Tiểu Luận Chuyên Nghành Vi Sinh

TRƯỜNG CAO ĐẲNG Y TẾ HÀ NỘI TIỂU LUẬN CHUYÊN NGHÀNH VI SINH Họ tên : Đỗ Phương Dung Lớp : XN12B Giáo viên hướng dẫn : Nguyễn Thị Hồng Ngọc MỤC LỤC Tiểu luận Vi sinh – Đỗ Phương Dung I, HƯỚNG DẪN CHẨN ĐOÁN VIRUS SỐT XUẤT HUYẾT DENGUE…… II, HƯỚNG DẪN CHẨN ĐOÁN VIRUS CÚM A/B…………………………….6 III, HƯỚNG DẪN CHẨN ĐOÁN VIRUS RUBELLA………………………… 10 IV, HƯỚNG DẪN CHẨN ĐOÁN VIRUS VIÊM GAN B………………………11 V, HƯỚNG DẪN CHẨN ĐỐN VIRUS VIÊM GAN C ……………………….12 VI, QUY TRÌNH XÉT NGHIỆM TEST NHANH HBSAG…………………… 14 VII, HƯỚNG DẪN QUY TRÌNH NUÔI CẤY VÀ PHÂN LẬP VI KHUẨN TỪ BỆNH PHẨM PHÂN…………………………………………………………….18 VIII, QUY TRÌNH NI CẤY PHÂN LẬP VI KHUẨN TỪ NƯỚC TIỂU……21 IX, QUY TRÌNH NI CẤY PHÂN LẬP BỆNH PHẨM MỦ, ÁP XE……… 24 X, QUY TRÌNH NI CẤY PHÂN LẬP BỆNH PHẨM ĐỜM, DỊCH RỬA PHẾ QUẢN…………………………………………………………………………… 27 XI, QUY TRÌNH NI CẤY VÀ ĐỊNH DANH VI NẤM BẰNG PHUƠNG PHÁP THÔNG THƯỜNG…………………………………………………… 30 I, HƯỚNG DẪN CHẨN ĐOÁN VIRUS SỐT XUẤT HUYẾT DENGUE Tiểu luận Vi sinh – Đỗ Phương Dung MỤC ĐÍCH  Mơ tả hướng dẫn cách thực xét nghiệm Dengue virus NS1 phương pháp chẩn đoán huyết PHẠM VI ÁP DỤNG Áp dụng Khoa xét nghiệm Vi sinh ĐỊNH NGHĨA, THUẬT NGỮ, CHỮ VIẾT TẮT HD Hướng dẫn QC Quality control QLCL Quản lý chất lượng QTKT Quy trình kỹ thuật VK Vi khuẩn VS Vi sinh Tiểu luận Vi sinh – Đỗ Phương Dung NGUYÊN LÝ Xét nghiệm nhanh kháng nguyên SD BIOLINE NS1 xét nghiệm bước có độ nhạy độ đặc hiệu cao để phát định tính kháng nguyên NS1 virus Dengue CHUẨN BỊ Bộ xét nghiệm chẩn đoán SD BIOLINE Dengue NS1 Ag gồm: − 25 thử kèm theo gói hút ẩm đựng riêng túi nhôm − 25 ống nhỏ giọt dung lần − tờ HDSD Mẫu thử: máu toàn phần, huyết huyết tương Găng tay, đồng hồ bầm Dụng cụ đựng chất thải, khử trùng THỰC HIỆN Để tất thành phần Kit xét nghiệm mẫu nhiệt độ phòng (khoảng 15°C - 30°C) trước mở xét nghiệm Lấy dụng cụ khỏi túi nhôm, đặt lên mặt phẳng khô Đánh dấu thử mã bệnh nhân Tiến hành xét nghiệm để tránh bị ẩm 2.Dùng ống nhỏ giọt cung cấp kit thử, nhỏ giọt (khoảng 100ml) mẫu thử vào giếng mẫu “S” Đọc kết 15-20 phút Tiểu luận Vi sinh – Đỗ Phương Dung KẾT QUẢ − − − Âm tính: Chỉ xuất vạch chứng (‘C’) tron cửa sổ kết cho biết kháng nguyên NS1 không xuất Dương tính: Xuất vạch màu (vạch ‘T’ vạch ‘C’) tron cửa sổ kết cho biết mẫu dương tính với kháng nguyên NS1 ĐIều cho biết nhiễm virus Dengue thời kỳ sớm Khơng có giá trị: Không xuất vạch chứng ‘C’ cửa sổ kết có nghĩa xét nghiệm khơng có giá trị, có hay khơng xuất vạch chứng ‘T’ KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG Chất lượng bệnh phẩm Bệnh phẩm lấy đúng, đủ thực xét nghiệm sớm tốt Nếu khơng vận chuyển phải bảo quản nhiệt độ lạnh ( 2-8oC)  Các mẫu có ly giải máu, chứa yếu tố thấp khớp, mỡ máu, yếu