Kết quả của nghiên cứu này cho thấy chủng vi khuẩn MGGC8 phân lập được đã đạt các tiêu chí về giống dùng để chế kháng nguyên MG như sau: Có tính thích nghi cao và ổn định trên phôi gà 7 ngày tuổi. Kết quả gây nhiễm cho thấy MGGC8 có khả năng gây chết phôi gà với bệnh tích đặc trưng, thời gian mà số lượng phôi chết tập trung sau khi gây nhiễm là từ 48-96 giờ, tương tự như chủng chuẩn MGS6 gây chết phôi gà.
KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXIII SỐ - 2016 KẾT QUẢ KIỂM TRA CÁC ĐẶC TÍNH SINH HÓA VÀ XÂY DỰNG MỘT SỐ CHỈ TIÊU VỀ GIỐNG VI KHUẨN MYCOPLASMA GALLISEPTICUM ĐỂ SẢN XUẤT KHÁNG NGUYÊN Đào Thị Hảo1, Cù Hữu Phú1, Nguyễn Xuân Huyên1, Nguyễn Thị Bích Thủy1, Lê Thị Minh Hằng1, Nguyễn Thị Nga2, Nguyễn Bá Hiên3 TÓM TẮT Kết quả của nghiên cứu này cho thấy chủng vi khuẩn MGGC8 phân lập được đã đạt tiêu chí giống dùng để chế kháng ngun MG sau: - Có tính thích nghi cao ổn định phôi gà ngày tuổi Kết gây nhiễm cho thấy MGGC8 có khả gây chết phơi gà với bệnh tích đặc trưng, thời gian mà số lượng phôi chết tập trung sau gây nhiễm từ 48-96 giờ, tương tự chủng chuẩn MGS6 gây chết phôi gà - Phát triển ổn định loại mơi trường ni cấy và có phản ứng ngưng kết với kháng huyết chuẩn serotype A (Týp huyết A) - Kết kiểm định phản ứng sinh học: + Đều lên men loại đường glucoza TTC (100%), khơng có chủng có chuyển hố Arginin PHO + Đều cho kết dương tính sử dụng kỹ thuật PCR để xét nghiệm chủng vi khuẩn Kết xét nghiệm cho thấy sản phẩm gel Agarose MG 530 bp Từ khóa: Đặc tính sinh hóa, Kháng nguyên MG, Bệnh tich đặc trưng, Phản ứng ngưng kết Result of biochemical characteristic test and developing some seed indexes of MG bacteria for antigenic production Dao Thi Hao, Cu Huu Phu, Nguyen Xuan Huyen, Nguyen Thich Bich Thuy, Le Thi Minh Hang, Nguyen Thi Nga, Nguyen Ba Hien SUMMARY Result of this study indicated that the isolated MGGC8 bacteria strain was met some seed indexes using for antigenic production as follows: - High adaptation and stability in 7day old chicken embryos Infection result showed that MGGC8 was able to kill chicken embryos with the typical lesions, the amount of concentrated dead embryos after 48-96 hours of infection was similar to that of the MGS6 standard strain - Stable development on different culture media and having agglutination reaction with standard antiserum, serotype A - Tested result by biological reactions: + All of the strains fermented glucoza and TTC (100%), none of them metabolized Arginine and PHO + All of the strains have given the positive result when using PCR technique The MG product obtaining on Agarose gel was 530 bp Keywords: Biochemical characteristic, MG antigen, Typical lesion, Agglutination reaction Viện Thú y Công ty liên doanh thuốc thú y ViaVet Học viện Nông nghiệp Việt Nam 50 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXIII SỐ - 2016 I ĐẶT VẤN ĐỀ Vi khuẩn Mycoplasma gallisepticum (MG) nguyên nhân quan trọng gây nên bệnh viêm đường hô hấp mạn tính CRD gà gây bệnh viêm xoang truyền nhiễm gà tây, tổn thất bệnh gây có ảnh hưởng lớn với gà thịt, gà giống gà đẻ thương phẩm Nhận thức