Luận văn thạc sĩ thiết kế cấu trúc vector biểu hiện mang gen mã hóa enzyme columbamine o methyltransferase ở cây bình vôi (stephania spp )​

Tangmany SYSOMEPHONE THIẾT KẾ CẤU TRÚC VECTOR BIỂU HIỆN MANG GEN MÃ HĨA ENZYME COLUMBAMINE O- METHYLTRANSFERASE Ở CÂY BÌNH VÔI (Stephania spp.) LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC THÁI NGUYÊN, NĂM 2020 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM Tangmany SYSOMEPHONE THIẾT KẾ CẤU TRÚC VECTOR BIỂU HIỆN MANG GEN MÃ HÓA ENZYME COLUMBAMINE O- METHYLTRANSFERASE Ở CÂY BÌNH VƠI (Stephania spp.) Chun ngành: Di truyền học Mã số: 42 01 21 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn: TS Phạm Thị Thanh Nhàn THÁI NGUYÊN, NĂM 2020 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận văn: “Thiết kế cấu trúc vector biểu mang gen mã hóa enzyme columbamine O-methyltransferase Bình vơi (Stephania spp.)” cơng trình nghiên cứu riêng Mọi kết thu trung thực, không chép từ kết nghiên cứu khác Tất tham khảo kế thừa trích dẫn đầy đủ Thái Nguyên, tháng 11 năm 2020 Tác giả luận văn Tangmany SYSOMEPHONE i LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cảm ơn phủ hai nước Lào Việt Nam dành cho học bổng học tập, để tơi bước chân vào học tập nghiên cứu Khoa Sinh học, Trường Đại học sư phạm - Đại học Thái Nguyên Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Phạm Thị Thanh Nhàn, người tận tình hướng dẫn, bảo tạo điều kiện, giúp đỡ q trình nghiên cứu hồn thành luận văn Tơi xin trân trọng cảm ơn hỗ trợ Đề tài cấp Bộ mã số B2019-TNA-09 Tôi xin cảm ơn thầy cô cán Khoa Sinh học, phận Sau đại học Phòng Đào tạo, Trường Đại học Sư phạm Thái Nguyên trang bị cho kiến thức, kinh nghiệm quý giá môn học liên quan đến chuyên ngành tạo điều kiện cho tơi hồn thành khóa học Tơi xin cảm ơn ThS Trần Thị Hồng, cán phịng thí nghiệm Công nghệ gen Công nghệ tế bào Khoa Sinh học, Trường Đại học sư phạm – Đại học Thái Nguyên, giúp đỡ, hướng dẫn q trình thực thí nghiệm Tơi xin cảm ơn ý kiến nhận xét thầy cô Hội đồng đánh giá luận văn ngày 16 tháng 11 năm 2020 Tơi xin cảm ơn tồn thể đồng nghiệp, gia đình, bạn bè động viên, giúp tơi vượt qua khó khăn suốt thời gian học tập, nghiên cứu sinh sống Thái Nguyên, Việt Nam Thái Nguyên, tháng 11 năm 2020 Tác giả luận văn Tangmany SYSOMEPHONE ii MỤC LỤC Trang LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii NHỮNG CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC CÁC HÌNH vi DANH MỤC CÁC BẢNG vii MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Cây Bình vơi 1.1.1 Nguồn gốc, phân loại đặc điểm sinh học Bình vơi 1.1.2 Giá trị Bình vơi ………………………………………… 1.1.3 Hiện trạng khai thác bảo tồn nguồn gen bình vơi ………… 12 1.2 Gen CoOMT Bình vơi Mao lương……………………… 13 1.3 Vector biểu gen ứng dụng kỹ thuật chuyển gen cải thiện hàm lượng dược chất có hoạt tính thuốc ……………… ……… 15 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 Vật liệu nghiên cứu 22 2.2 Hóa chất, thiết bị địa điểm nghiên cứu 23 2.2.1 Hóa chất nghiên cứu 23 2.2.2 Thiết bị nghiên cứu 24 2.2.3 Địa điểm nghiên cứu 24 2.3 Phương pháp nghiên cứu …… 24 2.3.1 Nhóm phương pháp tạo dòng gen 24 2.3.1.1 Thiết kế mồi colony- PCR 24 iii 2.3.1.2 Tạo vector pUC19_1113bp tái tổ hợp 25 2.3.1.3 Tạo dòng vi khuẩn tái tổ hợp