tố vàng da dẫn đến kết sai Chất lượng test thử  Thanh thử Asan Easy Test Dengue NS1 Ag 100 có chữ T, chữ C tương ứng với vạch thử nghiệm “vạch chứng” bề mặt Cả vạch T vạch chứng khơng nhìn thấy cửa sổ kết trước nhỏ mẫu  Sử dụng pipet đầu côn riêng biệt cho mẫu xét nghiệm để tránh làm nhiễm chéo mẫu gây kết sai Tiểu luận Vi sinh – Đỗ Phương Dung AN TOÀN Áp dụng biện pháp an toàn chung xử lý mẫu thực xét nghiệm theo quy trình an toàn xét nghiệm mã hiệu VS.QTQL.10 LƯU Ý   Thời gian đọc kết 15-20 phút Mọi kết đọc sau q 20 phút khơng có giá trị phải thử nghiệm lại Các thuốc thử, thử mẫu phải để nhiệt độ phòng trước tiến hành xét nghiệm II, HƯỚNG DẪN CHẨN ĐỐN VIRUS CÚM A/B MỤC ĐÍCH  Mơ tả hướng dẫn cách thực xét nghiệm test cúm A&B phương pháng sắc ký miễn dịch nhằm phát định tính phân biệt kháng nguyên virus cúm type A type B trực tiếp từ bệnh phẩm tăm lấy mẫu từ mũi họng PHẠM VI ÁP DỤNG Tiểu luận Vi sinh – Đỗ Phương Dung Áp dụng Khoa xét nghiệm Vi sinh ĐỊNH NGHĨA , THUẬT NGỮ , CHỮ VIẾT TẮT HD Hướng dẫn QC Quality control QLCL Quản lý chất lượng QTKT Quy trình kỹ thuật VK Vi khuẩn VS Vi sinh NGUYÊN LÝ Xét nghiệm nhanh SD BIOLINE Influenza Antigen thử nhiệm miễn dịch sắc ký nhằm phát định tính phân biệt kháng nguyên cúm type A type B CHUẨN BỊ * Kit thử SD BIOLINE Influenza Antigen gồm: SD BIOLINE Influenza Antigen [10 tests/Kit] Cat No 19FK11: − − 10 thử đựng riêng túi nhơm kèm gói hút ẩm 10 tube xét nghiệm dung lần − Dung môi xét nghiệm (1x5ml/lọ) Tiểu luận Vi sinh – Đỗ Phương Dung − − − − 10 ống nhỏ dung lần 10 tăm vô khuẩn để lấy mẫu Tăm chứng: băm chứng dương cúm A, tăm chứng dương cúm B, tăm âm cúm tờ HDSD SD BIOLINE Influenza Antigen [25 tests/Kit] Cat No 19FK12: 25 thử đựng riêng túi nhơm kèm gói hút ẩm 25 tube xét nghiệm dung lần − Dung môi xét nghiệm (1x10ml/lọ) − 25 ống nhỏ dung lần − 25 tăm vô khuẩn để lấy mẫu − Tăm chứng: băm chứng dương cúm A, tăm chứng dương cúm B, tăm âm cúm − tờ HDSD Găng tay, đồng hồ bấm Dụng cụ đựng chất thải, khử trùng − − THỰC HIỆN [Tách chiết mẫu thử] − − − − Tất mẫu thử tăm không dung môi trường vận chuyển tách chiết theo phương pháp sau: Để thử mẫu thử nhiệt độ phòng trước tiến hành xét nghiệm Giữ ống nhỏ giọt thẳng đứng, hút khoảng 300ml dung môi xét nghiệm, chuyển 300ml dm vào tube xét nghiệm Đưa tăm vào tube xoay tăm lên thành lần [Mẫu hút dịch mũi, dịch hầu họng mẫu tách chiết môi trường vận chuyển] − − Dùng pipet nhỏ 100ml mẫu tách chiết dịch hút, mẫu vận chuyển vào tube Trộn sau thực theo quy trình phản ứng thử Tiểu luận Vi sinh – Đỗ Phương Dung [Phản ứng thử] − − − Lấy thử khỏi túi nhôm trước sử dụng Đặt thử vào tube xét nghiệm với chiều mũi tên in thử xuống Không cầm nhấc thử đến q trình xét nghiệm hồn thành