Nghiên cứu chọn tạo các giống đậu tương biến đổi gen kháng ruồi đục thân và sâu đục quả

Đề tài “Nghiên cứu chọn tạo các giống đậu tương biến đổi gen kháng ruồi đục thân và sâu đục quả” Mục tiêu của đề tài nhằm tạo ra giống đậu tương biến đổi gen mang gen kháng ruồi đục thân và sâu đục quả, có năng suất và chất lượng cao. Mời các bạn cùng tham khảo.

Hội thảo Quốc gia Khoa học Cây trồng lần thứ NGHIÊN CỨU CHỌN TẠO CÁC GIỐNG ĐẬU TƯƠNG BIẾN ĐỔI GEN KHÁNG RUỒI ĐỤC THÂN VÀ SÂU ĐỤC QUẢ Trần Thị Cúc Hòa, Nguyễn Trần Hải Bằng, Trần Thanh Hải, Hồ Thị Huỳnh Như, Hà Minh Luân, Nguyễn Quang Vinh, Trần Như Ngọc, Võ Thị Kiều Trang, Đoàn Thị Mến, Phạm Thị Hường Nguyễn Đức Cương Viện Lúa đồng sông Cửu Long SUMMARY Studies on development of transgenic soybean varieties resistant to the lesser cornstalk borer and the pod borer The lesser cornstalk borer (Elasmopalpus lignosellus) and pod borer (Etiella zinckenella) are insect pests causing severe damage to soybean, therefore the application of genetic transformation to develop transgenic soybean lines highly tolerant to these pests are needed This study was undertaken to transfer the insect resistant genes, soycry1Ac from the vector pPTN791 and vip3A from the vector pHOA210 into the variety Williams 82 As a result, T2 transgenic soybean lines carrying the gene soycry1Ac or vip3A were developed and confirmed by the Southern blot analysis ELISA analysis of T2 lines carring soycry1Ac showed the significant expression of the protein Cry1Ac ranging from 325.03 to 677.83 ng/g of green leaves The insect resistant test in the net house under natural conditions showed that some transgenic lines having a very low infestation of the pod borer, as lowest as 7.98% compared to the check variety of 66.51% To increase the materials for developing transgenic soybean lines resistant to the lesser cornstalk borer and pod borer, new vectors carrying the genes- cry2Aa, cry4A, cry2Aa+ soycry1Ac, cry4A+ soycry1Ac were constructed to continue transform into the soybean plants Keywords: Agrobacterium, genetic transformation, insect resistance, lesser cornstalk borer, soybean pod borer I ĐẶT VẤN ĐỀ ** Sản lượng đậu tương nước ta không đáp ứng đủ nhu cầu nước, hàng năm phải nhập số lượng lớn khô dầu đậu tương Để tăng sản lượng đậu tương, tăng suất giải pháp quan trọng cấp thiết suất đậu tương nước ta thấp, đạt 1,5 tấn/ha (Tổng cục Thống kê/website) so với suất bình quân giới 2,5 tấn/ha (FAOSTAT, 2011) Sâu hại yếu tố quan trọng hạn chế suất đậu tương Tại Việt Nam, sâu hại đậu tương gồm ruồi đục thân (Elasmopalpus lignosellus), sâu đục (Etiella zinckenella), sâu xanh da láng (Spodoptera exigua) Tỷ lệ đậu tương bị ruồi đục thân hại biến động, phụ thuộc vào mùa vụ, từ vài phần trăm vụ Hè tới 70% vụ Đông, sâu đục gây giảm từ vài phần trăm đến 27,4 - 31% suất đậu tương Các lồi sâu hại ruồi Người phản biện: TS Trần Ngọc Thạch đục thân, sâu đục quả, sâu khoang, sâu lá, rệp muội xanh làm