LUẬN văn THẠC sĩ SINH học (FULL) tối ưu điều kiện tách chiết và làm giàu axit béo omega 3 và omega 6 từ sinh khối vi tảo biển dị dưỡng schizochytrium mangrovei PQ6 của việt nam

LỜI CẢM ƠN Để hồn thành luận văn tốt nghiệp này, tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS TS Đặng Diễm Hồng, Trưởng Phịng Cơng nghệ Tảo - Viện Cơng nghệ Sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam bảo tận tình suốt thời gian qua Tôi xin chân thành biết ơn giúp đỡ to lớn q báu Tơi muốn gửi lời cảm ơn đến Ban Lãnh đạo Viện Công nghệ Sinh học, Ban lãnh đạo Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật, Ban giám hiệu Trường Đại học Thái Nguyên, thầy cô giáo tham gia giảng dạy tạo điều kiện giúp đỡ, truyền đạt kiến thức cho tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Bên cạnh đó, tơi xin cảm ơn anh chị, bạn đồng nghiệp phịng Cơng nghệ Tảo đóng góp ý kiến giúp đỡ tơi hồn chỉnh số liệu luận văn Cuối cùng, tơi xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè người thân bên cạnh chia sẻ, động viên, giúp đỡ tạo điều kiện tốt cho tơi học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn Hà Nội, ngày tháng Học viên cao học năm LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu luận văn hoàn toàn trung thực Mọi giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Học viên cao học Luận văn thạc sĩ sinh học MỤC LỤC MỤC LỤC ……………………………………………………………………… … i DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT…………………………………… …… iv DANH MỤC BẢNG………………………………………………………….… v DANH MỤC HÌNH…………………………………………………………… …vi MỞ ĐẦU……………………………………………………………………………1 CHƯƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU………………………………………… 1.1 Giới thiệu PUFA………………………………………………….………3 1.2 Vai trò ứng dụng PUFA…………………………… ………… … 1.2.1 Vai trò PUFAs sức khoẻ người 1.2.2 Vai trò PUFAs nuôi trồng thủy sản 1.3 Nguồn cung cấp PUFA 1.3.1 Nguồn gốc từ thực vật 1.3.2 Nguồn gốc từ động vật 1.3.3 Nguồn gốc từ vi tảo .9 1.4 Các nghiên cứu PUFA từ vi tảo biển ……………………………….…11 1.4.1 Con đường tổng hợp PUFA vi tảo………………………….…11 1.4.2 PUFAs từ VTB quang tự dưỡng…………………………… …13 1.4.3 PUFAs từ vi tảo biển dị dưỡng………………………….…….…14 1.5 Vi tảo biển dị dưỡng Schizochytrium………………………………… …15 1.5.1 Giới thiệu chung tảo di dưỡng Schizochytrium……………….….15 1.5.1.1 Vị trí phân loại .15 1.5.1.2 Đặc điểm hình thái cấu trúc Schizochytrium mangrovei .15 1.5.1.3 Sản xuất DHA PUFAs từ vi tảo Schizochytrium khác… …16 1.6 Các phương pháp tách chiết yếu tố ảnh hưởng đến trình tách chiết PUFA ………………………………………………………………… … 17 1.6.1 Các phương pháp tách chiết yếu tố ảnh hưởng đến q trình tách chiết lipit tổng số (dầu thơ) từ sinh khối tảo…………………………… 17 1.6.2 Các phương pháp tách chiết yếu tố ảnh hưởng đến trình tách chiết FFA từ dầu thô………………………………………… …… …… 19 1.6.3.Các phương pháp tách chiết yếu tố ảnh hưởng đến trình tách chiết làm giàu axit béo omega-3 omega-6 từ hỗn hợp axit béo tự i Luận văn thạc sĩ sinh học do…………………………………………………………………………… … …19 1.7 Tình hình nghiên cứu PUFA nước giới…………… 21 i 1.7.1 Tình hình nghiên cứu PUFA giới………….