Đọc kết sau 15 phút KẾT QUẢ − − − Âm tính: Chỉ xuất vạch màu đỏ vạch chứng Dương tính: Xuất vạch màu đỏ vùng đọc vạch chứng (cúm A) vùng đọc kết (cúm B) Kết khơng có giá trị không xuất vạch chứng KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG Chất lượng bệnh phẩm  Bệnh phẩm lấy đúng, lấy đủ  Bệnh phẩm sau lấy làm xét nghiệm sớm tốt Nếu không làm phải đựng mơi trường vận chuyển, bảo quản nhiệt độ phòng( 15-30o C) lọ khơ có nắp đậy vịng điều kiện lạnh( 2-8o C) vòng ngày trước xét nghiệm Chất lượng dụng cụ xét nghiệm kít thử  Dụng cụ xét nghiệm phải để nhiệt độ phòng  Dụng cụ xét nghiệm nhạy cảm với độ ẩm nhiệt độ Phải thực xét nghiệm sau lấy dụng cụ khỏi vỏ đựng  Khơng sử dụng kít thử hết hạn Không làm đông băng  Không cất giữ tủ lạnh AN TOÀN Tiểu luận Vi sinh – Đỗ Phương Dung Áp dụng biện pháp an toàn chung xử lý mẫu thực xét nghiệm theo quy trình an tồn xét nghiệm mã hiệu VS.QTQL.10 LƯU Ý • • • • • • • • • • Chỉ dùng để chẩn đốn in vitro Khơng tái sử dụng Phải thực theo hướng dẫn để có kết xác Kỹ thuật viên xét nghiệm phải đào tạo sử dụng dụng cụ xét nghiệm phải có kinh nghiệm thao tác labo Không ăn hút thuốc sử lý mẫu thử Mang găng tay bảo vệ xử lý mẫu, sau rửa tay Trách làm bẩn tung tóe tạo luồng khí Dùng chất tẩy trùng thích hợp để làm vết vấy bẩn Khử trùng loại bỏ tất mẫu xét nghiệm, xét nghiệm phản ứng nguyên liệu nhiễm trùng tiềm ẩn vào thùng chứa rác thải sinh học nguy hiểm Không sử dụng dụng cụ xét nghiệm bị hỏng vỏ bị rách Không trộn làm lẫn lộn thuốc thử, mẫu thử khác Dung mội thử nghiệm kháng ngun cúm SD Bioline có chứa chất kháng khuẩn khơng gây hại cho người sử dụng định an toàn labo tuân thủ III, HƯỚNG DẪN CHẨN ĐOÁN VIRUS RUBELLA NGUYÊN LÝ 10 Tiểu luận Vi sinh – Đỗ Phương Dung - Cấy vùng nguyên uỷ, đốt que cấy cấy phân vùng để dễ phân lập - Đối với bệnh phẩm phân bảo quản môi trường bảo quản + Mẫu phải trộn + Nhỏ giọt lên môi trường MC SS , TCBS, thạch kiềm tùy theo yêu cầu xét nghiệm; + Cấy đường thẳng zigzăc để dễ phân lập;  Các môi trường sau cấy để vào tủ ấm 37oC /18-24h  Phết tiêu nhuộm Gram để nhận định bạch cầu, sơ đánh giá có hình ảnh phẩy khuẩn Gram âm khơng DIỄN GIẢI KẾT QUẢ Sau 24h kiểm tra khuẩn lạc đĩa môi trường: - Trên môi trường MC: quan sát khuẩn lạc không lên men lactose (không làm đổi màu mơi trường) Nếu có khuẩn lạc khơng lên men đường: bắt khuẩn lạc vào giá đường ngắn ngưng kết với kháng huyết Salmonella Shigella, E coli gây bệnh - Trên môi trường SS: quan sát khuẩn lạc không lên men lactose (không làm đổi màu môi trường) sinh H2S ( đỉnh khuẩn lạc có màu đen) Nếu có khuẩn lạc khơng lên men đường sinh H2S : bắt khuẩn l lạc vào giá đường ngắn ngưng kết với kháng huyết Salmonella Nếu có khuẩn lạc khơng lên