Nghiên cứu khả năng đáp ứng phát sinh hình thái của lát mỏng tế bào phát hoa đồng tiền trong điều kiện in vitro

Nghiên cứu khả năng đáp ứng phát sinh hình thái của lát mỏng tế bào phát hoa đồng tiền trong điều kiện in vitro Nghiên cứu khả năng đáp ứng phát sinh hình thái của lát mỏng tế bào phát hoa đồng tiền trong điều kiện in vitro luận văn tốt nghiệp thạc sĩ

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC KỸ THUẬT CƠNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH KHOA MƠI TRƯỜNG VÀ CÔNG NGHỆ SINH HỌC o0o - ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG ĐÁP ỨNG PHÁT SINH HÌNH THÁI CỦA LÁT MỎNG TẾ BÀO PHÁT HOA ĐỒNG TIỀN (Gerbera jamesonii) TRONG ĐIỀU KIỆN IN VITRO Chuyên ngành: Công Nghệ Sinh Học Mã ngành : 111 GVHD: CN BÙI VĂN THẾ VINH SVTH : ĐẶNG LÂM TRÚC MSSV : 105111070 Tp Hồ Chí Minh, tháng 07 năm 2009 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC KTCN TPHCM CỘNG HOÀ Xà HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM ĐỘC LẬP - TỰ DO – HẠNH PHÚC NHIỆM VỤ ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP KHOA : MÔI TRƯỜNG & CNSH BỘ MÔN : CNSH HỌ VÀ TÊN : ĐẶNG LÂM TRÚC NGÀNH : CÔNG NGHỆ SINH HỌC MSSV : 105111070 LỚP : 05DSH Đầu đề Đồ án tốt nghiệp: “Nghiên cứu khả đáp ứng phát sinh hình thái lát mỏng tế bào phát hoa đồng tiền (Gerbera jamesonii) điều kiện in vitro” Nhiệm vụ (yêu cầu nội dung số liệu ban đầu): ™ Khảo sát thời gian khử trùng mẫu cấy dung dịch Javel ™ Khảo sát ảnh hưởng BA lên phát sinh hình thái mẫu cấy phát hoa Đồng tiền ™ Khảo sát ảnh hưởng NAA lên phát sinh hình thái mẫu cấy phát hoa Đồng tiền ™ Khảo sát ảnh hưởng BA kết hợp NAA lên khả tái sinh chồi Ngày giao Đồ án tốt nghiệp: 01/04/2009 Ngày hoàn thành nhiệm vụ: 24/06/2009 Họ tên người hướng dẫn Phần hướng dẫn CN Bùi Văn Thế Vinh Toàn Nội dung yêu cầu LVTN thông qua Bộ mơn Ngày tháng năm 2009 CHỦ NHIỆM BỘ MƠN (Ký ghi rõ họ tên) PHẦN DÀNH CHO KHOA, BỘ MÔN Người duyệt (chấm sơ bộ): ……………………… Đơn vị:…………………………………………… Ngày bảo vệ:…………………………………… Điểm tổng kết:…………………………………… Nơi lưu trữ Đồ án tốt nghiệp: NGƯỜI HƯỚNG DẪN CHÍNH (Ký ghi rõ họ tên) Lời cảm ơn Cuối đặt chân vào trường Đại học, khơng mong ước thân mà cịn điều kỳ vọng người thân Và mục tiêu đàn anh làm luận văn tốt nghiệp Ngay lúc đây, cịn “sợ” khơng biết có bảo vệ đề tài hay khơng? Đơn giản, khả làm luận văn tệ … Câu viết xin bỏ ngõ, thay vào cố gắng – cố gắng Đề tài ??? Tơi chưa biết xác ln ao ước làm luận văn Nhưng thật may mắn, Đại học năm thứ tơi chọn cho hướng học môn Công nghệ thực vật Biết Thầy, người truyền đạt kiến thức khơi dậy niềm u thích từ lâu thân Khơng biết nói hơn, người học trị xin chân thành cảm ơn thầy –Tiến sĩ Dương Tấn Nhựt, chưa lần gọi trực tiếp thầy, tơi ln mong mỏi điều Vì thầy người khơi dậy niềm đam mê nghiên cứu khoa học từ người học trò mà lẽ u thích Cơng nghệ thơng tin… Chính nhờ thầy mà đây, em may mắn học hỏi từ người học trò Em xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến Thầy – Bùi Văn Thế Vinh, người