giảm suất đậu tương tới 74,3 - 81,2% (Lương Minh Khôi Phạm Thị Vượng, 1989) Trên giới, đậu tương biến đổi gen chiếm diện tích lớn nhất, với 80 triệu tổng diện tích 170,3 triệu trồng biến đổi gen năm 2012 (ISAAA, 2012) Việc nhập giống đậu tương biến đổi gen kháng sâu từ nước vào Việt Nam bị lệ thuộc vào cơng ty nước ngồi rào cản sở hữu trí tuệ Vì vậy, cần có nỗ lực nước để tự tạo giống đậu tương biến đổi gen kháng sâu hại Từ yêu cầu nêu trên, Viện Lúa đồng sông Cửu Long thực đề tài cấp Nhà nước “Nghiên cứu chọn tạo giống đậu tương biến đổi gen kháng ruồi đục thân sâu đục quả” Mục tiêu đề tài nhằm tạo giống đậu tương biến đổi gen mang gen kháng ruồi đục thân sâu đục quả, có suất chất lượng cao 441 VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu Giống đậu tương dùng cho chuyển nạp Williams 82, giống nhập nội dùng phổ biến để chuyển nạp gen đậu tương giới Các vector mang gen kháng sâu dùng chuyển nạp gen gồm: - Vector pTN791 mang gen kháng sâu soycry1Ac gen đánh dấu chọn lọc kháng thuốc diệt cỏ bar, gen nằm T-DNA (hình 1) - Vector pHOA210 (pPTN-vip3A) mang gen kháng sâu vip3A gen đánh dấu chọn lọc bar, gen nằm T-DNA (hình 1) Hình Vector pPTN791 mang gen soycry1Ac vector pHOA210 mang gen vip3A 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Thiết kế vector Việc thiết kế gen kháng sâu dùng cho biến nạp đậu tương tiến hành sở vector kép pUB14 mang T-DNA T-DNA mang gen bar điều khiển promoter 2X35S terminator Tvsp Cloning gen hữu dụng vào T-DNA thứ hai Các promoter gen kháng sâu thay vector enzyme cắt giới hạn tương ứng 2.2.2 Chuyển nạp gen Quy trình chuyển nạp gen vào đậu tương phương pháp Agrobacterium tumefaciens thực theo quy trình Olhoft ctv (2003), Zeng ctv (2004) Trần Thị Cúc Hòa (2008) Phương pháp lây nhiễm cải tiến cách dùng dao đặt vng góc với trụ hạ diệp tạo - 10 vết thương mặt nốt mầm dung dịch lây nhiễm có chứa vi khuẩn A tumefaciens Chuyển 50 mẫu tử diệp gây vết thương vào 50ml môi trường lây nhiễm lỏng có chứa vi khuẩn A tumefaciens Mẫu ủ nhiệt độ phòng thời gian 30 phút, lắc 50 - 70 vòng/phút Mẫu lây nhiễm 25oC thời gian ngày (Trần Thị Cúc Hòa, 2008) Phương pháp trích DNA dựa theo phương pháp Dellaporta ctv (1983), phân tích 442 PCR, phân tích Southern blot theo quy trình Southern (1975), phân tích ELISA: Nồng độ protein Cry1Ac dịng đậu nành biến đổi gen đánh giá (định lượng) phương pháp Sandwich ELISA sử dụng kít Cry1Ac Quantiplate® kit (Envirologix, Portland, OR, USA) Đánh giá tính kháng sâu điều kiện tự nhiên (hồn tồn khơng phun thuốc trừ sâu) nhà lưới III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Thiết kế vector Trên sở plasmid pUB14 tổng hợp hai gen cry2Aa cry4A, bốn vector thiết kế (hình 2) chuyển nạp tạo giống đậu tương ruồi đục thân sâu đục quả, gồm: (1) Vector pHOA40 (14.360 bp) chứa hai T-DNA, T-DNA mang gen đánh dấu 2X35Sbar-Tvsp, T-DNA mang gen kháng ruồi đục thân, E35S-cry4A-Tvsp (2) Vector pHOA60 (12.719 bp) chứa hai T-DNA, T-DNA mang gen