mang vector pUC19_1113bp 25 2.3.1.4 Tách chiết tinh plasmid 26 2.3.2 Nhóm phương pháp thiết kế vector biểu mang gen đích 27 2.3.2.1 Xử lý enzyme cắt giới hạn 27 2.3.2.2 Thôi gel tinh sản phẩm PCR 28 2.3.2.3 Gắn gen CoOMT 1113 bp vào vector pBI121 28 2.3.2.4 Biến nạp DNA plasmid vào tế bào E.coli phương pháp sốc nhiệt 29 2.3.2.5 Phương pháp PCR trực tiếp từ khuẩn lạc (colony-PCR) .29 2.3.2.6 Tách chiết plasmid từ tế bào E.coli 30 2.3.2.7 Phương pháp kiểm tra plasmid tái tổ hợp enzyme cắt giới hạn 31 2.3.2.8 Phương pháp biến nạp vào Agrobacterium tumefaciens xung điện 31 2.3.2.9 Chọn dòng A tumefaciens tái tổ hợp 32 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 33 3.1 Nghiên cứu lý thuyết đặc điểm trình tự gen protein CoOMT 33 3.2 Kết tạo dòng tế bào vi khuẩn tái tổ hợp mang gen nhân tạo CoOMT 35 3.3 Kết thiết kế vector pBI121-1113 tạo chủng Agrobacterium tumefaciens tái tổ hợp mang gen CoOMT 36 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 40 CÁC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC CƠNG BỐ 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO 42 iv Chữ viết tắt DNA cDNA CoOMT Cs/cs EB EDTA EST Fw LB OMT PCR Rv SDS SMT SOC v DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 1.1 Hình ảnh Bình vơi……… Hình 1.2 Cơng thức cấu tạo palmatin L-tetrahydropalmatin (rotundin) 11 Hình 1.3 Con đường sinh tổng hợp tetrahydropalmatine palmatine 14 Hình 1.4 Sơ đồ cấu trúc vector chuyển gen pBI121……………………… 16 Hình 1.5 Sự tương tác Agrobacterium chế chuyển T-DNA… 18 Hình 1.6 Cấu trúc Ri-plasmid A rhizogenes…………………………… 19 Hình 2.1 Sơ đồ cấu trúc vector pUC19…………………………… 22 Hình 2.2 Sơ đồ cấu trúc vector pBI121…………… …………………… 23 Hình 3.1 So sánh trình tự amino acid suy diễn enzyme OMT đường tổng hợp palmatine 34 Hình 3.2 Mơ hình cấu trúc khơng gian 3D protein CoOMT ……… 34 Hình 3.3 Cấu trúc thứ cấp protein CoOMT 35 Hình 3.4 Hình ảnh điện di sản phẩm colony- PCR 36 Hình 3.5 Kết điện di sản phẩm cắt xử lý vector PUC-1113 vector pBI121 với enzyme XbaI SacI 37 Hình 3.6 Kết chọn dịng plasmid tái tổ hợp pBI121-1113 E Coli 37 Hình 3.7 Kết chọn dòng plasmid tái tổ hợp pBI121-1113 A.tumefaciens 38 vi DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Hoạt tính sinh học alkaloid phân lập từ số lồi thuộc chi Bình vôi Stephania………………………………………………………… 10 Bảng 2.1 Cặp mồi đặc trưng phản ứng colony- PCR 24 Bảng 2.2 Thành phần phản ứng nối ghép gen 25 Bảng 2.3 Thành phần phản ứng colony-PCR…………………………… 26 Bảng 2.4 Thành phần dung dịch tách plasmid ………………………… 27 Bảng 2.5 Thành phần phản ứng cắt enzyme giới hạn 28 Bảng 2.6 Thành phần phản ứng nối ghép gen 28 Bảng 2.7 Thành phần phản ứng cắt enzyme giới hạn……………… 31 Bảng 2.8 Thành phần phản ứng PCR…………………………………… 32 vii rotunda in vitro cytotoxic activity of cepharanthine, Phytother Res., 23, pp.587-590 [30] Camacho, M.R., Kirby, G.C., Warhurst, D.C., Croft, S.L., Phillipson, J.D., 2000 Oxoaporphine alkaloids and quinines from Stephania dinklagei and evalution of their antiprotozoal activity Planta Medica 66, 478–480 [31] Chen Y J., Tu M.L (1997), Protective effect of tetrandrine on normal human mononuclear cells against ionizing irradiation, BiolPharmBull, 20, pp 1160-1164 [32] Cardarelli M., Mariotti D., Pomponi