…….…………21 1.7.2 Tình hình nghiên cứu PUFA Việt Nam………………………… 22 CHƯƠNG II: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU…… ……… 25 2.1 Vật liệu ……………………………………………………………… … 25 2.1.1 Chủng tảo điều kiện ni cấy…… ………………………… …25 2.1.2 Hóa chất thiết bị………………………………………………… 25 2.2 Phương pháp………………………………………………………… … 26 2.2.1.Tách chiết lipit 26 2.2.2 Tối ưu thông số q trình tách chiết lipit……….………….27 2.2.3 Tối ưu hóa qui trình tách chiết FFA từ dầu thơ ……………….… 27 2.2.3.1 Tối ưu nồng độ NaOH phản ứng thủy phân dầu thô… 27 2.2.3.2 Nghiên cứu làm giàu hỗn hợp dầu sinh học giàu axít béo omega- omega-6 từ hỗn hợp FFA phương pháp tạo phức với urê…… 28 2.2.4 Xác định số axit hỗn hợp FFA hỗn hợp axít béo omega-3 omega-6……………………………………………………………………… 29 2.2.5 Xác định số peroxyt hỗn hợp FFA hỗn hợp axít béo omega-3 omega-6…………………………………… ……………………….30 2.2.6 Phương pháp xác định thành phần axit béo……………………… 30 CHƯƠNG III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN ………………………………….32 3.1 Thành phần hàm lượng axít béo sinh khối chủng S mangrovei PQ6 nuôi cấy bình lên men 30 lít………………………………………… ….32 3.2 Ảnh hưởng tác nhân khác lên hiệu suất tách chiết lipit từ sinh khối chủng PQ6…………………………………………………………… 33 3.2.1 Ảnh hưởng số yếu tố khác đến trình tách chiết lipit……………………………… …………………………………………… 34 3.2.1.1 Ảnh hưởng dung môi tách chiết………………………… 34 3.2.1.2 Ảnh hưởng nhiệt độ…………………………………… … 34 3.2.1.3 Ảnh hưởng thời gian khuấy……………………………… 36 3.2.1.4 Ảnh hưởng chế độ khuấy…………………….…………… 36 3.2.1.5 Ảnh hưởng tỉ lệ dung môi sinh khối…………………….36 3.2.1.6 Ảnh hưởng số lần trích ly…………………………… ……37 3.2.1.7 Ảnh hưởng nhiệt độ sấy sinh khối………………………….37 3.2.1.8 Ảnh hưởng độ ẩm sinh khối……………………………… 38 3.2.2 Thành phần hàm lượng axít béo có lipit tổng số …… ….40 3.3 Tối ưu điều kiện thủy phân dầu thơ tảo phương pháp hóa học….41 3.3.1 Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ NaOH phản ứng xà phịng hóa………………………………………………………….…………… .41 3.3.2 Các tính chất hỗn hợp axit béo tự do………… …………… 42 3.3.3 Thành phần axit béo hỗn hợp axit béo tự thu sau phản ứng thủy phân dầu tảo thô…………………………………… …………… …43 3.4 Tối ưu q trình làm giàu hỗn hợp axít béo omega-3 omega-6 từ hỗn hợp FFA……………………………………………………………………… …46 3.4.1 Ảnh hưởng tỷ lệ hỗn hợp FFA: urê lên hiệu suất tạo phức hiệu suất tách PUFAs………………………………………………………………… 46 3.4.2 Ảnh hưởng tỷ lệ urê:cồn lên hiệu suất tạo phức hiệu suất tách PUFAs…………………………………………………………………………………… 47 3.4.3 Ảnh hưởng nhiệt độ kết tinh lên hiệu suất tạo phức hiệu suất tách PUFAs……………………………………………………………………… 48 3.5 Thành phần axít béo hỗn hợp axit béo omega omega thu từ dầu thô chủng PQ6………………………………………… ……………49 3.6 Bước đầu kiểm tra chất lượng dầu sinh học giàu axit béo omega-3 omega-6 thu sau trình làm giàu………………………….… … ….51 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ…………………………….…………………… 55 KẾT LUẬN……………………………………………………………………… 55 KIẾN NGHỊ……………………………………………………….………………56 TÀI LIỆU THAM KHẢO…………………………………………………….