men đường không sinh H2S : bắt khuẩn l lạc vào giá đường ngắn ngưng kết với kháng huyết Shigella - TCBS, thạch kiềm : Quan sát phát triển vi khuẩn: Trên đĩa thạch kiềm có khuẩn lạc trịn, lồi, nhẵn, bóng (dạng S), giọt sương, nhuộm soi có hình ảnh phẩy khuẩn Gram âm cấy chuyển lên men đường ngắn, test oxydase dương tính định danh tiếp Trên đĩa thạch TCBS thấy khuẩn lạc dạng S, màu vàng, tiến hành nuôi cấy thạch kiềm  Làm kháng sinh đồ với chủng gây bệnh  Trả kết quả: + Nuôi cấy dương tính: phân lập vi khuẩn gây bệnh Salmonella, Shigella, Vibrio→Trả kết theo vi khuẩn gây bệnh + Ni cấy âm tính: phân lập khơng có vi khuẩn gây bệnh trả: “khơng có vi khuẩn gây bệnh” 20 Tiểu luận Vi sinh – Đỗ Phương Dung KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG - Các môi trường nuôi cấy phải kiểm tra hàng tuần trước sử dụng - Thuốc nhuộm kiểm tra hàng tuần - Kết QC phải có ghi chép AN TỒN   Phải cẩn thận tay tiếp xúc với mẫu bệnh phẩm thực qui trình Xử lý tất bệnh phẩm tránh lây nhiễm VIII, QUY TRÌNH NI CẤY PHÂN LẬP VI KHUẨN TỪ NƯỚC TIỂU MỤC ĐÍCH Mơ tả quy trình kỹ thuật ni cấy, theo dõi trả kết bệnh phẩm nước tiểu cho nhân viên phịng ni cấy thực PHẠM VI ÁP DỤNG Quy trình áp dụng cho nhân viên phịng ni cấy, khoa Vi sinh, Bệnh viện 21 Tiểu luận Vi sinh – Đỗ Phương Dung ĐỊNH NGHĨA, THUẬT NGỮ , CHỮ VIẾT TẮT Định nghĩa  Không áp dụng Giải thích thuật ngữ  Khơng áp dụng Từ viết tắt  SOP = Quy trình chuẩn (Standard of Procedure)  KXN = Khoa Xét nghiệm  BA = Thạch máu  MC = Thạch macconkey  CHL = Thạch chromatic detection  UTI = Thạch Uti NGUYÊN LÝ Dùng ăng chuẩn để cấy đếm môi trường thích hợp từ tính số lượng vi khuẩn có 1ml nước tiểu TRANG THIẾT BỊ Thiết bị  Tủ an toàn sinh học  Tủ ấm CO2  Tủ ấm Memmert  Kính hiển vi Dụng cụ  Đèn cồn  Que cấy  Giá để bệnh phẩm  Dầu soi Hóa chất, thuốc thử  Thạch máu, thạch macconkey  Các mơi trường, hóa chất cho định danh vi khuẩn  Bộ thuốc nhuộm Gram TIẾN22 HÀNH Tiểu luận Vi sinh – Đỗ Phương Dung Bệnh phẩm Nước tiểu: bệnh phẩm phải có đầy đủ thông tin, đủ số lượng theo yêu cầu xét nghiệm, lọ đựng bệnh phẩm phải đậy chặt Kỹ thuật tiến hành - Để môi trường nuôi cấy vào tủ ấm 37oC 10 - 15 phút; - Nước tiểu lắc trộn đều; - Dùng que cấy định lượng µl/pipete hút µl lấy nước tiểu ria cấy khắp bề mặt môi trường BA MC - Cho khoảng 3ml vào tube thủy tinh vô trùng 5ml đem ly tâm với tốc độ 3000 vòng/10 phút; - Chắt bỏ nước nổi, lấy cặn phết lam nhuộm Gram đánh giá sơ bệnh phẩm - Để đĩa thạch nuôi cấy vào tủ ấm 37oC 18- 24giờ  Bắt khuẩn lạc nghi ngờ vi khuẩn gây bệnh, mọc riêng rẽ số lượng chiếm ưu  Nhuộm soi Gram khuẩn lạc, thử nghiệm thử nghiệm sinh vật hóa học đơn giản định danh sinh vật hóa học (Bộ API …)  Chọn khuẩn lạc riêng rẽ, nghi