đánh dấu 2X35Sbar-Tvsp, T-DNA mang gen kháng ruồi đục thân, E35S-cry2Aa-Tvsp (3) Vector pHOA100 (16.273 bp) chứa hai T-DNA, T-DNA mang gen đánh dấu 2X35Sbar-Tvsp, T-DNA mang hai gen kháng sâu, E35S-soycry1ac + 2A-cry4Aa-Tvsp Hội thảo Quốc gia Khoa học Cây trồng lần thứ (4) Vector pHOA130 (14.632 bp) chứa T-DNA, T-DNA mang gen đánh dấu 2X35S-bar-Tvsp, T-DNA mang hai gen kháng sâu, E35S-soycry1ac + 2A-cry2Aa-Tvsp Hình trình bày sơ đồ vector mới, pHOA130 Hình Sơ đồ vector thiết kế 3.2 Tạo dòng biến đổi gen kháng ruồi đục thân sâu đục 3.2.1 Kết tạo dòng đậu tương mang gen soycry1Ac Tạo dòng T0: Vector pPTN791 mang gen soycry1Ac gen bar chuyển nạp vào giống William 82 Bốn thí nghiệm thực với tổng số 800 mẫu lây nhiễm, kết thu dòng tái sinh T0 Các dịng tái sinh phân tích Southern blot (hình 3) để xác định dòng biến đổi gen mang gen soycry1Ac Kết phân tích Southern blot xác định dòng T0 mang gen soycry1Ac gen bar Tuy nhiên có dịng mang gen soycry1Ac cho thấy tỷ lệ đồng chuyển nạp 66,66% Hình Phân tích Southern blot dịng đậu tương T0 giống Williams 82 chuyển nạp gen soycry1Ac DNA cắt đoạn HindIII SacI Màng lai với DNA có mang gen soycry1Ac Phương pháp đánh dấu DIG Mũi tên chiều dài 2985 bp mang gen soycry1Ac (-): đối chứng (không biến đổi gen) ; (+): pPTN791 plasmid DNA 443 VIỆN KHOA HỌC NƠNG NGHIỆP VIỆT NAM Tạo dịng T1: Hạt dòng T0 (mang gen soycry1Ac gen bar) trồng dòng T1 Khả mang gen dòng T1 gồm: mang hai gen soycry1Ac bar; mang gen bar, mang gen soycry1Ac, khơng mang hai gen soycry1Ac bar Hình cho thấy qua phân tích Southern blot gen soycry1Ac dòng T1 phát triển từ dòng T0- HCW4-1 cho thấy dịng có gen soycry1Ac (hiện diện băng 2.985 bp gen soycry1Ac), dịng khơng có soycry1Ac (khơng có băng 2.985 bp) Hình Phân tích Southern blot dòng đậu tương T1 giống Williams 82 chuyển nạp gen soycry1Ac (pPTN791) phát triển từ T0 - HCW4-1 DNA cắt đoạn HindIII SacI Màng lai với DNA có mang gen soycry1Ac Phương pháp đánh dấu DIG Mũi tên chiều dài 2985 bp gen soycry1Ac -: đối chứng (không biến đổi gen); +: pPTN791 plasmid DNA Kết dòng đậu tương cho phản ứng kháng nhiễm phết thuốc trừ cỏ Liberty cung cấp thông tin sơ khởi dịng đậu tương có mang gen bar hay khơng Kết phân tích Southern blot 21 dịng T1 phát triển từ dòng T0 (HCW3-2, HCW4-1) gen bar gen soycry1Ac (bảng 1) ghi nhận 13 dòng mang hai gen soycry1Ac gen bar, dòng mang gen soycry1Ac, dịng khơng mang gen soycry1Ac gen bar Kết cho thấy hệ T1 có phân ly gen bar khỏi gen soycry1Ac, tạo điều kiện chọn dòng chuyển gen mang gen soycry1Ac mà không mang gen chọn lọc bar, ưu điểm chuyển gen vector kép chứa hai T-DNA Bảng Phân tích Southern blot dòng T1 chuyển nạp gen với vector pPTN791 mang gen bar gen soycry1Ac vào giống Williams 82 Dòng T0 Số mang gen dòng bar soycry1Ac T1 HCW3-2 12 HCW4-1 TT Tổng 21 Kết phết Kết phân tích Southern blot (số dịng T1) Có gen bar soycry1Ac Có gen soycry1Ac Có gen bar Khơng có gen bar soycry1Ac 7/5 6/3 13 Liberty (K/N) Ghi chú: K/N: Số dòng kháng Liberty/số dòng nhiễm Liberty (thuốc diệt cỏ) Tạo dòng T2: Tổng số 34 dòng T2 phát triển từ dòng T1 HCW3-2-12, HCW3-2-8 HCW41-8 phân tích Southern blot Hình cho thấy qua phân tích Southern blot gen soycry1Ac dòng T2 phát triển từ dòng T1 HCW3-2-12 có dịng mang gen soycry1Ac, dịng khơng 444 mang gen (soycry1Ac bar) Kết phân tích Southern blot 34 dịng T2 gen soycry1Ac gen bar ghi nhận (bảng 2) 10 dòng mang hai gen soycry1Ac bar, 19 dòng mang gen soycry1Ac dịng khơng mang gen soycry1Ac bar Hội thảo Quốc gia Khoa học Cây trồng lần thứ Hình Phân tích Southern blot dòng đậu tương T2 giống Williams 82 phát triển từ dòng T1 (HCW 3-2-12) chuyển nạp gen soycry1Ac Mũi tên chiều dài 2.985bp gen soycry1Ac (-): đối chứng (không biến đổi gen) (+): pPTN 791 plasmid DNA, K: Kháng Liberty, N: Nhiễm Liberty Bảng Phân tích Southern blot dòng T2 chuyển nạp gen với vector pPTN791 mang gen bar gen soycry1Ac vào giống Williams 82 Dòng T1 Số mang gen dòng Kết phết Liberty bar soycry1Ac T2 (K/N) Có gen bar soycry1Ac Có gen soycry1Ac Có gen bar Khơng có gen bar soycry1Ac HCW3-2-12 0/9 2 HCW3-2-8 12 10/2 10 0 HCW4-1-8 13 0/13 12 10 19 TT Tổng Kết phân tích Southern blot (số dịng T2) 34 3.2.2 Kết tạo dòng đậu tương mang gen vip3A Tạo dòng T0: Vector pHOA210 mang gen vip3A gen bar chuyển nạp vào giống Williams 82 với 12 thí nghiệm tổng số 2.400 mẫu lây nhiễm Kết thu 15 dòng tái sinh T0 Các dịng tái sinh phân tích Southern blot (hình 6) để xác định dịng biến đổi gen mang gen vip3A Kết phân tích Southern blot xác định dòng T0 mang gen vip3A gen bar Hình Phân tích Southern blot dịng đậu tương T0 giống Williams 82 chuyển nạp gen vip3A DNA cắt đoạn EcoRI Màng lai với DNA có mang gen vip3A Phương pháp đánh dấu DIG Mũi tên chiều dài 1,8kb mang gen vip3A (-): đối chứng (không biến đổi gen) ; (+): pPTN-Vip3A plasmid DNA 445 VIỆN KHOA HỌC NƠNG NGHIỆP VIỆT NAM Tạo dịng T1: Từ dòng T0 mang gen vip3A gen bar phát triển 39 dịng T1 để phân tích Southern blot Hình cho thấy kết phân tích Southern blot 13 dòng T1 phát triển từ dòng T0- HVW5-8 có 10 dịng mang gen vip3A, dịng khơng mang gen vip3A (tên dịng nằm khung hình 7) Kết phân tích Southern blot gen vip3A 17 dòng T1 phát triển từ dòng T0đ.ã ghi nhận 14 dịng mang gen vip3A (bảng 3) Hình Phân tích Southern blot dịng đậu tương T1 giống Williams 82 chuyển nạp gen vip3A DNA cắt đoạn EcoRI Mũi tên chiều dài 1,8 kb gen vip3A (-): đối chứng (không biến đổi gen) (+): pHOA (pPTN-Vip3A) plasmid DNA, K: Kháng Liberty, N: Nhiễm Liberty Bảng Phân tích Southern blot dịng T1 chuyển nạp gen với vector pH OA210 mang gen bar gen vip3A vào giống Williams 82 TT Dòng T0 Số Kết phết Kết phân tích Southern blot* (số dòngT1) mang gen dòng Liberty bar soycry1Ac T1 (K/N) Có gen soycry1Ac HVW4-4 0/1 HVW6-1 0/1 HVW5-2 1/0 HVW5-8 13 9/4 10 HVW5-6 0/1 Tổng 17 14 Ghi chú: *: Chưa phân tích gen bar Trong nghiên cứu bước đầu chọn số dịng/cây T1 nhiễm Liberty để phân tích Southern blot trước