M., Spano L., Capone I., Costantino P (1987), “Agrobacterium rhizogenes T-DNA genes capable of inducing hairy root phenotype”, Mol Gen Genet, 209: 475- 480 [33] Choi K.B., Morishige T and Sato F (2001), “Purification and characterization of coclaurine N-methyltransferase from cultured Coptis japonica cells”, Phytochemistry, 56: 649–655 [34] Choi K.B., Morishige T., Shitan N., Yazaki K and Sato F (2002), “Molecular cloning and characterization of coclaurine N-methyltransferase from cultured cells of Coptis japonica”, J Biol Chem., 277: 830–835 [35] Chu, H., Jin, G., Friedman, E et al (2008), Recent Development in Studies of Tetrahydroprotoberberines: Mechanism in Antinociception and Drug Addiction Cell Mol Neurobiol 28, 491–499 [36] Croteau R., Kutchan T.M and Lewis N (2000), Biochemistry and Molecular Biology of Plants, Buchanan, B., Gruissem, W & Jones, R., eds, American Society of Plant Physiologists, Rockville, Maryland, pp 1250– 1318 [37] Cunha, N.B., A.M.Murad, T.M Cipriano, A.C.G Araújo, F.J.L Aragão, A.Leite, G.R.Vianna, T.R.McPhee, G.H.M.F.Souza, M.J Waters (2011), “Expression of functional recombinant human growth hormone in transgenic soybean seeds”, Transgenic res, 20: 811-826 45 [38] E., Diof M F., Hehn A., Ptak A., Chrétien F., Doerper S., Gontier Bourgaud F., Henry M., Chapleur Y., Laurain-Mattar D (2006), “Hairy root and tissue cultures of Leucojum aestivum L - Relationships to galanthamine content”, Phytochem.Rev., (2006): 137-141 [39] Ding ZS, Zhao M, Jing YX, Li LB and Kuang TY (2006) Efficient agrobacterium mediated transformation of rice by phosphomannose isomerase mannose selection Plant Molecular Biology Reporter 24: 295-303 [40] Das, B., Pal, P., Tandon, V., Lyndem, L.M., Kar, P.K., Rao, H.S.P., 2004 Anthelmintic efficacy of extract of Stephania glabra and aerial root extract of Trichosanthes multiloba in vitro: two indigenous plants in Shillong, India Journal of Parasitic Diseases 28, 37–44 [41] Ellenbroek, B.A., Zhang, X.X., Jin, G.Z., 2006 Effects of (−)stepholidine in animal models for schizophrenia Acta Pharmacologica Sinica 27, 1111–1118 [42] Furusawa Shinobu, Wu Jianghong (2007), The effects of biscoclaurine alkaloid cepharanthine on mammalian cells: Implications for cancer, shock, and inflammatory diseases, Life Sciences, Volume 80, pp 1073– 1079 [43] of Frenzel T and Zenk M.H (1990), “Purification and characterization three isoforms of S-adenosyl-L-methionine: (R,S)- tetrahydrobenzylisoquinoline-N-methyltransferase from Berberis koetineana cell cultures”, Phytochemistry, 29: 3491–3497 [44] Gelvin SB (2003) Agrobacterium and plant transformation: the biology behind the “gene - jockeying” tool Microbiology and Molecular Biology 67: 16-37 [45] Gulcin, I., Elias, R., Gepdiremen, A., Chea, A., Topal, F., 2010 Antioxidant activity of bisbenzylisoquinoline alkaloids from Stephania 46 rotunda: cepharanthine and fangchinoline Journal of Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry 25, 44–53 [46] Hall, A.M., Chang, C.J., 1997 Multidrug resistance modulators from tephania japonica Journal of Natural Products 60, 1193–1195 [47] Ho, L.J., Chang, D.M., Lee, T.C., Chang, M.L., Lai, J.H., 1999 Plant alkaloid tetrandrine down