Bài viết trình bày kết quả đánh giá hiệu quả phòng bệnh của vacxin trong thực tế sản xuất, nhằm cung cấp thêm những cơ sở khoa học để có thể đưa vacxin vào sử dụng tiêm phòng phòng bệnh đậu dê trong sản xuất.
Đánh giá an tòan hiệu lực vacxin nhược độc đậu dê điều kiện sản xuất Trần Xuân Hạnh1, Nguyễn Thị Lam Hương1, Đặng Hùng1, Tô Thị Phấn1, Phạm Hào Quang1, Huỳnh Khương Hữu Duyên1, Tô Thị Huệ1, Nguyễn Văn Dung1,Nguyễn Xn Bình2, Đỗ Xn Biểu2 TĨM TẮT Vacxin nhược độc đậu dê đánh giá an toàn hiệu lực điều kiện sản xuất Kết vacxin an toàn tiêm cho dê với liều sử dụng hay gấp 10 liều sử dụng Sau tiêm vacxin tháng, kỹ thuật ELISA xác định 96,3 % dê có đáp ứng kháng thể ngưỡng bảo hộ 100% dê bảo hộ thử thách với chủng virut đậu dê cường độc NAVET – ĐD06/DN Kết chứng minh dùng kỹ thuật ELISA để kiểm tra đáp ứng kháng thể giám sát đàn dê sau tiêm phịng Từ khóa: Đậu dê, Vacxin, An toàn , Hiệu lực The evaluation of safety and efficacy of live goat pox vaccine in the field Tran Xuan Hanh, Nguyen Thi Lam Huong, Đang Hung, To Thi Phan, Pham Hao Quang, Huynh Khuong Huu Duyen, To Thi Hue, Nguyen Van Dung,Nguyen Xuan Binh, Do Xuan Bieu SUMMARY The safety and efficacy of live goat pox vaccine were evaluated in the field The results indicated that vaccine was safe for goats vaccinated with either one dose or ten times to those of dose recommended One month after vaccination, 96,3% vaccinated goats had antibody response detected by ELISA and 100 % vaccinated goats were protected against the challenge using the virulent goat virus strain NAVET – ĐD06/DN The results also provided that ELISA could be used to detect the antibody response and to surveillance for vaccination program in goat pox disease Key words: Goat pox, Vaccine, Safety, Eficacy Đặt vấn đề Bệnh đậu dê virut đậu thuộc giống Capripox, họ Poxviride gây ra, bệnh truyền nhiễm loài dê với tỷ lệ bệnh tới 75% chết biến động từ 50% đến 100% tùy tuổi dê mức độ mẫn cảm dê Năm 2005 bệnh phát đàn dê nuôi Việt Nam tỉnh Cao Bằng, Bắc Giang, Lạng Sơn, Hà Tây (OIE, 2005) sau lây lan đến tỉnh Miền Trung Miền Nam Hiện bệnh có hầu hết tỉnh bệnh gây thiệt hại lớn cho nghề nuôi dê người chăn nuôi quân tâm Phòng bệnh vacxin biện pháp phòng bệnh hiệu Đã có nhiều thơng báo thành cơng nghiên cứu vacxin phịng bệnh đậu dê giới, bao gồm vacxin vô hoạt vacxin nhược độc (Carn, 1993) Ở Việt Nam, Trung tâm nghiên cứu thú y, thuộc Công ty thuốc thú y TW – NAVETCO nghiên cứu chế tạo thành cơng vacxin phịng bệnh đậu dê nhược độc dạng đông khô Vacxin đánh giá phịng thí nghiệm cho kết tốt vơ trùng, an tịan hiệu lực -(1) Trung tâm nghiên cứu thú y – NAVETCO; (2) Cơ quan thú y vùng Trong viết này, chúng tơi xin trình bày kết đánh giá hiệu phòng bệnh vacxin thực tế sản xuất, nhằm cung cấp thêm sở khoa học để đưa vacxin vào sử dụng tiêm phòng phòng bệnh đậu dê sản xuất II Vật liệu phương pháp nghiên cứu 2.1.Vật liệu thí nghiệm + Vacxin thí nghiệm: vacxin nhược độc đậu dê đơng khô, 1liều chứa 103,5 TCID50/ml