dẫn dắt hướng dẫn tận tình khơng cho em mà cịn người học trị khác Để viết luận văn này, em xin cảm ơn Ban lãnh đạo trường Đại học Kỹ Tthuật Công Nghệ thầy cô phịng thí nghiệm tạo điều kiện để em hồn thành đề tài Tơi cám ơn bạn, người gắn bó tơi tháng vừa qua phịng thí nghiệm, kỷ niệm hạnh phúc : Hiền, Xuân, Quyên cám ơn bạn Ngoài ra, người ủng hộ lúc chán nản sau gặp nhiều thất bại làm luận văn, Phúc, người bạn thân tơi Vẫn cịn nhiều lời cảm ơn mà tơi thực muốn gủi đến bạn Trinh, Cẩm, Khánh Linh thầy Thành nữa, nhờ thầy mà khơng khí phịng thí nghiệm thực vật “bùn tẻ” trở nên vui nhộn ấm áp Cuối cùng, xin cảm ơn ba mẹ nhiều lắm, điều mà có lẽ chưa nói : yêu ba mẹ nhóc “lớn xác”- nhỏ em người bạn tơi Đồng Nai, Biên Hịa ngày 29 tháng năm 2009 Đặng Lâm Trúc MỤC LỤC Lời cảm ơn Mục lục Danh mục chữ viết tắt i Danh mục bảng ii Danh mục hình iii Phần 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích, nội dung nghiên cứu 1.2.1 Mục đích 1.2.2 .Nội dung Phần 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Khái quát kỹ thuật vi nhân giống 2.1.1 Khái niệm .2 2.1.2 Ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô .2 2.1.3 Các bước nhân giống in vitro 2.1.4 Quá trình tái sinh quan vi nhân giống in vitro 2.1.4.1 Sự hình thành chồi bất định 2.1.4.2 Sự hình thành rễ bất định 2.1.5 Các yếu tố ảnh hưởng đến phát sinh hình thái in vitro 11 2.1.5.1 Ảnh hưởng mẫu cấy 11 2.1.5.2 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng phát triển thực vật 14 2.1.6 Các chất khử trùng hóa học dùng nuôi cấy mô 15 2.2 Kỹ thuật nuôi cấy lớp mỏng tế bào 17 2.2.1 Giới thiệu 17 2.2.2 Định nghĩa hệ thống lớp mỏng tế bào 17 2.2.3 Một số nghiên cứu ứng dụng phương pháp nuôi cấy lớp mỏng tế bào 19 2.3 Giới thiệu chung hoa Đồng tiền 21 2.3.1 Các đặc điểm quan trọng hoa Đồng tiền 22 2.3.1.1 Vị trí phân loại 22 2.3.1.2 Đặc điểm hình thái 22 2.3.1.3 Điều kiện trồng trọt 23 2.3.2 Một số phương pháp vi nhân giống hoa Đồng tiền 25 Phần 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 3.1 Vật liệu 30 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 30 3.1.2 Mẫu cấy 30 3.1.3 Các loại môi trường 30 3.1.4 Điều kiện nuôi cấy 30 3.2 Phương pháp thí nghiệm 31 3.2.1 Khử trùng mẫu 31 3.2.2 Bố trí thí nghiệm 32 3.2.2.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát thời gian khử trùng mẫu cấy dung dịch Javel 3.2.2.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng BA lên phát sinh hình thái mẫu cấy tTCL phát hoa Đồng tiền 32 3.2.2.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng NAA lên phát sinh hình thái mẫu cấy tTCL phát hoa Đồng tiền 33 3.2.2.4 Thí nghiệm 4: : Khảo sát ảnh hưởng BA kết hợp với NAA lên khả tái sinh chồi 34 3.2.3 Phân tích thống kê 34 Phần 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát thời gian khử trùng mẫu cấy dung dịch Javel 4.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng BA lên phát sinh hình thái mẫu cấy tTCL phát hoa Đồng tiền 38 4.3 Thí nghiệm 3: Mơi trường khảo sát ảnh hưởng NAA lên phát sinh hình thái mẫu cấy tTCL phát hoa Đồng tiền 41 4.