nghờ gây bệnh ria cấy phân lập môi trường định danh (CHL UTI)  Định danh vi khuẩn gây bệnh test sinh vật hóa học, giá đường API máy VITEK2- COMPACT tùy theo loại vi khuẩn PHIÊN GIẢI KẾT QUẢ Dương tính: Phân lập định danh vi khuẩn gây bệnh Trả kết tên vi khuẩn đến mức độ chi loài + Đếm số lượng khuẩn lạc có mặt đĩa thạch x1000 -> số lượng vi khuẩn/ml Chỉ trả với trường hợp số lượng khuẩn lạc đếm đĩa thạch ≥ 10 (tính riêng cho loại vi khuẩn); + Nếu ≥ loại khuẩn lạc bệnh phẩm xem nhiễm bẩn, đề nghị lấy bệnh phẩm mới;  Trả lời số lượng vi khuẩn/ml 23 Tiểu luận Vi sinh – Đỗ Phương Dung + Nếu số lượng vi khuẩn ≥ 105/ml trẻ em 104/ml trả kết dương tính ≥ 105 vi khuẩn/ml (104 trẻ em) + Nếu số lượng vi khuẩn 104 - 105/ml trả kết theo số lượng khuẩn lạc đếm đĩa thạch ni cấy Âm tính: Khơng tìm thấy khơng phân lập vi khuẩn gây bệnh KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG - BA, MC, CHL, UTI phải kiểm tra hàng tuần trước sử dụng - Thuốc nhuộm kiểm tra hàng tuần AN TOÀN − − − − Kết QC phải có ghi chép Thực bảo hộ cá nhân đầy đủ tiếp xúc với bệnh phẩm Các bước phải tiến hành tủ ATSH Xử lý bệnh phẩm theo quy đinh, phịng tránh lây nhiễm chéo IX, QUY TRÌNH NI CẤY PHÂN LẬP BỆNH PHẨM MỦ, ÁP XE MỤC ĐÍCH Mơ tả quy trình kỹ thuật ni cấy, theo dõi trả kết bệnh phẩm mủ, áp xe cho nhân viên phịng ni cấy thực PHẠM VI ÁP DỤNG 24 Tiểu luận Vi sinh – Đỗ Phương Dung Quy trình áp dụng cho nhân viên phịng nuôi cấy, khoa Vi sinh, Bệnh viện ĐỊNH NGHĨA, THUẬT NGỮ ,CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt  SOP  KXN  BA  CA  BHI = = = = = Quy trình chuẩn (Standard of Procedure) Khoa Xét nghiệm Thạch máu Thạch sô cô la Brain Heart Infusion (ống canh thang) NGUYÊN LÝ Bệnh phẩm cấy mơi trường thích hợp để khí trường phù hợp làm tăng sinh vi khuẩn TRANG THIẾT BỊ VÀ VẬT TƯ Thiết bị  Tủ ấm Memmert  Tủ ấm CO2  Kính hiển vi  Tủ an toàn sinh học Dụng cụ  Dầu soi  Đèn cồn  Que cấy  Giá đựng bệnh phẩm Hóa chất, thuốc thử  Thạch máu  Thạch sô cô la  Canh thang BHI  Các mơi trường, hóa chất để định danh vi khuẩn  Bộ thuốc nhuộm Gram 25 Tiểu luận Vi sinh – Đỗ Phương Dung TIẾN HÀNH - Với que tăm bông: cho vào canh thang BHI, để tủ ấm 37O C qua đêm; + Ngày hôm sau dùng que cấy lấy bệnh phẩm từ ống canh thang cấy phân vùng đĩa BA, cho vào tủ ấm 370 C/24 h - Với bệnh phẩm mủ, áp xe: + Lấy đĩa BA ủ ấm 10 – 15 phút; + Nhỏ giọt bệnh phẩm dùng pipét hút bệnh phẩm lên bề mặt đĩa thạch nuôi cấy + Đốt que cấy để nguội sau cấy ngun uỷ mơi trường cấy phân vùng; + Đĩa BA cho vào tủ ấm 37OC/ 24h – 48h + Phết tiêu nhuộm Gram - Quan sát theo dõi Kiểm tra đĩa BA sau 24 h ủ ấm, có khuẩn lạc nghi ngờ, phân lập định danh theo thường quy  Làm kháng sinh đồ với chủng vi khuẩn phân lập DIỄN GIẢI