tầm quan trọng việc phịng chống bệnh CRD, có nhiều nghiên cứu bệnh CRD vi khuẩn MG gây bệnh tiến hành Đây bệnh cần phải kiểm tra định kỳ, đặt lên hàng đầu việc chẩn đoán phản ứng ngưng kết nhanh Từ năm 2007, Bộ môn Vi trùng, Viện Thú y phân lập có giống vi khuẩn MGGC8; Bộ môn tiến hành chế tạo kháng nguyên (KN) MG dùng chẩn đoán bệnh CRD diện hẹp Những nghiên cứu bước đầu tiêu vơ trùng, an tồn hiệu lực kháng ngun đàn gà nuôi Việt Nam cho kết tốt Với mục đích chế tạo hồn thiện thành cơng kháng ngun chẩn đốn từ chủng vi khuẩn MG phân lập được, nhằm góp phần phòng chống bệnh CRD Việt Nam đạt hiệu cao, tiến hành kiểm định lại giống vi khuẩn M gallisepticum với ký hiệu MGGC8 chọn, xây dựng tiêu chuẩn hóa số tiêu giống để sản xuất kháng nguyên qua đề tài “Kiểm tra đặc tính sinh hố xây dựng số tiêu giống vi khuẩn MG sản xuất kháng nguyên.” II NỘI DUNG NGHIÊN CỨU III NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu - Chủng vi khuẩn MG chuẩn, MG phân lập có sẵn Bộ môn Vi trùng + Nguồn gốc giống MGGC8: Phân lập từ sở chăn nuôi (Trạm nghiên cứu thử nghiệm thức ăn gia súc- Viện chăn nuôi) Hà Nội + Giống MGS6 chuẩn: Nhật Bản - KHT MG chuẩn đơn giá đa giá Viện Thú y Nhật Bản cung cấp - KHT MG tự chế Bộ môn Vi trùng Viện Thú y - Hồng cầu gà lấy từ gà trống khỏe mạnh có phản ứng HI âm tính với KN MG, nước muối sinh lý 0,85% - Các loại môi trường, hố chất dùng nghiên cứu + Mơi trường thích hợp cho phát triển MG môi trường Frey: Mycoplasma Broth (MB), Mycoplasma Agar (MA) chuẩn bị theo qui trình Tổ chức dịch tễ giới + Mơi trường dùng cho phản ứng sinh hóa: 0,5 % Glucose nước thịt PPLO (MB)+ 0,002 % phenol red, pH= 7,8; 0,2 % Arginine MB+ 0,002% phenol red, pH= 6,8 0,02% Tetrazolium chloride (TTC) MB; 0,01% Phenolphtalein diphosphate, muối natri (PHO) MB (Chuẩn bị trước dùng); 0,002% Phenol red MB, pH= 7,5 Khả thích ứng ổn định chủng vi khuẩn MG phơi gà + Các loại hố chất sử dụng phản ứng PCR hãng Espec oligo service CorporationNhật Bản cung cấp với trình tự cặp mồi với MG theo Kiss Cs (1997), sử dụng sau: (F: Forward; R: Reverse) Kiểm tra tính ổn định giống vi khuẩn MG dùng chế KN MGF: 5’AAC AAC AGA GGC GAA GGC GAG3’ Kiểm định vi khuẩn MG phản ứng sinh hoá MGR: 5’ACG GAT TTG CAA CTG TTT GTA TTG G3’ Kiểm định số tiêu giống vi khuẩn MG dùng để sản xuất kháng nguyên 51 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXIII SỐ - 2016 Sản phẩm PCR MG sử dụng nghiên cứu 530 bp - Các máy móc dụng cụ cần thiết khác 2.2 Phương pháp nghiên cứu - Phương pháp xác định hình thái, tính chất ni cấy, đặc tính sinh vật hố học vi khuẩn MG Theo tiêu chuẩn Tổ chức Thú y giới OIE (2004) Viện Thú y Nhật Bản - Phương pháp tăng cường giống vi khuẩn sản xuất KN trứng có phơi: gây nhiễm vào túi lịng đỏ phơi gà - ngày tuổi với huyễn dịch MG chuẩn độ liều 1x108CFU/0,05ml1x108CFU/0,1ml - Phương pháp phát kháng thể theo thường quy + Phản ứng ngưng kết nhanh phiến kính + Phản ứng ngưng kết ngăn trở ngưng kết hồng cầu gà - Phương pháp xác định kháng nguyên + Phản ứng immunoperoxidaza gián tiếp (IP) (Imada Y.,1982) - Phương pháp xác định MG phản ứng nhân gen (PCR) Trình