nhằm tìm dịng biến đổi gen khơng mang gen bar có mang gen kháng sâu soycry1Ac tức loại gen đánh dấu (marker gene) khỏi dòng biến đổi gen, hướng khắc phục lo ngại tính an tồn biến đổi gen gen đánh dấu chọn lọc gây 446 Tạo dòng T2: Tổng số 19 dòng T2 phát triển từ dịng T1 (HVW5-8-1, HVW5-2-2) phân tích Southern blot Hình cho thấy kết phân tích Southern blot gen vip3A dòng T2 phát triển từ dịng T1 HVW5-2-2 có dịng mang gen vip3A, dịng khơng mang gen vip3A bar (tên dịng nằm khung) Phân tích Southern blot 19 dịng T2 gen vip3A gen bar ghi nhận (bảng 4) có 15 dịng mang gen vip3A dịng khơng có gen vip3A gen bar Hội thảo Quốc gia Khoa học Cây trồng lần thứ Hình Phân tích Southern blot dịng đậu tương T2 giống Williams 82 phát triển từ dòng (HVW5-2-2) chuyển nạp gen vip3A DNA cắt đoạn EcoRI Mũi tên chiều dài 1,8 kb gen vip3A (-): đối chứng (không biến đổi gen) (+): pHOA (pPTN-Vip3A) plasmid DNA, K: Kháng Liberty, N: Nhiễm Liberty Bảng Phân tích Southern blot dòng T1 chuyển nạp gen với vector pHOA210 mang gen bar gen vip3A vào giống Williams 82 Kết phân tích Southern blot* (số dịng T1) Dịng T1 Số mang gen dòng Kết phết Liberty bar soycry1Ac T2 (K/N) Có gen bar soycry1Ac Có gen soycry1Ac Có gen bar Khơng có gen bar soycry1Ac HVW5-8-1 13 0/13 10 HVW5-2-2 6/0 Tổng 19 15 TT 3.3 Kết phân tích ELISA dịng đậu tương mang gen soycry1Ac Phân tích ELISA dịng T2 mang gen soycry1Ac cho thấy có biểu đáng kể protein Cry1Ac (hình 9) Phân tích định lượng hàm lượng protein Cry1Ac, số liệu ghi nhận sau: Trong tổng số 25 dòng phân tích, có 19 dịng có hàm lượng protein xác định Hàm lượng protein Cry1Ac dòng biến đổi gen dao động từ 325,03 đến 677,83 ng/g tươi Dòng có hàm lượng protein Cry1Ac cao dịng T2 HCW3-2-3-1 (bảng 5) Hình Kết phân tích ELISA dòng đậu tương mang gen soycry1Ac (A) Các giếng ELISA chuyển gen đổi sang màu xanh sau thêm substrate (B) Giếng ELISA chuyển gen đổi sang màu vàng sau thêm HCl 1N Các giếng khung đối chứng theo thứ tự từ xuống gồm giếng trống (blank), giếng đối chứng dương (antibody), giếng đối chứng không chuyển gen 447 VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM Bảng Hàm lượng protein cry1Ac (ng/g tươi) dòng đậu tương chuyển gen mang gen soycry1Ac TT Dòng đậu tương Hàm lượng protein TT Dòng đậu tương Hàm lượng protein T3HCW4-1-6-11-1 372,25 11 T3HCW4-1-2-20-3 527,82 T3HCW4-1-2-6-2 500,04 12 T3HCW4-1-2-20-4 608,38 T2HCW3-2-2-1 325,03 13 T3HCW4-1-6-1-7 552,82 T2HCW3-2-2-2 558,38 14 T3HCW4-1-6 1-8 475,04 T2HCW3-2-2-3 455,59 15 T3HCW4-1-1-21-4 655,61 T2HCW3-2-3-1 677,83 16 T3HCW4-1-5-9-1 419,48 T2HCW3-2-3-3 663,94 17 T3HCW4-1-5-9-2 466,70 T2HCW3-2-1-3 608,38 18 T3HCW4-1-3-14-1 575,05 T2HCW3-2-1-4 658,39 19 T3HCW4-1-3-14-2 625,05 10 T2HCW3-2-1-2 641,72 3.4 Thử nghiệm tính kháng sâu đục dòng đậu tương biến đổi gen Thời gian tiến hành thí nghiệm từ ngày 12/12/2012 đến ngày thu hoạch đậu 13/03/2013 Ghi nhận kết kháng sâu đục trái 20 dòng biến đổi gen T2 T3 chuyển nạp với vector pHOA210 