KẾT QUẢ    Xem kết nhuộm Gram vật kính dầu 100 kết hợp xem tế bào, nấm, vi khuẩn Nuôi cấy âm tính: sau ngày vi khuẩn khơng mọc, trả kết quả: “Khơng có vi khuẩn gây bệnh” Ni cấy dương tính: ghi đầy đủ tên với vi khuẩn gây bệnh KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG Môi trường BA, BHI, CA phải kiểm tra hàng tuần trước sử dụng; - Các thuốc nhuộm kiểm tra hàng tuần xem chất lượng vơ khuẩn;  Kết QC phải có ghi chép bảo lưu 26 Tiểu luận Vi sinh – Đỗ Phương Dung AN TOÀN - Phải trang bị bảo hộ cá nhân tiếp xúc với mẫu bệnh phẩm thực qui trình - Xử lý tất bệnh phẩm tránh lây nhiễm X, QUY TRÌNH NUÔI CẤY PHÂN LẬP BỆNH PHẨM ĐỜM, DỊCH RỬA PHẾ QUẢN MỤC ĐÍCH Mơ tả quy trình hướng dẫn cho cán phịng ni cấy quy trình ni cấy để phân lập định danh vi khuẩn gây bệnh từ đờm dịch rửa phế quản PHẠM VI ÁP DỤNG Quy trình áp dụng cho nhân viên phịng nuôi cấy, khoa Vi sinh, Bệnh viện ĐỊNH NGHĨA , THUẬT NGỮ , CHỮ VIẾT TẮT Giải thích thuật ngữ Không áp dụng Từ viết tắt  SOP = Quy trình chuẩn (Standard of Procedure)  KXN = Khoa Xét nghiệm  27 Tiểu luận Vi sinh – Đỗ Phương Dung      BAL IS MC BA CA = = = = = Dịch rửa phế quản Đờm Thạch MacConkey Thạch máu Chocolate Agar: Thach sô cô la NGUYÊN LÝ Bệnh phẩm cấy môi trường phù hợp, điều kiện thích hợp giúp tăng sinh vi khuẩn từ lựa chọn vi khuẩn có khả gây bệnh Cấy đờm bán định lượng giúp cho việc trả kết vi khuẩn gây bệnh xác TRANG THIẾT BỊ VÀ VẬT TƯ Thiết bị Tủ an toàn sinh học  Tủ ấm Memmert  Tủ ấm CO2  Kính hiển vi Dụng cụ  Dầu soi  Que cấy  Giá đỡ  Đèn cồn Hóa chất, thuốc thử  Thạch MacConkey (MC)  Thạch Máu (BA) - Thạch sô cô la - Đối với vi khuẩn khác cần mơi trường khác  28 Tiểu luận Vi sinh – Đỗ Phương Dung - Các hoá chất, sinh vật phẩm để thử vi khuẩn - Bộ thuốc nhuộm Gram Bệnh phẩm  Đờm khạc, đờm lấy từ bẫy đờm bệnh nhân không tự khạc được, dịch rửa phế quản  Bệnh phẩm đờm phải không lẫn nước bọt Các bệnh phẩm phải đủ số lượng, lọ đựng bệnh phẩm phải có nắp đậy chặt, có đầy đủ thơng tin kèm Nhuộm Gram  Tất mẫu đờm phải sàng lọc nhuộm Gram để chắn mẫu đạt tiêu chuẩn nhận định sơ hình thể vi khuẩn  Soi vật kính 10x để đếm số lượng bạch cầu, tế bào biểu mô (lặp lại 10 vi trường) + Nếu < 25 bạch cầu > 10 tế bào biểu mô/1 vi trường: bệnh phẩm không đạt tiêu chuẩn, loại bỏ bệnh phẩm báo lâm sàng lấy lại bệnh phẩm + Nếu ≥ 25 bạch cầu ≤ 10 tế bào biểu mô/1 vi trường: bệnh phẩm đạt tiêu chuẩn, soi tiêu vật kính dầu để nhận định sơ hình thể vi khuẩn, tiến hành ni cấy  Đối với dịch rửa phế quản, chắt 1,5 – ml dịch đem ly tâm với tốc độ 1200 vòng/10 phút, bỏ nước nổi, lấy cặn nhuộm Gram nuôi cấy Nuôi cấy  Đối với đờm: cấy đồng thời đĩa: thạch máu, sô cô la, MAC + Dùng que cấy lấy lượng đờm cấy nguyên ủy đĩa thạch, đốt