tự cặp mồi với MG theo Kiss cs (1997), sử dụng sau: (F: Forward; R: Reverse) MGF: 5’AAC AAC AGA GGC GAA GGC GAG3’ MGR: 5’ACG GAT TTG CAA CTG TTT GTA TTG G3’ Sản phẩm PCR MG 530 bp IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Tăng cường giống vi khuẩn MG sản xuất kháng ngun trứng có phơi Theo OIE (2000), vi khuẩn MG thích nghi phơi gà nuôi cấy phôi - ngày tuổi, thời gian gây chết phơi tập trung vịng từ 48-96 sau tiêm Chủng vi khuẩn MGGC8 sau 52 kiểm tra đạt tiêu khiết, khả sinh trưởng, hình thái vi khuẩn, hình thái khuẩn lạc, đặc tính sinh hóa, chúng tơi tiến hành gây nhiễm phôi gà ngày tuổi, chủng MGGC8 gây nhiễm chủng MGS6 chuẩn để so sánh Kết thu cho thấy: Chủng vi khuẩn MG có tính thích ứng cao ổn định phơi gà ngày tuổi Tính thích ứng biểu nhân lên vi khuẩn phôi, gây chết phôi thời điểm tương đối ổn định số phôi chết tập trung khoảng thời gian từ 48 - 96 (bảng 1) Lần thí nghiệm thứ nhất, tiêm vi khuẩn MG cho phôi (mỗi chủng vi khuẩn cho phôi) Tỷ lệ phôi chết thời điểm là: Thời điểm 48 có phơi, 72 có phơi, 96 có phơi; thời điểm 48 - 96 có 8/8 phôi chết, chiếm tỷ lệ 100% Lô đối chứng: Phơi gà đối chứng phát triển bình thường, khơng có phơi chết Lần thí nghiệm thứ hai, tiêm vi khuẩn MG cho phôi (mỗi chủng vi khuẩn cho phơi) Kết cho thấy khơng có phơi chết vòng 48 giờ, hai chủng vi khuẩn gây chết vòng 72 giờ, chiếm tỷ lệ 100% Lô đối chứng: Phôi gà đối chứng phát triển bình thường, khơng có phơi chết Thơng qua số phơi chết, bệnh tích phơi mổ khám cho ta thấy có mặt vi khuẩn MG đặc tính thích ứng cao vi khuẩn phơi gà Chủng vi khuẩn MGGC8 dùng để chế kháng nguyên có đặc tính giống chủng MGS6 chuẩn Trong lần thí nghiệm, số lượng tỷ lệ phơi chết thời điểm có khác điều có liên quan đến số lượng vi khuẩn nhân lên phôi sức đề kháng phôi Thời gian phôi chết cao 72 giờ, tập trung đợt cấy truyền sau tăng cường lần Như vậy, kết cấy truyền cho thấy chủng vi khuẩn MGGC8 MGS6 qua q trình bảo quản giữ tính ổn định độc lực khả thích nghi cao phôi gà KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXIII SỐ - 2016 Bảng Kết tăng cường giống vi khuẩn MG trứng có phơi Đợt TN Đợt Đợt Chỉ tiêu Lô (MG S6) Lô (MG GC8) Lô (Đối chứng) Số lượng phôi 4 Liều gây bệnh (vk/ml) 1*10 1*10 8 Ghi Nước thịt MB Đường tiêm Túi nỗn hồng Túi nỗn hồng Túi nỗn hồng Số phơi chết (24 giờ) 0 Số phôi chết (48 giờ) 0 Số phôi chết (72 giờ) 1 Số phôi chết (96 giờ) Tổng số phôi chết 4 Chỉ tiêu Lô (MG S6) Lô (MG GC8) Lô (Đối chứng) Số lượng phôi 4 Liều gây bệnh (vk/ml) 1*108 1*108 Nước thịt MB Đường tiêm Túi nỗn hồng Túi nỗn hồng Túi nỗn hồng Số phơi chết (24 giờ) 0 Số phôi chết (48 giờ) 0 Số phôi chết (72 giờ) 4 Số phôi chết (96 giờ) 0 Tổng số phôi chết 4 Sau ngày Sau ngày Ghi chú: Phôi gà đối chứng phát triển bình thường Sau cấy truyền phôi gà, mổ phôi quan sát biến đổi bệnh lý phôi Kết theo dõi biến đổi bệnh lý phôi sau gây nhiễm vi khuẩn MG trình bày bảng Bảng Kết mổ khám phơi gà sau gây nhiễm Đợt TN Tình trạng phơi Số lượng Bệnh tích Phơi thai bé, tụ máu, xuất huyết da; gan sưng, viêm; lách sưng; viêm ngoại tâm mạc (8/8) Phôi sống Phôi thai to phơi lơ chết, khơng có bệnh tích bất thường (2/2) Phơi chết Phơi thai tụ máu, xuất huyết da; gan sưng, viêm; lách sưng; viêm ngoại tâm mạc (8/8) Phôi thai to phơi lơ chết, khơng có bệnh tích bất thường (2/2) Phơi chết Đợt Đợt Phôi sống Ghi 15/6/14 30/8/14 53 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXIII SỐ - 2016 Bệnh tích xuất huyết da phổ biến (100%), phôi thai bé, tụ máu, gan sưng, viêm; lách sưng, viêm ngoại tâm mạc Phù phơi thấy Hình Bệnh tích gan sưng, viêm phơi gà gây nhiễm MG Trong q trình mổ khám để quan sát bệnh tích phơi, lịng đỏ phơi cấy chuyển vào nước thịt lên thạch để phân lập lại vi rõ ở phôi chết khoảng từ 72-96 Đặc biệt phơi cịi cọc thấy phơi chết khoảng thời gian từ 72-96 (hình 1, hình 2) Hình Bệnh tích phơi gây nhiễm MG Phơi trái: phôi bị gây nhiễm MG Phôi phải: đối chứng không gây nhiễm MG khuẩn MG ngày sau gây nhiễm Kết thu được trình bày bảng Bảng Kết phân lập xác định MG từ phôi gà PCR Đợt TN Đợt Đợt MA PCR (530 bp) + (8/8) + (8/8) + (8/8) Phôi sống - - - Phôi chết + (8/8) + (8/8) + (8/8) Phôi sống - - - Số lượng Phôi chết Qua hai đợt thí nghiệm, phương pháp chẩn đốn khác nhau, kết cho thấy hai phương pháp nuôi cấy môi trường nước thịt (MB), môi trường thạch (MA) PCR cho kết dương tính 8/8 Như vậy, giống vi khuẩn MG tăng cường trứng giữ độc lực ổn định phơi gà 3.2 Kết kiểm tra tính ổn định giống vi khuẩn MG dùng chế KN 54 Ni cấy MB Tình trạng phơi Ghi Để xác định tính ổn định giống vi khuẩn MG, sử dụng sáu chủng vi khuẩn MGS6, MGGC8 giữ môi trường thạch lỏng, đông khô chủng tăng cường qua phôi trứng, tiến hành nuôi cấy theo dõi phát triển lọai môi trường MB, MA; tiến hành đo pH làm đồng phản ứng để đánh giá, kết trình bày bảng KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXIII SỐ - 2016 Bảng Kết kiểm tra tính ổn định giống MG dùng chế KN TT Giống VK MB Thời gian chuyển màu môi trường pH Nhuộm Giemsa MA IP HI ≥1/8 KHTC MGS61 + ngày 5,4 + + + + + MGS62 + ngày 5,3 + + + + + MGS63 + ngày 5,4 + + + + + MGGC81 + ngày 5,5 + + + + + MGGC82 + ngày 5,4 + + + + + MGGC83 + ngày 5,4 + + + + + Ghi chú: MGS61-giống MGS6 đông khô;; MGS62-giống MGS6 giữ thạch lỏng; MGS63-giống MGS6 tăng cường qua phôi trứng; MGGC81-giống MGGC8 đông khô,; MGGC82-giốngMGGC8 giữ thạch lỏng;; MGGC83-giống MGGC8 tăng cường qua phôi trứng; KHTC: kháng huyết MG chuẩn Kết bảng cho thấy chủng vi khuẩn mọc tốt môi trường nước thịt (MB) Trên môi trường MB kiểm tra thay đổi màu hàng ngày, chất thị chuyển từ màu đỏ sang màu da cam cuối màu vàng từ 3¸5 ngày Khi phát triển, khuẩn lạc khơng làm vẩn đục làm vẩn môi trường, pH môi trường MB chủng MG từ 7,8 dao động xuống khoảng 5,3 đến 5,5 Bằng phương pháp nhuộm Giemsa, chủng vi khuẩn MG có dạng tiểu cầu khuẩn, nằm giống dạng đám nhỏ, bắt màu đỏ, kích thước 0,25 - 0,5 mm Trên môi trường thạch MA, quan sát kính hiển vi, khuẩn lạc chủng vi khuẩn MG có dạng đặc trưng hình trứng ốp lết, kích thước 0,1 - mm Kết qủa phù hợp với Yoder Hofstad, (1964): Trong môi trường nước thịt nuôi cấy Mycoplasma bảo quản -30oC, mầm bệnh MG sống ÷ năm, môi trường nước thịt đông khô 4oC, MG sống năm Khi bảo quản 37oC, MG