….57 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT TT Từ viết tắt Viết đầy đủ EPA Eicosapentaenoic axít DHA Docosahexaenoic axít DPA Docosapentaenoic axít ALA α-linolenic axít ARA Arachidonic axít AGL Gama linoleic axít DGLA VTB Vi tảo biển NTTS Nuôi trồng thủy sản 10 SKK Sinh khối khô 11 TFA Total fatty acids (axit béo tổng số) 12 FFA Free fatty acids (axit béo tự do) 13 PUFA Dihomo-gamma-linoleic axít Polyunsaturated fatty acid (axit béo khơng bão hịa đa nối đơi) 14 SFA 15 MUFA Saturated fatty acid (axit béo bão hòa) Monounsaturated fatty acids (axit béo khơng bão hịa nối đôi) 16 TAG Triacylglycerol 17 VSV Vi sinh vật 18 PCBs Polychlorinated biphenyls 19 HPLC High-pressure liquid chromatography (sắc khí lỏng cao áp) 20 TCVN Tiêu chuẩn Việt Nam DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 1.1 Hàm lượng axít béo omega-3 omega-6 có số loại dầu thực vật Bảng 1.2 Hàm lượng DHA EPA số loại cá Bảng 1.3 Một số sản phẩm thương mại có chứa EPA DHA có nguồn gốc từ vi tảo 11 Bảng 1.4 Sinh khối, lipit hàm lượng DHA thraustochytrids khác 17 Bảng 3.1 Thành phần axit béo SKK chủng PQ6 33 Bảng 3.2 Thành phần axit béo lipit tách chiết từ sinh khối chủng PQ6 40 Bảng 3.3 Một số tính chất dầu tảo sau phản ứng thủy phân phương pháp hóa học 43 Bảng 3.4 Thành phần axit béo hỗn hợp FFA thu nhận sau phản ứng thủy phân dầu tảo thô 44 Bảng 3.5 Thành phần axít béo hỗn hợp axit béo omega omega thu sau trình làm giàu Bảng 3.6 Kết phân tích tiêu hóa lý sản phẩm dầu sinh học giàu axit béo omega-3 omega-6 thu sau trình làm giàu v 50 51 DANH MỤC HÌNH Trang Hình 1.1 Quá trình tổng hợp PUFA (ω-3 ω-6) thể Hình 1.2 Sơ đồ tách chiết PUFA từ vi tảo lợi ích người 10 Con đường tổng hợp PUFA vi tảo Thraustochytrids Coccolithophores 12 Ảnh tế bào tảo Schizochytrium mangrovei PQ6 nuôi cấy hệ thống lên men 30 lít 25 Ảnh hưởng yếu tố khác đến hiệu suất tách chiết lipit từ SKK chủng PQ6 35 Hình 3.2 Quy trình tách lipit chủng PQ6 đạt hiệu suất 70% SKK 39 Hình 3.3 Ảnh minh họa trình tách lipit từ SKK chủng PQ6 đạt hiệu suất 70% SKK 39 Sắc ký đồ thành phần axit béo lipit tách chiết từ SKK chủng PQ6 40 Ảnh hưởng nồng độ NaOH lên hiệu suất thủy phân dầu tảo thô 42 Sắc ký đồ axít béo có hỗn hợp FFA sau phản ứng thủy phân dầu tảo thô thu từ sinh khối chủng PQ6 44 Q trình thích hợp cho thủy phân dầu tảo thơ điều kiện phịng thí nghiệm 45 Ảnh minh họa q trình thủy phân dầu tảo thơ qui mơ phịng thí nghiệm 46 Hiệu suất tạo phức hiệu suất tách PUFA tỷ lệ FFA: urea khác 47 Hiệu suất tạo phức hiệu suất tách PUFA tỷ lệ urea: cồn khác 48 Hình 1.3 Hình 2.1 Hình 3.1 Hình 3.4 Hình 3.5 Hình 3.6 Hình 3.7 Hình 3.8 Hình 3.9 Hình 3.10 10 Từ kết nghiên cứu thu qua nhiều đợt thí nghiệm khác nhau, chúng tơi tiến hành sơ đồ hóa q trình làm giàu hỗn hợp axít béo omega-3 omega-6 từ hỗn hợp FFA (hình 3.13) Hình ảnh minh họa cho tách chiết dầu sinh học giàu hỗn hợp axít béo omega-3 omega-6 (hình 3.14) Với q trình này, chúng tơi thu dầu sinh học đảm bảo chất lượng, với hàm lượng axít béo omega-3 omega-6 dầu tảo cao (đặc biệt hàm lượng DHA, DPA EPA chiếm 80% so với TFA) Urea+Ethanol FFA:Urea: Ethanol =1:4:36 20g FFA