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng BA kết hợp với NAA lên khả tái sinh chồi 44 Phần 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận 48 5.2 Đề Nghị 48 Phần : TÀI LIỆU THAM KHẢO 6.1 Tài liệu tham khảo nước .a 6.2 Tài liệu tham khảo nước .a e Danh mục chữ viết tắt f Danh mục chữ viết tắt ¾ MS : MS medium (Murashige Skoog, 1962) ¾ TCL : Thin cell layer ¾ tTCL : Transverse thin cell layer ¾ lTCL : Long thin cell layer ¾ ELS : Embro-like structure ¾ NAA : Naphthalene acetic acid ¾ BA : ¾ TDZ : 6-benzylladenine acid N-phenyl-N’-1,2,3-thidiazol-5-ylurea GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh e if # Đặng Lâm Trúc Khoa Môi trường & CNSH e Danh mục bảng f Danh mục bảng Bảng 3.1 Nồng độ Javel thời gian khử trùng mẫu cấy Bảng3 Môi trường khảo sát nồng độ BA ảnh hưởng đến phát sinh hình thái mẫu cấy tTCL phát hoa Đồng tiền Bảng 3.3 Môi trường khảo sát nồng độ NAA ảnh hưởng đến phát sinh hình thái mẫu cấy tTCL phát hoa Đồng tiền Bảng 3.4 Khảo sát nồng độ BA kết hợp với NAA đến ti sinh chồi mẫu cấy tTCL phát hoa Đồng tiền Bảng 4.1 Kết ảnh hưởng thời gian nồng độ Javel lên mẫu cấy tTCL phát hoa Đồng tiền Bảng 4.2 Kết ảnh hưởng BA lên phát sinh hình thái mẫu cấy tTCL phát hoa Đồng tiền Bảng 4.3 Kết ảnh hưởng NAA lên phát sinh hình thái mẫu cấy tTCL phát hoa Đồng tiền GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh e ii f #Đặng Lâm Trúc Khoa Môi trường & CNSH e Danh mục hình f Danh mục hình Hình 2.1 Mười hai lồi thuộc họ Cúc (Asteraceae), từ phân họ Asteroideae, Cichoriodeae Carduoideae Hình 2.2 Cây hoa Đồng tiền (Gerbera jamesonii) Hình 2.3 Một số lồi hoa Đồng tiền giới Hình 2.4 Cụm hoa đầu (B - C) hoa Đồng tiền Hình 4.1 Ảnh hưởng chất điều hòa tăng trưởng lên phát sinh hình thái tTCL phát hoa Đồng tiền (Gerbera jamesonii) GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh e iii f # Đặng Lâm Trúc Khoa MT & CNSH 05DSH e Phần – Mở đầu f Phần 1: MỞ ĐẦU GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh # Đặng Lâm Trúc Khoa Môi trường & CNSH e Phần – Kết Thảo luận f mg/l kinetin 0,2 mg/l cho tạo mơ sẹo (Nguyễn Đức Thành, 1983) Có số cơng trình nghiên cứu Libbenga Torrey, 1973 ; Simpson Torrey, 1977 mô rễ đậu nành, ghi nhận có tổng hợp DNA trước phân bào cần auxin cytokinin Nếu mơi trường có auxin, hàm lượng DNA ghi nhận không thay đổi Từ kết bảng 4.4 cho thấy, kết hợp BA NAA, sau tuần tất mẫu cấy hình thành mơ sẹo Khơng có hình thành chồi suốt q trình mơ sẹo phát triển Khi nồng độ auxin tăng nhận thấy trọng lượng tươi mô sẹo tăng lên, auxin kích thích mạnh phân chia tế bào tượng tầng không tác động mô phân sinh sơ cấp, nên auxin tác động lên tăng trưởng theo đường kính Sau thời gian ni cấy nồng độ auxin nội sinh từ từ tăng lên (Phan Hoàng Anh, 2000) Sau tuần, mẫu cấy tồn dạng mô sẹo, có màu xanh, khối rắn chắc, khơng có khả phát sinh mô quan Theo Tanimoto Shimomura (1996), mẫu cấy thân, auxin có tác dụng ức chế tạo chồi