que cấy cấy phân vùng thành vùng Sau vùng cấy phải đốt que cấy + Để đĩa thạch máu sô cô la vào tủ ấm CO2, đĩa MAC vào tủ ấm thường  Đối với dịch rửa phế quản: dùng que cấy lấy cặn cấy vào đĩa thạch máu, đĩa sô cô la  Đọc kết ngày sau KẾT QUẢ Sau ủ ấm 18 – 24 h, đọc kết định danh vi khuẩn theo thường quy Báo cáo kết theo số lượng vi khuẩn bệnh phẩm đờm: 29 Tiểu luận Vi sinh – Đỗ Phương Dung + Nếu vi khuẩn mọc tốt vùng < khuẩn lạc vùng 2: báo cáo kết số lượng vi khuẩn 1+ + Nếu vi khuẩn mọc tốt vùng < khuẩn lạc vùng 3: báo cáo kết số lượng vi khuẩn 2+ + Nếu vi khuẩn mọc tốt vùng < khuẩn lạc vùng 4: báo cáo kết số lượng vi khuẩn 3+ + Nếu vi khuẩn mọc tốt vùng 4: báo cáo kết số lượng vi khuẩn + + Lưu ý: số lượng vi khuẩn tính riêng cho loại, không bao gồm vi khuẩn khác đĩa thạch Báo cáo số lượng vi khuẩn thuộc vi hệ KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG • • Kiểm tra mơi trường theo QC với chủng vi khuẩn ATCC Các hoá chất để định loại vi khuẩn phải kiểm tra chất lượng hàng tuần AN TỒN • • Phải cẩn thận tay tiếp xúc với mẫu bệnh phẩm thực qui trình Xử lý tất bệnh phẩm nguồn lây nhiễm XI, QUY TRÌNH NI CẤY VÀ ĐỊNH DANH VI NẤM BẰNG PHUƠNG PHÁP THƠNG THƯỜNG MỤC ĐÍCH Mơ tả quy trình cho nhân viên khoa Vi sinh kỹ thuật nuôi cấy định danh vi nấm PHẠM VI ÁP DỤNG Quy trình áp dụng nhân viên khoa Vi sinh 30 Tiểu luận Vi sinh – Đỗ Phương Dung ĐỊNH NGHĨA , THUẬT NGỮ , CHỮ VIẾT TẮT Giải thích thuật ngữ: - Khơng áp dụng Từ viết tắt: - SOP = Quy trình chuẩn (Standard of Procedure) - KXN = Khoa Xét nghiệm NGUYÊN LÝ Vi nấm định danh dựa vào đặc điểm nuôi cấy, số tính chất chuyển hóa, đặc điểm hình thái học kết hợp với tính chất kháng nguyên TRANG THIẾT BỊ VÀ VẬT TƯ Trang thiết bị - Kính hiển vi - Tủ an tồn sinh học cấp - Máy ly tâm - Tủ ấm - Máy tính cài phần mềm đọc API ( có) 7.2 Dụng cụ, hóa chất vật tư tiêu hao (bao gồm nội kiểm, ngoại kiểm) - Chi phí hóa chất, vật tư tiêu hao - Lấy lọ bệnh phẩm - Que cấy - Lam kính - Lá kính 31 Tiểu luận Vi sinh – Đỗ Phương Dung - Lactophenol Coton Blue - Nước muối sinh lý - KOH 20 % - Mực tàu - Sabouraud - Candiselect - Giá đường API - RAT - Bông - Cồn 90 độ (vệ sinh dụng cụ) - Đèn cồn - Panh - Khay đựng bệnh phẩm - Hộp vận chuyển bệnh phẩm - Mũ - Khẩu trang - Găng tay - Găng tay xử lý dụng cụ - Quần áo bảo hộ - Acid ngâm lam - Ống nghiệm thủy tinh - Bút viết kính - Bút bi - Bật lửa - Sổ lưu kết xét nghiệm - Cồn sát trùng tay nhanh - Dung dịch nước rửa tay - Khăn lau tay - QC (nếu thực hiện) - EQAS (nếu thực * Ghi chú: - Chi phí nội kiểm cho quy trình kỹ thuật tính cụ thể theo Chương trình nội kiểm (QC) 1/10 tổng chi phí dụng cụ, hóa chất, vật tư tiêu hao (với số lượng ≥ 10 mẫu cho lần tiến hành kỹ thuật) - Chi phí