chất ổn định sữa không kem + Virut đậu dê cường độc, chủng NAVET – ĐD06/DN + Động vật: Dê từ - tháng tuổi thuộc giống dê cỏ , chưa tiêm phòng vacxin đậu dê mẫn cảm với bệnh đậu dê Trước tiến hành gây miễn dịch, toàn dê thí nghiệm lấy máu kiểm tra kháng thể đậu dê (Phương pháp ELISA) Dê chọn dùng cho khảo nghiệm phải có kết ELISA âm tính với kháng thể đậu dê 2.2 Phương pháp thí nghiệm + Phương pháp kiểm tra an tòan: 10 dê tiêm vacxin với liều gấp 10 liều dùng Theo dõi 15 ngày Vacxin kết luận an toàn dê tiêm với liều khơng có biểu bất thường qua trình theo dõi + Phương pháp kiểm tra hiệu lực: 30 dê khỏe mạnh, mẫn cảm với bệnh đậu dê gây miễn dịch với vacxin đậu dê đông khô, liều/con Sau 30 ngày tiêm vacxin, dê miễn dịch lấy máu để kiểm tra đáp ứng kháng thể, đồng thới chọn ngẫu nhiên dê miễn dịch, dê đối chứng không tiêm vacxin để tiến hành thử thách với virut đậu dê cường độc chủng NAVET – ĐD06/DN, liều 105TCID50/con Theo dõi động vật vịng 21 sau cơng, theo tiêu: thân nhiệt, sống, chết bệnh, đáp ứng kháng thể trước công sau công + Kỹ thuật ELISA phát kháng thể virus bệnh đậu dê Phương pháp thực theo bước sau: Phủ Antigen virus Đậu dê 1/800 Coating buffer lên vỉ ELISA, 100 μl/lỗ, ủ 40C/18h 370C/1h; Rửa lần với PBST (PBS chứa 0,05% Tween 20); Block vỉ với Coating buffer chứa 1% BSA, 200 μl/lỗ, 37 0C/1h; Rửa lần với PBST; Cho huyết dê pha loãng 1/10 PBST chứa 2% bột sữa không kem, 100 μl/lỗ, 37 0C/1h; Rửa lần với PBST; Cho Conjugate 1/50.000 PBST chứa 1% BSA, 100 μl/lỗ; Ủ 37 0C/1h; Rửa lần với PBST; Cho chất TMB/H2O2 Substrate buffer, 100 μl/lỗ, để yên nhiệt độ phịng thí nghiệm 10 - 15 phút; Cho 100 µl/lỗ dung dịch H2SO4 1M để dừng phản ứng Đọc mật độ quang (OD) máy đọc ELISA bước sóng 450 nm Mẫu đánh giá có kết ELISA dương OD ≥ 0,2 III Kết nghiên cứu 3.1 Kết theo dõi an toàn Quan sát 10 dê tiêm kiểm tra an tòan, với liều vacxin gấp 10 lần liều sử dụng 30 dê tiêm với liều sử dụng vịng 21 ngày cho thấy vacxin an tồn cho dê liều sử dụng khác Sau tiêm giờ, dê khơng có biểu bất thường, khơng có phản ứng cục vị trí tiêm suốt thời gian theo dõi khơng có dê thử nghiệm bị chết bị bệnh đậu dê Tất dê tiêm vacxin khỏe mạnh, ăn uống bình thường Kết cho thấy vắc xin nhược độc đậu dê có tính an tồn tiêm chủng cho đàn dê khảo nghiệm 3.2 Kết hiệu lực vacxin 3.2.1 Kết đáp ứng kháng thể dê sau tiêm vacxin Kiểm tra đáp ứng kháng thể dê sau tiêm vacxin phương pháp ELISA cho thấy dê tiêm vacxin có đáp ứng kháng thể mạnh, đồng đều, đạt tỷ lệ 96,3% lô miễn dịch, 100 % lơ tiêm an tồn (bảng 1) Kiểm tra lơ đối chứng (khơng tiêm vacxin) khơng có mẫu dương tính với kháng thể bệnh đậu dê, điều chứng tỏ q trình thử nghiệm khơng có xâm nhập lưu hành virut đậu dê tự nhiên lưu hành đàn dê thí nghiệm, virut vacxin đậu dê khơng có khả truyền ngang Bảng 1: Kết kiểm tra đáp ứng miễn dịch sau tiêm vacxin đậu dê Lơ thí nghiệm Miễn dịch An tồn Đơi chứng Số mẫu thực 27 Kết ELISA Mẫu dương/tổng số (%) 26/27 (96,3 %) 6/6 (100%) 0/7 (0 %) 3.2.2 Đánh giá