ổn định dung dịch PBS khoảng 24 Trong phản ứng IP gián tiếp mảnh giấy lọc vuông nhỏ, phản ứng sau nhuộm có màu xanh, chủng MG có kết dương tính Với kỹ thuật nhuộm IP, thời gian tốt khuẩn lạc mọc môi trường MA - ngày phải đặt giấy lọc cẩn thận Việc xác định serotype MG tốt phản ứng ức chế ngưng kết hồng cầu (HI), chủng vi khuẩn đem nghiên cứu có hiệu giá ngưng kết HI≥1/8 Chủng MGS6 dùng thí nghiệm chủng chuẩn Malaixia (2000) cấy chuyển phịng thí nghiệm chủng chọn làm kháng nguyên cho phản ứng HI Việc tiêm truyền phịng thí nghiệm dẫn tới làm giảm độc lực nên dẫn đến hiệu giá HI giảm, đạt hiệu giá HI≥1/8 yêu cầu phản ứng Các chủng vi khuẩn cho kết dương tính làm phản ứng ngưng kết với kháng huyết chuẩn serotype A Như vậy, chủng vi khuẩn MG mà nuôi cấy có đặc điểm hình thái, ni cấy, đảm bảo tiêu giống miêu tả tác giả Rasin cs, (1998) 3.3 Kết kiểm định vi khuẩn MG phản ứng sinh hoá Vi khuẩn MG thuộc nhóm vi khuẩn lên men đường glucoza, việc chuyển hố glucoza phản ứng bắt buộc việc xác định đặc tính MG Sự lên men glucoza đánh giá thay đổi pH làm chuyển màu mơi trường Bên cạnh đó, chúng 55 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXIII SỐ - 2016 dùng phản ứng PCR để kiểm định lại gen chủng vi khuẩn gồm chủng MGS6, MGGC8 giữ môi trường thạch lỏng, đông khô chủng tăng cường qua phơi trứng Kết trình bày bảng Bảng Kết kiểm tra đặc tính sinh hóa kiểm định PCR Chỉ tiêu Chủng MGS61 Chủng MGS62 Chủng MGS63 Chủng MGGC81 Chủng MGGC82 Chủng MGGC83 Glucose + + + + + + TTC + + + + + + PHO - - - - - - ARG - - - - - - PCR (530 bp) + + + + + + Ghi chú: MGS61-Chủng MGS6 đông khô;; MGS62-chủng MGS6 giữ thạch lỏng; MGS63-chủng MGS6 tăng cường qua phôi trứng; MGGC81-chủng MGGC8 đông khô;; MGGC82-chủng MGGC8 giữ thạch lỏng;; MGGC83-chủng MGGC8 tăng cường qua phôi trứng Kết trình bày bảng cho thấy, 6/6 chủng MG lên men loại đường glucoza TTC (100%), khơng có chủng có chuyển hố Arginin PHO Kết bảng cho thấy, chủng MG cho kết dương tính tương ứng sử dụng kỹ thuật PCR Kết sản phẩm gel Agarose MG 530 bp (ảnh) Từ kết đạt được, chúng tơi có số nhận xét sau: - Giống vi khuẩn MGGC8 gây bệnh trứng có khả gây chết phơi vòng 4896 - Giống vi khuẩn MGGC8 phân lập từ năm 2007 đạt yêu cầu tính lặp lại tính ổn định kiểm tra đặc tính sinh hóa Việc xác định đặc tính sinh hóa ADN vi khuẩn cho thấy: Chủng vi khuẩn MG mà chúng tơi phân lập có đặc tính hố học ADN đặc hiệu mầm bệnh đặc trưng với chủng MG chuẩn; chủng nuôi cấy môi trường dùng nghiên cứu ổn định, khiết, đảm bảo tiêu sinh hoá Ảnh: Sản phẩm PCR kiểm định chủng vi khuẩn MG Ghi chú: - Giếng (chủng MGS61), giếng (chủng MGS62), giếng (chủng MGS63), giếng (chủng MGGC81), giếng (đối chứng âm), giếng (chủng MGGC82), giếng (chủng MGGC83), giếng M (ADN chuẩn 100 bp) 56 đạt tiêu giống vi khuẩn MG Kết nghiên cứu mà đạt tương tự kết thẩm định giống MGGC8 Trung tâm kiểm nghiệm thuốc thú y Trung ương I năm 2014 KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXIII SỐ - 2016 IV KẾT LUẬN Chủng vi khuẩn MGGC8 đạt tiêu chí giống dùng để chế kháng ngun MG: - Có tính thích nghi cao ổn định phôi gà ngày tuổi - Phát triển