mang gen vip3A vào giống Williams 82 trồng điều kiện tự nhiên (nhà lưới Viện Lúa ĐBSCL) sau: Tỷ lệ bị sâu đục dòng biến đổi gen dao động từ 7,8 - 61,39% so với đối chứng Williams 82 66,51% (hình 10) Dịng T3 HVW4-1-7-12 có tỷ lệ bị sâu đục thấp (7,8%) Các dịng có tỷ lệ sâu đục tương đối thấp so với đối chứng dao động từ 16,77 - 19,42% gồm: T3HVW4-1-1717, T2HVW5-6-2, T2HVW5-8-5 Đây dòng kháng sâu triển vọng Hình 11 cho thấy khác biệt mức độ sâu hại dòng đậu tương biến đổi gen T2 HVW5-2-1 so với giống đối chứng không chuyển gen Williams 82 Hình 10 Biểu đồ tỷ lệ sâu đục dòng đậu tương biến đổi gen mang gen vip3A (pHOA 210) trồng nhà lưới Bộ môn Công nghệ sinh học, Viện Lúa ĐBSCL Ngày thu hoạch: 13/03/2013 448 Hội thảo Quốc gia Khoa học Cây trồng lần thứ IV KẾT LUẬN Nghiên cứu chọn tạo giống đậu tương kháng ruồi đục thân sâu đục thu kết quả: - Đã thiết kết vector mang gen kháng sâu cry2Aa, cry4A, cry2Aa+soycry1Ac, cry4A+soycry1Ac - Đã tạo dòng biến đổi gen từ giống Williams đến hệ T2 xác định qua phân tích Southern blot mang gen soycry1Ac vip3A Phân tích ELISA dịng T2 mang gen soycry1Ac ghi nhận biểu đáng kể protein Cry1Ac Thí nghiệm tính kháng sâu đục dòng T2, T3 mang gen vip3A điều kiện tự nhiên trồng nhà lưới cho thấy số dòng biến đổi gen có tỷ lệ sâu hại thấp so với giống đối chứng không biến đổi gen TÀI LIỆU THAM KHẢO Dellaporta SL, Wood J and Hicks JB (1983) A plant DNAminipreparation: Version II Plant Mol Biol Rep 4:19 - 21 FAOSTAT(2011) http://faostat.fao.org/site/567/DesktopDefault.aspx? PageID=567#ancor ISAAA (2012) Report on Biotech/GM Crops www.isaaa.org/resources/publications/briefs/44/ppts lides/Brief44slides.pd Olhoft PM, Flagel LE, Donovan CM and Somers DA (2003) Efficient soybean transformation using hygromycine B selection in the cotylendonary-node method Planta 216: 723 - 735 Southern E M (1975) J Mol Biol 98, 503 - 517 Trần Thị Cúc Hồ (2008) Tối ưu hóa quy trình chuyển nạp gen đậu tương cải tiến phương pháp lây nhiễm với Agrobacterium tumefaciens Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn 9: - 11 Tổng cục Thống kê: http://www.gso.gov.vn/default.aspx?tabid=230&Ite mID=9997 Zeng P, Vadnais D, Zhang Z andPolacco J (2004) Refined glufosinate selection in Agrobacteriummediated transformation of soybean [Glycine max (L.) Merr.] Plant Cell Rep 22:478 - 482 Global Status of 449 ... Nghiên cứu chọn tạo giống đậu tương kháng ruồi đục thân sâu đục thu kết quả: - Đã thiết kết vector mang gen kháng sâu cry2Aa, cry4A, cry2Aa+soycry1Ac, cry4A+soycry1Ac - Đã tạo dòng biến đổi gen. .. khác biệt mức độ sâu hại dòng đậu tương biến đổi gen T2 HVW5-2-1 so với giống đối chứng không chuyển gen Williams 82 Hình 10 Biểu đồ tỷ lệ sâu đục dòng đậu tương biến đổi gen mang gen vip3A (pHOA... VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu Giống đậu tương dùng cho chuyển nạp Williams 82, giống nhập nội dùng phổ biến để chuyển nạp gen đậu tương giới Các vector mang gen kháng sâu dùng