Yêu cầu đối với dụng cụ thủy tinh dùng trong phòng thí nghiệm - Chịu hóa chất: là thủy tinh trung tính, chịu được hầu hết các hóa chất, dung dịch ăn mòn mạnh ở nhiệt độ cao ngoại trừ HF [r]
(1)CÁCH SỬ DỤNG VÀ BẢO QUẢN DỤNG CỤ THỦY TINH TRONG PHÒNG THÍ NGHIỆM DỤNG CỤ THỦY TINH TRONG PHÒNG THÍ NGHIỆM VI SINH Y HỌC 1.1 Khái niệm Thủy tinh là chất rắn vô định hình đồng nhất, có gốc silicat, thường pha trộn thêm các tạp chất để có tính chất theo ý muốn Các loại dụng cụ thủy tinh phòng thí nghiệm thường thủy tinh borosilicat, thạch anh nấu chảy oxyd sillic nấu chảy khác tính bền vững hoá học cao và hệ số giãn nở loại thủy tinh này thấp 1.2 Yêu cầu dụng cụ thủy tinh dùng phòng thí nghiệm - Chịu hóa chất: là thủy tinh trung tính, chịu hầu hết các hóa chất, dung dịch ăn mòn mạnh nhiệt độ cao (ngoại trừ HF là dung dịch acid có độ ăn mòn cao chí nồng độ thấp) - Tính chất nhiệt: chịu nhiệt độ cao, shock nhiệt - Ngoài dụng cụ thủy tinh dùng cho phòng thí nghiệm cần phải mặt hoá học (không dính các chất hữu vô cơ) và mặt vi sinh vật học (không chứa tế bào vi sinh vật hay bào tử chúng) Do vậy, trước sử dụng thì cần rửa và khử trùng 1.3 Một số dụng cụ thủy tinh dùng phòng thí nghiệm vi sinh y học Bao gồm các chai chuyên dụng, bình tam giác, bình c ầu, các lo ại ống đong, cốc đong, phễu, ống nghiệm, pipet, burét, đĩa petri, bô can, que cấy… Bình tam giác, bình cầu: Thường sử dụng để chuẩn độ, chứa đựng môi trường, dung dịch, nuôi cấy vi sinh vật, thực các phản ứng, bình cầu còn thích hợp cho các phản ứng cần xúc tác nhiệt độ (2) Bình tam giác, bình cầu thường có thể tích từ 50ml đến 10 lít tùy theo dung dịch chứa để chọn loại bình thích hợp Ống đong, cốc đong: Có vạch chia thể tích dùng để đong khối lượng dung dịch không cần phải có độ chính xác cao Khi đong, nên chọn ống đong nào có khối lượng gần với khối lượng cần đong để có độ chính xác cao Ví dụ: đong 45 ml dùng ống đong loại 50 ml, đong 850 dùng ống đong 1000 ml Để tránh sai lầm lúc đọc mức đong, phải đặt ống đong trên mặt phẳng và tầm mắt ngang tầm với bề mặt chất lỏng Pipet: Dùng để đong, hút dung dịch để có độ chính xác cao Có nhiều loại pipet thủy tinh khác pipet Pasteur, pipet có chia vạch thông thường thiết kế cho phù hợp với mục đích nghiên cứu Hiện các phòng thí nghiệm nghiên cứu vi sinh vật gây bệnh nghiêm cấm việc hút pipet mồm, thay vì người ta dùng boa cao su, bóp hút an toàn van, dùng pipet hút tự động (pipet aid) Đĩa petri: Chủ yếu dùng để nuôi cấy, phân lập các chủng vi sinh vật làm các test chẩn đoán, kháng sinh đồ Quả bóp ba van (3) khoanh giấy, các thử nghiệm tính cạnh tranh các chủng vi sinh, trên môi trường thạch dinh dưỡng, mà qua đó ta có thể quan sát hình thái, tính chất khuẩn lạc quần thể vi sinh vật Ống nghiệm: Dùng để chứa đựng dung dịch với dung tích nhỏ, nuôi cấy VSV trên môi trường lỏng môi trường thạch, thử các tính chất sinh vật hoá học Burét: Chủ yếu dùng các thí nghiệm chuẩn độ để xác định nồng độ các chất Khi dùng cần lưu ý khoá burét nên bôi vaselin để không bị rít, tuyệt đối không để có bọt khí chuẩn độ (nếu có nên mở khoá cho dung dịch chảy xuống cốc đặt dưới) Nên cầm khoá burét tay trái còn tay phải cầm bình để lắc lúc chuẩn độ Khi đọc thể tích dung dịch thì mắt phải nhìn thẳng và burét phải kẹp thẳng trên giá để tránh sai số CÁCH RỬA DỤNG CỤ THỦY TINH Nhìn chung tất các dụng cụ thủy tinh phòng thí nghiệm phải rửa cẩn thận, phải thật sạch, thật khô trước sử dụng 2.1 Xử lý dụng cụ trước rửa - Dụng cụ thủy tinh mua, chưa sử dụng, cần ngâm nước dung dịch H2SO4 loãng khoảng 24 Rửa lại xà phòng và nước nhiều lần pH trung tính - Các dụng cụ đã sử dụng để nuôi cấy vi sinh vật, là các vi sinh vật gây bệnh, trước rửa thiết phải khử trùng nước áp lực cao nồi hấp vô trùng (autoclave) để giết chết các tế bào, bào tử (4) vi sinh vật, đảm bảo an toàn cho người rửa, không reo rắc mầm bệnh vào môi trường 2.2 Rửa dụng cụ thủy tinh - Sau tiệt trùng dụng cụ bẩn, tháo bỏ nút bông, môi trường, thạch, cặn bẩn chứa dụng cụ - Tráng dụng cụ nước để loại hết cặn bẩn - Dùng miếng nhám thấm xà phòng bông thấm cồn để lau các ký hiệu ghi bút trên thủy tinh - Chọn chổi rửa thích hợp với loại ống bình, đầu nên buộc miếng mút nhỏ để phần sắt không chọc thủng đáy ống nghiệm đáy bình Dùng chổi rửa thấm xà phòng cọ kỹ phía trong, dùng khăn mềm thấm xà phòng cọ phía ngoài, các đĩa petri cần dùng khăn mềm thấm xà phòng cọ kỹ Xả nước nhiều lần, tráng lại nước cất để pH đạt đến trung tính - Đối với pipet cần ngâm dung dịch sunfocromat ngày, chuyển sang bình rửa pipet tự động qua đêm rửa trực tiếp vòi nước để dòng nước chảy bên pipet, rửa xà phòng sau đó rửa nước nhiều lần, tráng lại nước cất - Nếu dụng cụ bẩn nhiều dính dầu mỡ, ngâm các dụng cụ đó vào dung dịch sunfocromic nhiều sau đó rửa lại - Dụng cụ sau rửa phải đảm bảo pH đạt đến trung tính, úp ngược dụng cụ cho ráo nước, làm khô nhiệt độ phòng đem sấy nhiệt độ 60 0C - 800C vài Sau đó cất giữ đồ thủy tinh khô bao gói chúng để đem khử trùng./ * Dung dịch sunfocromat: Thành phần: (5) K2CrO7 : 60 g H2SO4 : 66 ml Nước cất đến : lít Cách pha: - Hòa tan 60 g K2CrO7 vào 700 ml nước cất, đặt bình vào chậu nước để tránh bị bỏng bổ sung axit - Bổ sung từ từ 66 ml dung dịch axit H 2SO4 vào dung dịch K2CrO7 trên đến tan hết - Bổ sung nước cất vừa đủ lít Bảo quản bình tối màu, tránh ánh sáng để dùng dần KHỬ TRÙNG DỤNG CỤ THỦY TINH 3.1 Chuẩn bị đồ thủy tinh để khử trùng - Pipet: nhồi miếng bông nhỏ vừa phải vào đầu ống hút, cho vào ống kim loại không gỉ có bông phía đặt đầu nhọn dùng giấy bao gói cái pipet bao gói theo bó có cùng kích cỡ, buộc hai đầu, đánh dấu đầu hút, sau khử trùng mở phần này để lấy pipet dùng, tay không chạm vào phần đầu nhọn pipet - Đĩa petri: xếp thành chồng khoảng đĩa, bao gói giấy xếp vào ống trụ làm thép không gỉ nhôm - Ống nghiệm, bình tam giác, bình cầu không có nút thì thiết phải đậy nút bông Dùng bông mỡ (bông không thấm nước) để làm nút Nút bông có chức dụng cụ lọc khí vô trùng cần có độ dày vừa phải để không khí có thể qua vi sinh vật bị giữ lại, nút bông cần phải làm đúng kiểu cách để thuận tiện thao tác thí nghiệm 3.2 Khử trùng dụng cụ thủy tinh (6) - Khử trùng nóng khô: xếp dụng cụ đã bao gói kín vào tủ sấy, không để ống có nút bông vào giá ngăn đề phòng bông cháy Không xếp quá chặt để không khí lưu thông làm nóng dụng cụ cần khử trùng Khử trùng nhiệt độ từ 160-170 0C thời gian Khi nhiệt độ tủ khử trùng xuống đến nhiệt độ phòng lấy dụng cụ - Khử trùng nồi hấp ướt (Autoclave) dùng nước áp lực cao (121oC, at, 30 phút) để khử trùng dụng cụ Sau khử trùng xong nên sấy khô trước sử dụng 3.3 Bảo quản dụng cụ thủy tinh Dụng cụ thủy tinh sau khử trùng không sử dụng nên cho vào túi polyetylen buộc chặt, bảo quản tủ kín sẽ, khô ráo Các loại dụng cụ que gạt, que cấy thủy tinh sau khử trùng nên sử dụng vòng ngày, hộp petri vòng ngày, ống nghiệm, bình tam giác, bình cầu khoảng 7- 10 ngày bảo quản tốt Nếu để quá lâu dụng cụ cần khử trùng lại trước dùng Lưu ý loại bỏ dụng cụ thủy tinh: Thủy tinh không có tính chất mềm dẻo ngăn chặn tác động xung lực dạn nứt và gẫy tác dụng lực Thủy tinh vỡ, gẫy tạo góc cạnh sắc nguy hiểm, có thể làm tổn thương người làm công tác dọn dẹp phòng thí nghiệm Tất các dụng cụ thủy tinh đã loại bỏ cần phải khử trùng và phải bỏ vào thùng rác chuyên dụng có cảnh báo chứa vật sắc nhọn hình ảnh minh họa sau: (7) (8)