Hỗn hợp Axit béo urê Hỗn hợp phân hai lớp H2O n-hexan Na2SO4 khan Pha rắn SFA+MUFA+ur ê SFA+MUFA Lọc phân hai pha Pha lỏng PUFA H2O+urê Cô quay 80°C Cô quay 70°C n-hexan H2O 4°C, qua đêm PUFA+urê Ethanol H2O PUFA thô SFA+MU FA n-H2O Urê Cô quay 80°C PUFA+ n -hexan PUFA Urê+H2O n-hexan Na2SO4 khan H2O Urê+H2O Ethanol Hình 3.13 Quá trình tối ưu làm giàu hỗn hợp axít béo từ FFA Luận văn thạc sĩ sinh học Pha hỗn hợp urê: ethannol (1:10) máy khuấy từ gia nhiệt Cân 20g FFA 60 C Pha rắn (SFAs) Hòa tan phần rắn nước cất Tiến hành cất quay, thu SFAs Phân lớp phễu chiết hỗn hợp phân lớp Lớp chưa SFAs, lớp chứa nước Urea Hòa tan phần n hexan Thu phần chứa dung môi nHexan SFA Bổ sung hỗn hợp urê: ethannol vào FFA (1FFA:4 urê:36 Ethanol), khuấy từ 10 phút Để hỗn hợp tủ lạnh - 100C qua đêm Hỗn hợp sau để lạnh, phân thành lớp Phần lỏng chứa PUFA, phần rắn chứa SFAs MUFA Pha lỏng (PUFAs) Lọc hỗn hợp qua phễu chiết Cất quay PUFA Sau Cho PUFA vào cất quay thu dạng tinh thể (do chứa Urea) bình cầu Cơ quay thu PUFA lỏng (dầu sinh học) Thu lớp chứa PUFAs Hòa tan PUFAs tinh thể nước cất, n-Hexan Phân lớp phễu chiết Hỗn hợp phân thành lớp Luận văn thạc sĩ sinh họcbéo omega-3 omega-6 từ FFA Hình 3.14 Ảnh minh họa trình làm giàu hỗn hợp axít KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Từ kết nghiên cứu thu được trình bày xin rút số kết luận sau: Đã tối ưu điều kiện thích hợp cho q trình tách chiết lipit từ sinh khối khô chủng Schizochytrium mangrovei PQ6 cho hiệu suất tách lipit đạt 70% so với sinh khối khô gồm: sử dụng dung môi n-hexan; nhiệt độ khuấy - 70-75°C; thời gian - giờ; chế độ khuấy liên tục; tỉ lệ dung mơi: sinh khối: 10: 1; trích ly lần; nhiệt độ sấy sinh khối 80°C độ ẩm sinh khối 0% Thành phần axit béo lipit tách chiết có hàm lượng DHA (axit docosahexaenoic axit) 38,04% so với axit béo tổng số, đảm bảo làm nguyên liệu cho trình tách chiết thủy phân dầu Đã xác định điều kiện thích hợp cho q trình thủy phân dầu thơ để tạo hỗn hợp axit béo tự gồm: Nồng độ NaOH 1,8N (tương đương với 21,6g NaOH cho 100 g dầu tảo); Hỗn hợp axit béo tự thu có chất lượng bảo đảm để sản xuất dầu sinh học giàu axit béo omega-3 omega-6 như: có màu vàng đậm trong; số axit 136,5 mg KOH/g; số peroxyt 1,486 meq O2/kg; tổng số axit béo omega-3 omega-6, EPA, DHA 60,94%, 14,30% 22,43% so với axit béo tổng số, tương ứng Đã xác định điều kiện thích hợp cho trình làm giàu axit béo omega-3 omega-6 từ hỗn hợp axit béo tự gồm: Tỷ lệ axit béo tự do: urê 1: 4; Tỷ lệ urê: cồn 1: nhiệt độ kết tinh với urê 4°C Dầu sinh học giàu axit béo omega-3 omega-6 thu có màu vàng sẫm, trong; có số axit 143 mg KOH/g; số peroxyt 2,82 meq O2/kg; hàm lượng axít béo omega-3 omega-6, đặc biệt hàm lượng DHA, DPA (docosapentaenoic axit) EPA (eicosapentaenoic axit) chiếm 99,287 87,832 % so với axit béo tổng số, tương ứng; nguyên liệu tốt làm thực phẩm chức cho người động vật nuôi Luận văn thạc sĩ sinh học KIẾN NGHỊ Từ kết nghiên cứu thu được, chúng tơi xin có số kiến nghị cho nghiên cứu sau: Cần tiến hành khảo sát thêm số thông số khác trình thủy phân dầu như: nhiệt độ thời gian thủy phân Để khẳng định dầu sinh học giàu omega-3 omega-6 có chất lượng hoàn toàn bảo đảm làm nguyên liệu cho viên thực phẩm chức cần kiểm tra thêm số thông số khác hàm lượng urê; kim loại nặng dư dầu… Cần nghiên cứu thêm phương pháp khác cho việc tách chiết dầu sinh học giàu axit béo omega-3 omega-6 từ sinh khối vi tảo biển dị dưỡng nhằm đảm bảo độ ổn định khả oxy hóa chất lượng lâu dài sản phẩm TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Hoàng Thị Lan Anh, Nguyễn Thị Minh Thanh, Đặng Diễm Hồng (2009) Tách chiết tinh acid béo khơng bão hịa từ sinh khối vi tảo biển dị dưỡng Schizochytriummangrovei PQ6 Tạp chí cơng nghệ sinh học 7(3): 381387 Đặng Diễm Hồng, Hoàng Minh Hiền, Nguyễn Đình Hưng, Hồng Sỹ Nam, Hồng Lan Anh, Ngơ Hồi Thu, Đinh Khánh Chi (2007) Nghiên cứu trình sinh tổng hợp DHA từ loại vi tảo biển dị dưỡng Labyrinthula, Schizochytrium ứng dụng Tạp chí Khoa học Cơng nghệ 45: 144-154 Lại Mai Hương (2007) Tách axit béo bão hòa đa nối đôi từ dầu cá Ngừ phương pháp tạo phức với ure Tạp chí Hóa học 45 (4): 456-460 Nguyễn Văn Mùi (2001) ―Thực hành Hóa sinh học‖ NXB Khoa học kỹ thuật Mai Thị Diệu Thảo (2006) Nghiên cứu thu nhận docosahexaenoic acid (DHA) từ dầu cá basa Luận văn tốt nghiệp, Đại học Bách Khoa, TP HồChí Minh Bùi Quang Thuật (2009- 2010) Hồn thiện cơng nghệ sản xuất thử nghiệm hỗn hợp omega – omega – từ nhân hạt hồ đào Báo cáo dự án sản xuất thử nghiệm năm 2009 – 2010, 74 trang Tiêu chuẩn Việt Nam (2007) Dầu thực vật - Phương pháp xác định số axít, TCVN 6127: 2007 TÀI LIỆU TING ANH Aragóo C, Conceiỗóo LEC, Dinis MT, and Fyhn HJ (2004) Amino acid pools of rotifers and Artemia under different conditions: nutritional implications for fish larvae Aquaculture 234: 429– 445 Balasubramanian RK, Doan TTY, Obbard JP (2013) Factors affecting cellular lipid extraction from marine microalgae Chem Eng J 215–216: 929936 10 Becker W (2004) Microalgae for aquaculture The nutritional value of microalgae for aquaculture In Richmond, A (ed.), Handbook of microalgal culture 380– 391 11 Bligh EG and Dyer WJ (1959) A rapid method of total lipid extraction and purification Can J Biochem Physiol, 37: 911-917 12 Bourre JM (2005) Where to find ω-3 fatty acids and how feeding animals with diet enriched in ω-3 fatty acids to increase nutritional value of derived products for human: What is actually useful? J Nutr Health Aging 9: 232– 242 13 British nutrition foundation (1992) In: Unsaturated fatty acids, nutritional and physiological significance The report of the British Nutrition Foundation's task force, Chapman and Hall, London, pp 152 14 Bumbak F, Cook S, Zachleder V, Hauser S, Kovar K (2011) Best practices in heterotrophic high-cell-density microalgal processes: Achievements, potential and possible limitations Appl Microbiol Biot 91: 31–46 15 Calder PC (2003) Long chain n-3 fatty acids and inflammation: potential application in surgical and trauma patients Brazillian J Med Biol Res 36: 433446 16 Cao XH, Li SY, Wang CL, Lu MF (2007) Potential use of the herbicide