reg ulates protein kinase C-dependent signaling pathway in T cells European Journal of Pharmacology 367, 389–398 [48] Hullatti, K.K., Sharada, M.S., 2007 Antimicrobial activity of Cissampelos pareira Cyclea peltata and Stephania japonica methanolic root extracts Advances in Pharmacology and Toxicology 8, 105–108 [49] Hara M., Yazaki K., Tanaka S and Tabata M (1995), “S- adenosyl-L-methionine: norcoclaurine 6-O-methyltransferase from Thalictrum minus cell cultures”, Phytochemistry, 38: 1131–1135 [50] Hotta T., Tanimura H (1997), “Modulation of multidrug resistance by cepharanthin in fresh human gastrointestinal tumor cells”, Oncology, 54, pp 153-157 [51] Liu, X.J., Wang, Y.F., Zhang, M.Y., 2004 Study on the inhibitory effect of cepharanthine on herpes simplex type virus (HSV1) in vitro Journal of Chinese Medicinal Materials (Chin) 27, 107–110 [52] Lodhi A., Charlwood B (1996), “Agrobacterium rhizogenes- mediated transformation of Rubia peregrina L: invitro accumulation of anthraquinones”, Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 46:103- 108 [53] Muregi, F.W., Chhabra, S.C., Njagi, E.N.M., Lang at-Thoruwa, C.C., Njue, W.M., Orago, A.S.S., 2004 Anti-plasmodial activity of some Kenyan medicinal plant extracts singly and in combination with chloroquine Phytotherapy Research 18, 379–384 47 [54] Magnotta M., Murata J., Chen J., De Luca V (2007), “Expression of deacetylvindoline-4-O-acetyltransferase in Catharanthus roseus hairy roots”, Phytochemistry 68: 1922- 1931 [55] Manske R.H.F (1973), The alkaloid- chemistry and Physiology, volume XIV, Academic Press- New York- London [56] Yang Mantsch JR, Li SJ, Risinger R, Awad S, Katz E, Baker DA, Z (2007), selfadministration “Levo-tetrahydropalmatine and cocaine-induced attenuates reinstatement cocaine in rats”, Psychopharmacology (Berl), 192, pp 581-591 [57] Morishige T., Tsujita T., Yamada Y and Sato F (2000), “Molecular characterization of hydroxyroxy-N-methylcoclaurine the S-adenosyl-L-methionine: 4’-O-methyltransferase involved 3’in isoquinoline alkaloid biosynthesis in Coptis japonica”, J Biol Chem., 275: 23398–23405 [58] Muemmler S., Rueffer M and Zenk M.H (1985), “S- adenosylL-methionine: (S)-scoulerine 9-O-methyltransferase, a highly stereo- and regio-specific enzyme in tetrahydroprotoberberine biosynthesis”, Plant Cell Reports, 4: 36–39 [59] Muller M.J and Zenk M.H (1992), “The norcoclaurine pathway is operative inberberine biosynthesis in Coptis japonica”, Planta Med., 58: 524–527 [60] Matthews P.R., Wang M.B., Waterhouse P.M., Thornton S., Fieg S.J., Gubler F., Jacobsen J.V (2001), “Marker gene elimination from transgenic barley, using co-transformation with adjacent ‘twin T-DNAs’ on stDNAard Agrobacterium transformation vector”, Mol Breed, 7: pp 195 202 [61] Nawawi, A., Nakamura, N., Meselhy, M.R., Hattori, M., Kurokawa, M., Shiraki, K., Kashiwaba, N., Ono, M., 2001 In vivo antiviral activity of Stephania cepharantha against herpes simplex virus type-1 Phytotherapy Research 15, 497–500 48 [62] Okamoto M., Ono M (2001), Suppression of cytokine production and neural cell death by the anti-inflammatory alkaloid cepharanthine: a potential agent against HIV-1 encephalopathy, Biochem Pharmacol, 747-753 [63] Pang, L., Hoult, J.R., 1997 Cytotoxicity to macrophages of tetrandrine, an antisili cosis alkaloid, accompanied by an overproduction of prostaglandins Biochemical Pharmacology 53, 773– 782 [64] Pan Q., Wang Q., Yuan F., Xing S., Zhao J., Choi Y.H., Verpoorte R., Tian Y., Wang G and Tang K (2012), “Overexpression of ORCA3 and G10H in Catharanthus roseus plants regulated alkaloid biosynthesis and metabolism revealed by NMR-Metabolomics”, PLoS One 7: e43038 [65] Pham N.B 2009, Production and secretion of recombinant sweet- tasting thaumatin from suspension cells and hairy roots of Nicotiana tabacum, phD Thesis, University of Heidelberg.2 [66] Poulton J.E (1981), The Biochemistry of Plants, Conn, E.E., ed., Vol 7, Academic Press, New York, pp 667–723 [67] Qian, J.Q., 2002 Cardiovascular pharmacological effects of bisbenzylisoquinoline alkaloid derivatives Acta Pharmacologica Sinica 23, 1086–1092 [68] Rueffer M., Nagakura N and Zenk M.H (1983), “Partial purification and properties of S-adenosylmethionine:(R), (S)- norlaudanosolin-6-O-methyltransferase from Argemone platyceras cell cultures”, Planta Med., 49: 131–137 [69] Sato F., Tsujita T., Katagiri Y., Yoshida S And Yamada Y (1994), “Purification and characterization of S-adenosyl-L-methionine: norcoclaurine 6-O-methyltransferase from cultured Coptis japonica cells”, Eur J Biochem., 225: 125–131 [70] J Van Simoens C., Alliotte T., Mendel R., Muller A., Schiemannm Lijsebettens M., Schell J., van Montagu M., DNA inze D (1986), “A binary 49 vector for transferring genomic libraries to plants”, Nucl Acids Res, 14, pp 8073 - 8090 [71] Semwal, D.K., Rawat, U., 2009a Antimicrobial hasubanalactam alkaloid from Stephania glabra Planta Medica 75, 378–380 [72] Semwal, D.K., Rawat, U., 2009 Gindarudine, a novel morphine alkaloid from Stephania glabra Chinese Chemical Letters 20, 823– 826 [73] Semwal, D.K., Rawat, U., Bamola, A., Semwal, R., 2009 Antimicrobial activity of Phoebe lanceolata and Stephania glabra; preliminary screening studies Journal of Scientific Research 1, 662– 666 [74] Sharma, U, Sahu, R.K., Roy, A., Golwala, D.K., 2010 In vivo antidiabetic and antioxidant potential of Stephania hernandifolia in streptozotocin-induced-diabetic rats Journal of Young Pharmacists 2, 255– 260 [75] Shaghai-Maroof M.A., Soliman K.M., Jorgensen R.A., Allard R.W (1984), “Ribosomal DNA sepacerlength polymorphism in barley: mendelian inheritance, chromosomal location, and population dynamics”, Proc Natl Acad Sci, 81 (1984): 8014-8019 [76] SunY., Moore M.J., Zhang S., Soltis P.S., Soltis D.E., Zhao T., Meng A., Li X., Li J and Wang H (2016), “Stephania japonica chloroplast, complete genome”, https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NC_029432.1 [77] Takashi Morishige, Emilyn Dubouzet, Kum‐Boo Choi, Kazufumi Yazaki, Fumihiko Sato (2002), “Molecular cloning of columbamine O‐ methyltransferase from cultured Coptis japonica cells”, Eur J Biochem., 269(22):5659-67 [78] Takeshita N., Fujiwara H., Mimura H., Fitchen J.H., Yamada Y and Sato F (1995), “Molecular cloning and characterization of Sadenosyl-L-methionine: scoulerine-9-O-methyltransferase from cultured cells of Coptis japonica”, Plant Cell Physiol., 36: 