nồng độ thấp Khi dùng phát hoa Đồng tiền lượng auxin nội sinh có tác dụng tương tự Đó lí nồng độ auxin tăng (nồng độ NAA mg/l) mơ sẹo chuyển hóa sang vàng xanh Các kết thu từ thí nghiệm, cho dù tăng nồng độ BA lên cao (2 mg/l) giữ nồng độ NAA mức thấp trung bình (0,5 mg/l) tạo mơ sẹo Trái ngược với thí nghiệm làm trước đây, dùng nồng độ BA NAA trên, tạo chồi bất định cho kết cao (Gaspar cộng sự., 2003) với đối tượng mẫu Torenia Kết ghi nhận nhiều đối tượng Diospyros kati Thunb (Choi, 2001), cà chua Licopersicon esculentum L (Chaudary, 2001), hoa loa kèn Zantedeschia albomaculata (Chang, 2003), Crataeva adansonii (dc.) prodr (Sharma, 2003), khoai tây (Yasmin, 2003) Khi giữ mức NAA cố định 0,1 mg/l BA lên đến mg/l, mẫu cấy tạo mô sẹo sau tuần, nhiên sau mơ sẹo này, phía sát mặt thạch, khối mơ sẹo hình thành từ mơ sẹo cũ Mơ sẹo có màu xanh nhạt hơn, xốp GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh - 45 - # Đặng Lâm Trúc Khoa Môi trường & CNSH e Phần – Kết Thảo luận f Tiếp tục giữ NAA nồng độ cũ tăng hàm lượng BA đến mg/l, mẫu cấy tạo mơ sẹo, sau cảm ứng hình thành rễ Kết khác với thí nghiệm Barbosa (1993), cần từ 1-2 mg/l BA kết hợp NAA nồng độ 0,4 mg/l tạo chồi, với nguồn mẫu cụm hoa đầu Cũng mẫu cụm hoa phải dùng mg/l BAP tạo chồi, Henrique phải dùng từ 3-9 mg/l BAP Điều cho thấy, nguồn mẫu nồng độ khác để tạo chồi bất định hay rễ Qua thí nghiệm cho thấy, hiệu tác dụng chất điều hòa sinh trưởng phụ thuộc vào nồng độ chất nhiều Đồng thời, phân khác thực vật tuổi khác cảm ứng với chất điều hịa tăng trưởng khơng giống So với thí nghiệm khác thực hiện, nồng độ BA (0,5; 1; 1,5 mg/l) chưa thích hợp để cảm ứng mạnh, thúc đẩy chồi trực tiếp hay qua trung gian mô sẹo Đặc điểm TCL phát hoa “mỏng” có số lượng tế bào, nên lượng hormon nội sinh q khơng có, để với hormon ngoại sinh (BA) phát sinh quan Đồng thời điều kiện sinh thái yếu tố dinh dưỡng quan trọng, chất điều hòa sinh trường tăng cường q trình trao đổi chất mà khơng tham gia trực tiếp vào Như vậy, phối hợp cytokinin (BA) auxin (NAA) chưa đủ tạo nên mối quan hệ khăng khít để mẫu cấy phát sinh chồi Như nói thí nghiệm 2, sử dụng mẩu cấy phát hoa dạng tTCL, nên thiếu số lượng tế bào biểu bì, biểu bì (các chồi bất định thường phát sinh từ tế bào này, theo Joy IV Thorpe, 1999 Bùi Trang Việt, 2000) Đồng thời, phát hoa lấy phần cịn non tăng trưởng, tồn lượng auxin/cytolinin định, việc cảm ứng tạo chồi hay rễ tùy thuộc vào lượng cân hormon nội sinh Nên nguồn mẫu từ phát hoa tTCL khơng thích hợp phát triển tạo chồi dùng chất BA để kích thích Cho dù BA dùng riêng lẽ hay kết hợp với NAA mẫu cấy hình thành mô sẹo suốt thời gian khảo sát GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh - 46 - # Đặng Lâm Trúc Khoa Môi trường & CNSH e Phần – Kết luận kiến nghị f Phần 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ GVHD: CN Bùi V n Th Vinh # Đặng Lâm Trúc Khoa Môi trường & CNSH e Phần – Kết luận kiến nghị f 5.1 Kết luận Nghiên cứu ảnh hưởng chất điều hòa tăng trưởng