quizalofop-p-ethyl for eicosapentaenoic acid overproduction by the diatom Nitzschia laevis Chin J Biotechnol 23: 885–890 17 Chamberlain AHL (1980) Cytochemical and ultrastructural studie the cell wall of Thraustochytrium spp Botanica Marina: 669- 677 18 Chaturvedi R, Fujita Y (2006) Isolation of enhanced eicosapentaenoic acid producing mutants of Nannochloropsis oculata ST-6 using ethyl methane sulfonate induced mutagenesis techniques and their characterization at mRNA transcript level Phycol res 54: 208–219 19 Chi X, Zhang X, Guan X, Ding L, Li Y, Wang M, Lin H, Qin S (2008) Fatty acid biosynthesis in eukaryotic photosynthetic microalgae: Identification of a microsomal delta 12 desaturase in Chlamydomonas reinhardtii J Microbiol 46: 189–201 20 Cohen Z, Khozin-Goldberg I, Adlerstein D, Bigogno C (2000) The role of triacylglycerol as a reservoir of polyunsaturated fatty acids for the rapid production of chloroplastic lipids in certain microalgae Biochem soc trans 28: 740–743 21 Crawford MA (1993) The role of essential fatty acids in neural development: implications for phierinatal nutrition Am J Clin Nutr, 57(Suppl.): 703S– 710S 22 Darnoko1 D, Cheryan M (2000) Kinetics of Palm Oil Transesterification a Batch Reactor, University of Illinois, Department of Food Science and Human Nutrition, Agricultural Bioprocess Laboratory, Urbana, Illinois 61801 JAOCS, Vol 77, no 12 23 de Swaaf ME, Sijtsma L, Pronk JT (2003) High-cell-density fed-batch cultivation of the docosahexaenoic acid producing marine alga Crypthecodinium cohnii Biotechnol Bioeng 81: 666–672 24 Ding Y, Neo CM, Hu Y, Shi L, Ma C, Liu YJ (2012) Characterization of fatty acid composition from five perilla seed oils in China and its relationship to annual growth temperature J Med Plants Res 6(9): 1645-1651 25 Fedorova-Dahms I, Marone PA, Bailey-Hall E, Ryan AS (2011) Safety evaluation of Algal Oil from Schizochytrium sp Food Chem Toxicol 4:, 70–77 26 Fernandez FGA, Perez JAS, Sevilla JMF, Camacho FG, Grima EM (2000) Modeling of eicosapentaenoic acid (EPA) production from Phaeodactylum tricornutum cultures in tubular photobioreactors Effects of dilution rate, tube diameter, and solar irradiance Biotechnol Bioeng 68: 173–183 27 Ganuza E, Izquierdo MS (2007) Lipid accumulation in Schizochytrium G13/2S produced in continuous culture Appl Microbiol Biotechnol 76(5): 985-900 28 Grima E, Pérez J, Camacho F, Medina A, Giménez A, Alonso D (1995) The prodution of polyunsaturated fatty acids by microalgae: From strain selection to product purification Process Biotechnol 30: 711-719 29 Gu N, Lin Q, Li G, Tan Y, Huang L, Lin J (2012) Effect of salinity on growth, biochemical composition, and lipid productivity of Nannochloropsis oculata CS 179 Eng Life Sci 12: 631–637 30 Guihéneuf F, Mimouni V, Ulmann L, Tremblin G (2009) Combined effects of irradiance level and carbon source on fatty acid and lipid class composition in the microalga Pavlova lutheri commonly used in mariculture J Exp Mar Biol Ecol 369: 136–143 31 Guihéneuf F, Fouqueray M, Mimouni V, Ulmann