ổn định loại môi trường ni cấy, có phản ứng ngưng kết với kháng huyết chuẩn serotype A (Týp huyết A) - Kết kiểm định phản ứng sinh học: + Đều lên men loại đường glucoza TTC (100%), khơng có chủng có chuyển hố Arginin PHO + Đều cho kết dương tính tương ứng sử dụng kỹ thuật PCR Kết sản phẩm gel Agarose MG 530 bp Chủng vi khuẩn MG mà chúng tơi ni cấy có đặc điểm hình thái, tính chất ni cấy, đặc tính hố học AND đặc hiệu mầm bệnh đặc trưng chủng MG chuẩn, có tính ổn định cao, khiết đạt tiêu giống vi khuẩn để sản xuất kháng nguyên TÀI LIỆU THAM KHẢO Bencina D & Bradbury J M (1989), Indirect immunoperoxidase assay for the detection of in chicken Mycoplasma in fection, Avian Pathology, 20, 113 - 124 Bradbury J M., Yavari C A., Dare Cm (2001), Mycoplasma and respiratory disease in pheasants and partridges, Avian Pathology, 30[4], 391 - 396 Clyde W A Jr (1983), Growth inhibition tests In: Methods in Mycoplasmology, Vol.1, Razin S & Tully J.G., eds Academic Press, New York, USA, and London, UK, 405 - 410 Dybvig K., Voelker L.L (1996), Molecular biology of mycoplasmas, Annu Rev Mirobiol, 50, 25 - 57 Edward D G ff., and Moore W B (1974), The determination of metabolism of glucose “Document of a Working Group of the FAO-WHO Programme on Comparative Mycoplasmology,” WHO Doc No VPH/ M1c/74.2 World Health Organ Geneva In “Methods in Mycoplasmology”, Vol 1, 337343 Frey M L., Hanson R P and Anderson D P (1968), A medium for the isolation of avian mycoplasmas, Am J Vet Res, 29, 2163 - 2171 Freundt E A., (1983), Culture media for classic mycoplasmas, In: The Mycoplasmas, Vol 1, Razin S & Tully J.G., eds, Academic Press, New York, USA and London, UK, 127 - 135 Imada Y (1987), Mycoplasma identification by filter paper, I P, Natl.Inst Anim Heat Q, 25, 16 - 21 Kempf I., Gesbert F and Guittet M (1997), Experimental infection of chickens with a typical Mycoplasma gallisepticum strain: comparison of diagnostic methods, Vet Sci, 63, 211 - 213 10 Kiss I., Matiz K., Kaszanyitzky E., Chavez Y., Johanson K.E (1997), Detection and identification of avian mycoplasmas by polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism assay, Vet Microbiol, 58(1), 23 - 30 11 OIE manual standards for diagnoses and vaccine (2000), Chapter 3.6.3, Avian mycoplasmosis, - 10 12 Razin S., Yogev D., Naot Y., (1998), Molecular Biology and Pathogenicity of Mycoplasmas, Microbiology and molecular biology reviews, 62[4] 1094 - 1156 Nhận ngày 19-6-2015 Phản biện ngày 20-10-2015 57 ... Vi? ??t Nam đạt hiệu cao, tiến hành kiểm định lại giống vi khuẩn M gallisepticum với ký hiệu MGGC8 chọn, xây dựng tiêu chuẩn hóa số tiêu giống để sản xuất kháng nguyên qua đề tài ? ?Kiểm tra đặc tính. .. cầu tính lặp lại tính ổn định kiểm tra đặc tính sinh hóa Vi? ??c xác định đặc tính sinh hóa ADN vi khuẩn cho thấy: Chủng vi khuẩn MG mà chúng tơi phân lập có đặc tính hố học ADN đặc hiệu mầm bệnh đặc. .. ? ?Kiểm tra đặc tính sinh hố xây dựng số tiêu giống vi khuẩn MG sản xuất kháng nguyên. ” II NỘI DUNG NGHIÊN CỨU III NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu - Chủng vi khuẩn MG chuẩn,