lên mẫu cấy tế bào lát mỏng từ phát hoa Đồng tiền nhằm tạo thêm phương pháp ưu việt kỹ thuật vi nhân giống Với kỹ thật việc tái sinh từ phận hồn tồn Qua q trình tiến hành thí nghiệm lát mỏng tế bào phát hoa từ hoa Đồng tiền rút kết luận sau: Vấn đề khó khăn lớn bắt đầu tiến hành nuôi cấy in vitro phát hoa Đồng tiền tạo nguồn mẫu cấy vơ trùng Tồn Đồng tiền lớp lông tơ mịn, nơi tập trung nhiều bụi bẩn vi khuẩn, lớp lông ngăn cản dung dịch khử trùng tác động lên mẫu cấy Việc dùng Javel 5% bổ sung thêm Tween thời gian 10 phút tác nhân có hiệu mẫu cấy phát hoa Đồng tiền, với tỉ lệ sống sót cao 83.84% Quá trình phát sinh hình thái mẫu cấy tTCL chịu ảnh hưởng rấ lớn diện chất điểu hòa sinh trưởng thực vật bổ sung vào mơi trường ni cấy Trong thí nghiệm cho thấy hầu hết chất BA dùng riêng kẽ hay kết hợp tạo hình thái mô sẹo Do đặc điểm mỏng mẫu cấy nên mơi trường có ảnh hưởng lớn lên đáp ứng mẫu cấy, tTCL phát hoa nguồn mẫu cấy nhạy cảm với môi trường nuôi cấy dễ bị ngộ độc nồng độ hormon ngoại sinh cao Kiểu di truyền ảnh hưởng lớn đến khả tái sinh tTCL phát hoa tác dụng chất điều hòa tăng trưởng khác Trong trình phát sinh hình thái từ tTCL thân non, cảm ứng mơ sẹo q trình ưu tiên NAA với nồng độ 0,5 mg/l dùng riêng lẽ tạo mô sẹo bắn rễ thời gian tháng Sự kết hợp 0,1 mg/l NAA mg/l BA tạo mơ sẹo, sau phát sinh rễ sau tuần 5.2 Đề Nghị Do thời gian tiến hành thí nghiệm thiết bị sử dụng thí nghiệm có hạn nên tơi xin đưa số đề nghị để nghiên cứu hoàn thiện Khảo sát thêm yếu tố liên qua q trình khử trùng mẫu như: tuổi mơ cấy, thời điểm thu mẫu khử trùng nhằm nâng cao hiệu khử trùng khả tái GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh - 45 - # Đặng Lâm Trúc Khoa Môi trường & CNSH e Phần – Kết luận kiến nghị f sinh mẫu cấy Nghiên cứu thêm loại hóa chất chất khử trùng khác đưa mẫu từ bên vào Khảo sát thêm ảnh hưởng số chất điều hòa tăng trưởng lên khả phát sinh hình thái khả tái sinh chồi mẫu cấy TCL Khảo sát khả hình thành chồi TCL cắt từ phận khác hoa Đồng tiền Sử dụng hai dạng lTCL tTCL mẫu phát hoa để từ thấy hiệu dạng TCL Giải phẫu hình thái mẫu cấy TCL để nghiên cứu thay đổi mô học bên mẫu cấy theo thời gian GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh - 46 - # Đặng Lâm Trúc Khoa Môi trường & CNSH e Ph n – Tài li u tham kh o f Phần 6: TÀI LIỆU THAM KHẢO GVHD: CN Bùi V n Th Vinh # Đặng Lâm Trúc Khoa Môi trường & CNSH e Phần – Tài liệu tham khảo f 6.1 Tài liệu tham khảo nước Bùi Trang Việt (2000) Sinh lý thực vật đại cương, phần II – Phát triển Nhà xuất Đại học Quốc gia TP HCM Dương Công Kiên (2002) Nuôi cấy mô thực vật, tập Nhà xuất Đại học Quốc gia TP HCM Nguyễn Đức Lượng Lê Thị Thủy Tiên (2002) Công nghệ tế bào Nhà xuất Đại học Quốc gia TP HCM Võ Thị Bạch Mai (2004) Sự phát triển chồi rễ Nhà xuất Đại học Quốc gia TP HCM Kỹ thuật trồng hoa Đồng tiền, Cúc, Layon (2005) Bộ nông nghiệp phát triển nông thôn Trung tâm khuyến nông quốc gia Viện nghiên cứu rau Nhà xuất Nông nghiệp Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh, Hoàng