ngoại kiểm cho quy trình kỹ thuật tính cụ thể theo Chương trình ngoại kiểm (EQAS) 1/200 tổng chi phí dụng cụ, hóa chất, vật tư tiêu hao (với số lần ngoại kiểm trung bình lần/1 năm) 32 Tiểu luận Vi sinh – Đỗ Phương Dung TIẾN HÀNH Lấy bệnh phẩm Theo quy định chuyên ngành Vi sinh 8.2 Tiến hành kỹ thuật Bước 1: Nuôi cấy nấm môi trường Sabouraud ủ ấm nhiệt độ 30°C - Bệnh phẩm da, tóc, móng: Cắt nhỏ bệnh phẩm cấy - điểm đĩa Sabouraud - Bệnh phẩm chất dịch: Hút - giọt dịch cấy dàn đĩa Sabouraud - Bệnh phẩm nước tiểu: Sử dụng kỹ thuật cấy định lượng Bước 2: Soi tươi tìm nấm Đánh giá sơ hình thái khuẩn lạc, dạng khuẩn lạc Bước 3: Đọc kết hàng ngày KẾT QUẢ - Quan sát hình thể cấu tạo, tính chất, màu sắc khuẩn lạc + Khuẩn lạc nấm men: Khuẩn lạc Candida có dạng trơn, nhẵn màu kem thường mọc nhanh sau 24 Khuẩn lạc Cryptococcus trơn nhẵn màu be (khô so với nấm Candida) mọc chậm thường sau 48 + Khuẩn lạc nấm mốc: Aspergillus màu sắc khuẩn lạc khác P marneffei: sinh sắc tố màu đỏ nâu đến đỏ rượu vang khuếch tán vào môi trường nuôi cấy nhiệt độ phịng - Quan sát kính hiển vi sau cấy: Tế bào nấm men hình trịn bầu dục (đối với nấm Candida), nẩy chồi khơng Cryptococcus thường hình trịn, kích thước lớn - Định danh lồi nấm men + Định danh sơ loài nấm men tiến hành nuôi cấy vào môi trường Candida select + Định danh nấm men API 20C AUX 33 Tiểu luận Vi sinh – Đỗ Phương Dung + Trả kết loài nấm theo kết định danh - Định danh nấm mốc Làm tiêu Lactophenol Coton Blue Dựa vào hình thái, màu sắc khuẩn lạc, dựa vào đặc điểm vi thể loài Aspergillus để kết luận lồi P marneffei: Trên mơi trường Sabouraud khuẩn lạc mọc nhanh, kiểu da lộn có dạng phủ đầy lông tơ, sinh sắc tố màu đỏ nâu đến đỏ rượu vang khuếch tán vào môi trường - Không thấy khuẩn lạc mọc sau ngày trả kết sơ bộ: Âm tính - Các đĩa cấy bỏ sau ngày nuôi cấy KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG Kiểm tra môi trường theo QC với chủng vi khuẩn ATCC - Các hoá chất để định loại vi khuẩn phải kiểm tra chất lượng hàng tuần AN TOÀN - Phải cẩn thận tay tiếp xúc với mẫu bệnh phẩm thực qui trình - Xử lý tất bệnh phẩm nguồn lây nhiễm 34 ... trường, hóa chất cho định danh vi khuẩn  Bộ thuốc nhuộm Gram TIẾN22 HÀNH Tiểu luận Vi sinh – Đỗ Phương Dung Bệnh phẩm Nước tiểu: bệnh phẩm phải có đầy đủ thơng tin, đủ số lượng theo yêu cầu xét... PHUƠNG PHÁP THÔNG THƯỜNG…………………………………………………… 30 I, HƯỚNG DẪN CHẨN ĐOÁN VIRUS SỐT XUẤT HUYẾT DENGUE Tiểu luận Vi sinh – Đỗ Phương Dung MỤC ĐÍCH  Mơ tả hướng dẫn cách thực xét nghiệm Dengue virus NS1... dẫn QC Quality control QLCL Quản lý chất lượng QTKT Quy trình kỹ thuật VK Vi khuẩn VS Vi sinh Tiểu luận Vi sinh – Đỗ Phương Dung NGUYÊN LÝ Xét nghiệm nhanh kháng nguyên SD BIOLINE NS1 xét nghiệm