cd lấy d 15 lần nên dẫy dung dịch chuẩn không phải l dung dịch cadimi gốc m l dung dịch penicillin gốc. Sau đó cho lợng dung dịch gốc ny tác dụng với lợng d thuốc thử, sau đó chiết bằng nitrobenzen rồi mới đo v xác định trực tiếp tổng penicillin trong mẫu theo dãy dung dịch chuẩn. Cách ny phức tạp v tốn một lợng lớn dung môi nên ta phải tiến hnh vô cơ hóa tiếp ( nh mục 5.1). Theo phơng pháp ny thì dung dịch chuẩn gốc l dung dịch chứa ion Cd 2+ . TCVN 5147 : 1990 7 Phô lôc 1. Pha dung dÞch gèc tiªu chuÈn cña cadimi nång ®é 1mg/ml; c©n 1,1423g cadimi oxyt bét (Cd0), thªm 40 ml axit nitric 6M, ®un nhÑ cho tan hÕt, ®Ó nguéi råi ®Þnh møc b»ng n−íc cÊt ®Õn 1 lÝt. Dung dÞch nμy gäi lμ dung dÞch A. 2. Dung dÞch cadimi nång ®é 10μg/ml; lÊy 1 ml dung dÞch A, pha lo·ng vμ ®Þnh møc b»ng axit nitri 1% ®Õn 100ml. Dung dÞch nμy gäi lμ dung dÞch B. 3. Dung dÞch cadimi nång ®é 0,1 μg/ml: lÊy 1 ml dung dÞch B, pha lo·ng vμ ®Þnh møc b»ng axit nitric 1% ®Õn thÓ tÝch 100ml. . tCvn T i ª u c h u È n V i Ö t N a m TCVN 5147 : 1990 ThÞt vμ s¶n phÈm cña thÞt Ph−¬ng ph¸p x¸c ®Þnh d− l−îng Penicillin Hμ Néi - 1990 TCVN 5147:1990. định ban hnh số 736/ QĐ ngy 31 tháng 12 năm 1990 TCVN 5147 : 1990 3 T I ê u c h u ẩ n v I ệ t n a m tcvn 5147 : 1990 Thịt v sản phẩm của thịt. Phơng pháp