Thị Nga, Nguyễn Thị Phương Hoa (2002) Nghiên cứu quy trình nhân nhanh hoa Đồng tiền Báo cáo tổng kết đề tài, 2002 Nguyễn Thị Huyền – Nghiên cứu nhan nhanh giống hoa Đồng tiền phương pháp nuôi cấy mô 6.2 Tài liệu tham khảo nước Ahn IO, Bui VL, Gendy C and Tran Than Van K (1996) Direct embryogenesis through the thin cell layer culture system in Panax ginseng Plant Cell Tiss Org Ult 45: 237-243 Ammirato PV (1983) Embryogenesis In: Evans DA, Sharp WR, Ammirato PV and Yamada Y (Eds) Handbook of Plant Cell Culture, vol MacMillan Inc., New York, USA 82-123 Ahmin M., Vieth J., 1986 Production of haploid plants of Gerbera jamesonii by in vitro ovule culture Canadian Journal of Botany, 64: 2355 – 2357 GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh a # Đặng Lâm Trúc Khoa Môi trường & CNSH e Phần – Tài liệu tham khảo f Arello E.F., Pasqual M., Pinto J.F.B.P., Barbosa M.H.P., 1991 In vitro establishment of explants and seed-ling regeneration in Gerbera jamesonii H Bolus ex Hook P 56: 68-71 Aswath C., Choidhary M.L, 2001 Effect of cytokinin on proliferation of multiple shoots in gerbera (Gerbera jamesonii) Indian Journal of Horticilture, 58: 383-386 Aswath C., Choidhary M.L., 2002a Rapid plant regeneration from Gerbera jamesonii Bolus callus cultures Acta Botanica Croatica, 61: 125-134 Barbosa M.H.P., Pinto J.F.B.P., Pipnto C.A.B.P., 1994 In vitro propagation of Gerbera jamesonii Bolus ex Hook cv April Bloesem using young captilum Revista Ceres, 41: 386-395 Bremer K 1994: Asteraceae: cladistics and classification Timber Press: Portland, Oregon Chenna Reddy Aswath, Mewa Lal Choudhary (2002) Rapid plant regeneration from Gerbera jamesonii Bollus callus cultures Division of Omamental Crops, Indian Institute of Horticultural Research, Bangalore 560089, India Chien-young Chu and Min-chang Huang (1983) in vitro formation of Gerbera (Gerbera hybrida Hort.) Plantlets through Excised Scape Culture Department of Horticiture, National Chung Hsing University, Taiwan, Republic of China J.K.Kanwar, S Kumar – In vitro propagation of Gerbera – A Review Department of Biotechnology, University of Horticulture and Forestry, Solan, Indian Hansen, Hans V - A taxonomic revision of the genus Gerbera (Compositae, Mutisieae) sections Gerbera, Parva, Piloselloides (in Africa), and Lasiopus (Opera botanica - No 78; 1985) - ISBN 8788702049 Nesom, G.L 2004 Response to "The Gerbera complex (Asteraceae, Mutisieae): to split or not to split" by Liliana Katinas Sida 21:941-942 GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh b # Đặng Lâm Trúc Khoa Môi trường & CNSH e Phần – Tài liệu tham khảo f Nopmanee topoonyanont, Rungsima Ampawan and Pierre C Debergh (1999) Bushiness in Gerbera jamesonii: Abnormal shoot development during micropropagation Faculty of Science, Maejo University, Sansai, Chiangmai 50290, Thailand Pumima Tyagi and S L Kothari (2004) Rapid in vitro regeneration of Gerbera jamesonii from different explants