29–36 50 [79] Takemura, H., Imoto, K., Ohshika, H., Kwan, C.Y., 1996 Tetrandrine as a calcium antagonist Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology 23, 751–753 [80] Vanhala L., Hiltunen R., Oksman-Caldentey K M (1995), “Virulence of different Agrobacterium strains on hairy root formation of Hyoscyamus muticus”, Plan Cell Rep., 14 (1995): 236-240 [81] Wang Q., Xing S., Pan Q., Yuan F., Zhao J., Tian Y., Chen Y., Wang G., Tang K (2012), “Development of efficient Catharanthus roseus regeneration and transformation system using Agrobacterium tumefaciens and hypocotyls as explants”, BMC Biotechnol 12:34 [82] Wang C.T., Liu H., Gao X.S., Zhang H.X (2010), “Overexpression of G10H and ORCA3 in the hairy roots of Catharanthus roseus improves catharanthine production”, Plant Cell Rep 29: 887-894 [83] Wat C.K., Steffens P and Zenk M.H (1986), “Partial purification and characterization of S-adenosyl-L-methionine: norreticuline N-methyltransferases from Berberis cell suspension cultures”, Z Naturforsch., 41c: 126–134 [84] Weising K., Kahl G (1996), “Natural genetic engineering of plant cells: the molecular biology of crown gall and hairy root disease”, World J Microbiol Biotechnol., 12: 327- 351 [85] Xue, Y., Wang, Y., Feng, D.C., Xiao, B.G., Xu, L.Y., 2008 Tetrandrine suppresses lipopolysaccharide induced microglial activation by inhibiting NF-kappaB pathway Acta Pharmacologica Sinica 29, 245– 251 [86] Yang, D.L., Mei, W.L., Dai, H.F., 2010a Cytotoxic alkaloids from the tuber of Stephania succifera Chinese Journal of Medicinal Chemistry 20, 206–210 51 [87] Yang, D.L., Mei, W.L., Wang, H., Dai, H.F., 2010b Antimicrobial alkaloids from the tubers of Stephania succifera Zeitschrift für Naturforschung B 65, 757–761 [88] Zhang, H., Yue, J.M., 2005 Hasubanan type alkaloids from Stephania longa Journal of Natural Products 68, 1201–1207 [89] Zhao, Y.Z., Kim, J.Y., Park, E.J., Lee, S.H.,Woo,S.W., Ko, G., Sohn, D.H., 2004 Tetrandrine induces apoptosis in hepatic stellate cells Phytotherapy Research 18, 306–309 [90] Zhu X Z, (1991), Development of Natural products as drugs acting on central nervous system, Mem Inst Oswaldo Cruz, 86, pp 173-175 Tài liệu website [91] http://123doc.org/document/254782-nghien-cuu-cay-binh- voi-va-cac-hop-chat-alkaloid-trong-cay.htm [92] http://duocphamtw3.com/pr70-rotundin.html [93] https://baomuctim.com/rotunda-30mg [94] http://duoclieu.net/Binh%20voi.html [95] www.vinachem.com.vn/xuat-ban-pham/239-so-vnc/c3239.html [96] https://suckhoedoisong.vn/nhung-chien-cong-cua-mot-duoc- si-binh-di-n32313.html 52 ... SYSOMEPHONE THIẾT KẾ CẤU TRÚC VECTOR BIỂU HIỆN MANG GEN MÃ HĨA ENZYME COLUMBAMINE O- METHYLTRANSFERASE Ở CÂY BÌNH VƠI (Stephania spp. ) Chuyên ngành: Di truyền học Mã số: 42 01 21 LUẬN VĂN THẠC SĨ... CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận văn: ? ?Thiết kế cấu trúc vector biểu mang gen mã hóa enzyme columbamine O- methyltransferase Bình vơi (Stephania spp. )” cơng trình nghiên cứu riêng tơi Mọi kết thu... enzyme CoOMT làm tăng sản phẩm chuyển hóa thứ cấp hàm lượng rotundin Bình vơi nâng cao Xuất phát từ lí tiến hành thực đề tài: ? ?Thiết kế cấu trúc vector biểu mang gen mã hóa enzyme columbamine O- methyltransferase