kết công cường độc Ở ngày 30 sau tiêm vacxin, dê miễn dịch (kí hiệu: 500, 497, 499, 13, 15) dê đối chứng không tiêm vacxin (kí hiệu 486, 491) thử thách virut đậu dê cường độc, chủng NAVET-ĐD06/DN, với liều105 TCID50/ con/trong da Kết cho thấy sau công độc, ngày thứ 3, vị trí tiêm dê đối chứng sưng dày với đường kính khỏang cm ngày – tất dê lô đối chứng có phản ứng sốt với chênh lệch nhiệt độ so với trước công từ – 1,5oC Các nốt đậu xuất dê đối chứng vào ngày thứ gốc đuôi, tai, bẹn, kèm theo triệu chứng thở khó, chảy nhiều dịch mũi Trong dê miễn dịch nhiệt độ bình thường khơng có triệu chứng lâm sàng bệnh đậu dê (bảng 2) Bảng 2: Kết dê bảo hộ sau công cường độc Lô Số lượng Chủng virut Số bệnh/tổng số Bảo hộ thí nghiệm Dê (n) công công (%) Lô miễn dịch NAVET0/5 100 % ĐD06/DN Đối chứng 2/2 0% Kết trình bày bảng cho thấy sau 21 ngày theo dõi, dê lô miễn dịch khỏe mạnh, ăn uống bình thường khơng xuất biểu lâm sàng cho virut cường độc đậu dê gây Ngược lại, dê đối chứng, khơng chết, tình trạng sức khỏe xấu, biểu gầy cịm, thở khó, lại khó khăn, nốt đậu xuất với mức độ dầy, rõ gốc đuôi, chỗ da mỏng tai 3.2.3 Kết kiểm tra đáp ứng kháng thể trước công tại thời điểm 21 ngày sau công cường độc Trước thử thách cường độc, dê lô miễn dịch dê lô đối chứng (chọn ngẫu nhiên) kiểm tra đáp ứng kháng thể kỹ thuật ELISA, kết cho thấy dê đối chứng có kết ELISA âm tính với biến động số OD 0,11 – 0,18 (ELISA dương tính OD ≥ 0,2) Ở lô miễn dịch, việc tiêm vacxin kích thích thể sản sinh kháng thể, biển dê cho kết ELISA chuyển dương, với OD dao động khoảng từ 0,28 – 0,48 (bảng 3) Lơ thí nghiệm Bảng 3: Kết kiểm tra kháng thể đậu dê ELISA Phương pháp ELISA Kí hiệu Trước cơng 21 ngày sau công dê Chỉ số OD Đánh giá Chỉ số OD Đánh giá Đối chứng Miễn dịch 486 0.18 (-) 0,35 (+) 491 0,11 (-) 0,90 (+) 500 0,28 (+) 0,73 (+) 497 0,39 (+) 0,73 (+) 499 0,48 (+) 0,88 (+) 13 0,41 (+) 0,70 (+) 15 0,45 (+) 0, 81 (+) Kiểm tra đáp ứng kháng thể ngày 21 sau công cho thấy hiệu giá kháng thể phản ánh thơng qua số OD có khác rõ so với thời điểm trước công Chỉ số OD với mẫu huyết lô miễn dịch tăng từ (0,28 – 0,48) đến (0,70 – 0,88) hai dê lô đối chứng cho kết ELISA chuyển dương IV Thảo luận kết Bệnh đậu dê bệnh gây thiệt hai lớn cho nghề chăn nuôi dê nước ta giới Bệnh khơng có thuốc trị đặc hiệu, phương pháp phòng trị tốt tiêm phòng vacxin kết hợp với vệ sinh phòng bệnh Hiện vacxin nhược độc vacxin vô hoạt đậu dê sản xuất sử dụng, nhiên so sánh hai loại vacxin cho thấy vacxin vơ hoạt cịn nhiều hạn chế, đặc biệt khả kích thích đáp ứng miễn dịch độ dài miễn dịch (Sadri et al, 2010) Thực tế thử nghiệm vacxin nhược độc đậu dê Công ty NAVETCO sản xuất cho thấy vacxin an toàn đàn dê thử nghiệm với liều 10 liều liều sử dụng Vacxin cho thấy cho đáp ứng kháng thể tốt với tỷ lệ 96,3% dê tiêm vacxin có đáp ứng kháng thể tỷ lệ bảo hộ 100% chọn ngẫu nhiên đàn dê tiêm vacxin để thử thách cường độc, với virut đậu dê cường độc phân lập thực địa chủng NAVET-ĐD06/DN Kiểm tra đáp