Indian Jourmal of Biotechnology Vol 3, October 2004, pp 584-588 R.A.T.D Ranasinghe, A.G.N.I Abayagunawardana – In Vitro flower induction in Gerbera (Gerbera jamesonii Adlam) Seifeldin Ali Mohammed and Mustafa Ercan Ozzambak (2007) In vitro formation of Gerbera (Gerbera jamesonii Bollus) plantlets from capitulum explants Department of Horticulture, Faculty of Agriculture, University of ege, 35 iamir, Turkey Teresa Orlikowska, Elzbieta Nowak, Agnieszka Marasek, Danuta Kucharska (1999) Effects of growth regulators and incubation period in vitro regeneration of adventitious shoots from Gerbera petioles, Plant Cell Tissue and Organ Culture V Nagaraju, G.S.L.Srinivas and G.Lakshmi Sita (1998) Agrobacteriummediiated genetic transformation in Gerbera hybrida Current science, Vol.74, No.7, 10 April 1998 GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh c # Đặng Lâm Trúc Khoa Môi trường & CNSH e Phụ lục f PHỤ LỤC ™ Thành phần mơi trường khóang MS (Murashige and Skoog, 1962) Khoáng đa lượng mg/l NH4NO3 1.650 KNO3 1.900 CaCl2.2H2O 440 MgSO4.7H2O 370 KH2PO4 170 Khoáng vi lượng mg/l MnSO4.4H2O 22.3 ZnSO4.7H2O 8.6 H3BO3 6.2 KI 0.83 Na2MoO4.2H2O 0.25 CuSO4.5H2O 0.025 CoCl2.6H2O 0.025 Na2.EDTA 37.3 FeSO4.7H2O 27.8 GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh # Đặng Lâm Trúc Khoa Môi trường & CNSH e Phụ lục f Vitamin chất hữu khác mg/l Myo-Inositol 100 Thiamin (B1) 0.1 Nicotinic acid 0.5 Vitamin chất hữu mg/l khác Myo-Inositol 100 Thiamin (B1) 0.1 Nicotinic acid 0.5 Pyridoxine HCl 0.5 Glycine ™ Xử lý thống kê Statgraphics ¾ So sánh khối lượng mơ sẹo sau tuần Analysis of Variance for Khoi luong mo seo - Type III Sums of Squares Source Sum of Df Mean FPSquares Square Ratio Value MAIN EFFECTS A:Moi truong 0.000168 0.000056 12.44 0.0022 RESIDUAL 0.000036 0.0000045 TOTAL 0.000204 11 (CORRECTED) All F-ratios are based on the residual mean square error Table of Least Squares Means for Khoi luong mo seo with 95.0 Percent Confidence Intervals Stnd Lower Upper Level Count Mean Error Limit Limit GRAND 12 0.149 MEAN Moi truong A1 0.145 0.00122474 0.142176 0.147824 A2 0.147 0.00122474 0.144176 0.149824 A3 0.149 0.00122474 0.146176 0.151824 A4 0.155 0.00122474 0.152176 0.157824 GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh # Đặng Lâm Trúc Khoa Môi trường & CNSH e Phụ lục f Multiple Range Tests for Khoi luong mo seo by Moi truong Method: 95.0 percent LSD Moi Count LS LS Sigma Homogeneous truong Mean Groups X A1 0.145 0.00122474 XX A2 0.147 0.00122474 X A3 0.149 0.00122474 X A4 0.155 0.00122474 Contrast Sig Differenc +/- Limits e A1 - A2 -0.002 0.00399413 A1 - A3 * -0.004 0.00399413 A1 - A4 * -0.01 0.00399413 A2 - A3 -0.002 0.00399413 A2 - A4 * -0.008 0.00399413 A3 - A4 * -0.006 0.00399413 * denotes a statistically significant difference ¾ So sánh khối lượng mô sẹo sau tuần Analysis of Variance for Khoi luong mo seo - Type III Sums of Squares Source Sum of Df Mean F-Ratio P-Value Squares Square MAIN EFFECTS A:Moi truong 1.42228 0.474095 90303.76 0.0000 RESIDUAL 0.000042 0.00000525 TOTAL 1.42233 11 (CORRECTED) All F-ratios are based on the residual mean square error Table of Least Squares Means for Khoi luong mo seo with 95.0 Percent Confidence Intervals Stnd Lower Upper Level Count Mean Error Limit Limit GRAND 12 0.57075 MEAN Moi truong A1 0.164 0.00132288 0.160949 0.167051 A2 0.325 0.00132288 0.321949 0.328051 A3 0.764 0.00132288 0.760949 0.767051 A4 1.03 0.00132288 1.02695 1.03305 GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh # Đặng Lâm Trúc Khoa Môi trường & CNSH e Phụ lục f Multiple Range Tests for Khoi luong mo seo by Moi truong Method: 95.0 percent LSD Moi Count LS LS Sigma Homogeneous truong Mean Groups X A1 0.164 0.00132288 X A2 0.325 0.00132288 X A3 0.764 0.00132288 X A4 1.03 0.00132288 Contrast Sig Differen +/- Limits ce A1 - A2 * -0.161 0.00431415 A1 - A3 * -0.6 0.00431415 A1 - A4 * -0.866 0.00431415 A2 - A3 * -0.439 0.00431415 A2 - A4 * -0.705 0.00431415 A3 - A4 * -0.266 0.00431415 * denotes a statistically significant difference ¾ So sánh khối lượng mơ sẹo sau tuần Analysis of Variance for Khoi luong mo seo - Type III Sums of Squares Source Sum of Df Mean Square F-Ratio P-Value Squares MAIN EFFECTS A:Moi Truong 2.4826 0.827535 132405.56 0.0000 RESIDUAL 0.00005 0.00000625 TOTAL 2.48265 11 (CORRECTED) All F-ratios are based on the residual mean square error Table of Least Squares Means for Khoi luong mo seo with 95.0 Percent Confidence Intervals Stnd Lower Upper Level Count Mean Error Limit Limit GRAND 12 0.76125 MEAN Moi Truong A1 0.171 0.00144338 0.167672 0.174328 A2 0.558 0.00144338 0.554672 0.561328 A3 0.91 0.00144338 0.906672 0.913328 GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh # Đặng Lâm Trúc Khoa Môi trường & CNSH e Phụ lục f A4 1.406 0.00144338 1.40267 1.40933 Multiple Range Tests for Khoi luong mo seo by Moi Truong Method: 95.0 percent LSD Count LS LS Sigma Homogeneous Moi Truong Mean Groups A1 0.171 0.00144338 X X A2 0.558 0.00144338 X A3 0.91 0.00144338 X A4 1.406 0.00144338 Contrast Sig Differenc +/- Limits e A1 - A2 * -0.387 0.00470712 A1 - A3 * -0.739 0.00470712 A1 - A4 * -1.235 0.00470712 A2 - A3 * -0.352 0.00470712 A2 - A4 * -0.848 0.00470712 A3 - A4 * -0.496 0.00470712 * denotes a statistically significant difference GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh # Đặng Lâm Trúc Khoa Môi trường & CNSH ... lớn đồng từ mẫu ban đầu chồi đỉnh, cuống lá, mặt lá, rễ, đế hoa, cánh hoa Đề tài ? ?Nghiên cứu khả đáp ứng phát sinh hình thái lát mỏng tế bào phát hoa Đồng tiền (Gerbera jamesonii) điều kiện in. .. hưởng BA lên phát sinh hình thái mẫu cấy phát hoa Đồng tiền ™ Khảo sát ảnh hưởng NAA lên phát sinh hình thái mẫu cấy phát hoa Đồng tiền ™ Khảo sát ảnh hưởng BA kết hợp NAA lên khả tái sinh chồi Ngày... Đồng tiền với kỹ thuật khác nghiên cứu thành cơng 1.2 Mục đích, nội dung nghiên cứu 1.2.1 Mục đích Bước đầu thực nghiên cứu khả đáp ứng phát sinh hình thái lát mỏng tế bào phát hoa Đồng tiền