ứng kháng thể dê sau 21 ngày cơng cường độc cho thấy có khác rõ rệt so với thời điểm trước công, dê tiêm vacxin khỏe mạnh phát triển bình thường Việc hình thành trạng thái miễn dịch sau tiêm vacxin, giúp dê phòng chống bệnh đậu dê virut đậu dê cường độc gây ra, tiếp xúc với mầm bệnh tạo phản ứng miễn dịch thứ phát mà hiệu hiệu giá kháng thể có huyết dê miễn dịch cao Virutt đậu kích thích sản sinh miễn dịch dịch thể miễn dịch tế bào (Pandy & cs.,1969; Negi & cs., 1988; Deshmukh & Gujar, 1992- daãn theo Animal Health Disease Cards- www.FAO.org) người ta sử dụng phản ứng trung hòa ELISA để đánh giá đáp ứng miễn dịch dịch thể sau tiêm vacxin đậu dê (Martrenchar et al.,1997; Sharma et al., 1988 Hong Tian et al., 2010) Trong thí nghiệm sử dụng kỹ thuật ELISA để đánh giá đáp ứng kháng thể sau tiêm vacxin kết hợp với thử thách cường độc Kết cho thấy có mối liên hệ kết ELISA khả bảo hộ dê công cường độc, với kết ELISA ngưỡng OD ≥ 0,2 dê tiêm vacxin bảo hộ công cường độc Ở nghiên cứu trước đây, tương quan phản ứng trung hịa cơng độc trực tiếp chứng minh với ngưỡng bảo hộ huyết dê đạt hiệu giá kháng thể trung hòa ≥ 1/10 (Tran Xuan Hanh et al, 2008) Từ kết thu cho thấy vacxin nhược độc đậu dê thử nghiệm cho kết an tồn có hiệu phịng bệnh tốt Có thể sử dụng kỹ thuật ELISA để đánh giá đáp ứng miễn dịch, giám sát đàn dê ni sau tiêm phịng - - - Tài liệu tham khảo Animal Health Diseas Cards Overview – Sheep and goat pox www.fao.org Carn.V.M (1993) Review- Control of capripoxvirus infections Vaccine, 11 (13):12751279 Hong Tian, Yan Chen, Jinyan Wu, Youjun Shang, Xiangtao Liu (2010) Serodiagnosis of sheeppox and goatpox using an indirect ELISA based on synthetic peptide targeting for the major antigen P32 Virology Journal, 7:245 Martrenchar, A; N Zoyem; A Diallo (1997) Experimental study of a mixed vaccine against peste des petits ruminants and capripox infection in goats in northern Cameroon Small Ruminant Research, 26: 39-44 OIE – Disease Information, 13 May 2005, Vol 18 –No.19 Sharma B, Negi BS, Yadav MP, Shankar H, Pandey AB (1988) Application of ELISA in the detection of goat pox antigen and antibodies Acta Viology, Jan 32 (1): 65-9 Trần Xuân Hạnh, Nguyễn Thị Lam Hương, Nguyễn Văn Dung, Đặng Hùng, Kim Văn Phúc.(2008) Bệnh đậu dê bước đầu nghiên cứu chế tạo vacxin phịng bệnh Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y: XV (6) 18 -27 .. .Trong viết này, chúng tơi xin trình bày kết đánh giá hiệu phòng bệnh vacxin thực tế sản xuất, nhằm cung cấp thêm sở khoa học để đưa vacxin vào sử dụng tiêm phòng phòng bệnh đậu dê sản xuất. .. có dê thử nghiệm bị chết bị bệnh đậu dê Tất dê tiêm vacxin khỏe mạnh, ăn uống bình thường Kết cho thấy vắc xin nhược độc đậu dê có tính an tồn tiêm chủng cho đàn dê khảo nghiệm 3.2 Kết hiệu lực. .. nghiệm vacxin nhược độc đậu dê Cơng ty NAVETCO sản xuất cho thấy vacxin an tồn đàn dê thử nghiệm với liều 10 liều liều sử dụng Vacxin cho thấy cho đáp ứng kháng thể tốt với tỷ lệ 96,3% dê tiêm vacxin