L, Jacquette B, Tremblin G (2010) Effect of UV stress on the fatty acid and lipid class composition in two marine microalgae Pavlova lutheri (Pavlovophyceae) and Odontella aurita (Bacillariophyceae) J Appl Phycol 22: 629–638 32 Gupta A, Wilkens S, Adcock JL, Puri M, Barrow CJ (2013) Pollen baiting facilitates the isolation of marine thraustochytrids with potential in omega-3 and biodiesel production Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology 40(11): 1231-1240 33 Guschina IA, Harwood JL (2006) Lipids and lipid metabolism in eukaryotic algae Prog Lipid Res 45: 160–186 34 Haimeur A, Ulmann L, Mimouni V, Gueno F, Pineau-Vincent F, Meskini N, Tremblin G (2012) The role of Odontella aurita, a marine diatom rich in EPA, as a dietary supplement in dyslipidemia, platelet function and oxidative stress in high-fat fed rats Lipids Health Dis 11: 1–13 35 Haumann BF (1998) Alternative sourrces for n-3 fatty acids INFORM 9: 1108-1116 36 Hoffmann M, Marxen K, Schulz R, Vanselow KH (2010) TFA and EPA produtivities of Nannochloropsis salina influenced by temperture and nitrate stimuli in turbidostatic controlled experiments Mar Drugs 8(9): 2525–2545 37 Huang JZ, Aki T, Hachida K, Yokochi T, Kawamoto S, Shigeta S, Ono K, Suzuki O (2001) Profile of polyunsaturated fatty acids produced by Thraustochytrium sp KK17-3 J Am Oil Chem Soc 78: 605–610 38 Hu H, Gao K (2006) Response of growth and fatty acid compositions of Nannochloropsis sp to environmental factors under elevated CO2 concentration Biotechnol Lett 28: 987–992 39 Hu Q, Sommerfeld M, Jarvis E, Ghirardi M, Posewitz M, Seibert M, Darzins A (2008) Microalgal triacylglycerols as feedstocks for biofuel production: Perspectives and advances Plant J 54: 621–639 40 Iida I, Nakahara T, Yokochi T, Kamisaka Y, Yagi H, Yamaoka M, Suzuki M (1996) Improvement of docosahexaenoic acid production in a culture of Thraustochytrium aureum by medium optimization J Ferment Bioeng 81: 76– 78 41 Irianto A, Austin B (2002) Probiotics in aquaculture J Fish Dis, 25: 633– 642 42 Jasuja ND, Jain S, Joshi SC (2010) Microbial production of Docosahexaenoic acid (Ω-3 PUFA) and their role in human health Asian J Pharm Clin Res 3(4): 0974-2441 43 Kamlangdee N, and Fan KW (2003) Polyunsaturated fatty acids production by Schizochytrium sp isolated from mangrove Songklanakarin J Sci Technol 25 (5): 643- 650 44 Khairy HM, El-Sayed HS (2012) Effect of enriched Brachionus plicatilis and Artemia salina nauplii by microalga Tetraselmis chuii (Bütcher) grown on four different culture media on the growth and survival of Sparus aurata larvae Afr J Biotechnol 11(2): 399-415 45 Khozin-Goldberg I, Yu HZ, Adlerstein D, Didi-Cohen S, Heimer YM, Cohen Z (2000) Triacylglycerols of the red microalga Porphyridium cruentum can contribute to the biosynthesis of eukaryotic galactolipids Lipids 35: 881– 889 46 Khozin-Goldberg I, Iskandarov U, Cohen Z (2011) LC-PUFA from photosynthetic microalgae: Occurrence, biosynthesis, and prospects in biotechnology Appl Microbiol Biot 91: 905–915 47 Klinkesorn U (2004) Chemical transesterification of tune oil to enriched omega-3 polyunsaturated fatty acid Food Chem 87: 415-421 48 Lang I, Hodac L, Friedl T, Feussner I (2011) Fatty acid profiles and their distribution patterns in microalgae: A comprehensive analysis of more than 2000 strains from the SAG culture collection BMC Plant Biol 11: 1–16 49 Lin W, Wu FW, Yue L, Du QG, Tian L, Wang ZX (2014) Combination of Urea Complexation and Molecular Distillation to Purify DHA and EPA from Sardine Oil Ethyl Esters J Am Oil Chem Soc 91 (4) 687-695 50 Lunn J and Theobald HE (2003) The health effects of dietary unsaturated fatty acids Nutr Bull 31: 178–224 51 Martins DA, Custódio L, Barreira L, Pereira H, Ben-Hamadou R, Varela J, Abu-Salah KM (2013) Alternative sources of n-3 long-chain polyunsaturated fatty acids in marine microalgae Marine drug 11: 2259-2281 52 Medina AR, Giménez AG, Camacho FG, Pérez JAS, Grima EM, Gómez AC (1995) Concentration and purification of stearidonic, eicosapentaenoic, and docosahexaenoic acids from cod liver oil and the marine microalga Isochrysis galbana J Am Oil Chem Soc 22: 575-583 53 Mendes A, Da silva TL, Reis A (2007a) DHA concentration and purification from the marine heterotrophic microagal Crypthecodiniumcohnii CCMP 316 by winterization and urea complexation Food Technol Biotechnol 45(1): 38-44 54 Mendes A, Guerra P, Madeira V, Ruano F, da Silva TL, Reis A (2007b) Study of docosahexaenoic acid production by the heterotrophic microalga Crypthecodinium cohnii CCMP 316 using carob pulp as a promising carbon source World J Microb Biot 23: 1209–1215 55 Metz JG, Roessler P, Facciotti D, Levering C, Dittrich F, Lassner M, Valentine R, Lardizabal K, Domergue F, Yamada A (2001) Production of polyunsaturated fatty acids by polyketide synthases in both prokaryotes and eukaryotes Science 293: 290–293 56 Nakahara T, Yokochi T, Higashihara T, Tanaka S, Yaguchi T, Honda D (1996) Production of docosahexaenoic and docosapentaenoic acids by Schizochytrium sp isolated from Yap islands J Am Oil Chem Soc 73: 1421– 1426 57 Okuda T, Ando A, Sakuradani E (2013) Isolation and characterization of a docosahexaenoic acid-Phospholipids producing microorganism Crypthecodinium sp D31 J Am Oil Chem Soc 90: 1837-1844 58 Pahl SL, Lewis DM, Chen F, King KD (2010) Heterotrophic growth and nutritional aspects of the diatom Cyclotella cryptica (Bacillariophyceae): Effect of some environmental factors J Biosci Bioeng 109: 235–239 59 Patterson CA (2008) To learn more about Canada’s functional food and natural health products industry Agriculture and Agri- Food Canada AAFC NO 10074E, 1-4 60 Park HS, Kim JG, Cho MJ (1981) Chemical composition of Perilla frutescens Britton var crispa Decaisne cultivated in different areas of Korea: part Characteristics of lipid and fatty acid composition (in Korean) J Korean Agric Chem Soc 24: 224-229 61 Pond DW, Harris RP (1996) The lipid composition of the coccolithophore Emiliania huxleyi and its possible ecophysiological significance J Mar Biol Assoc UK 76: 579–594 62 Porter D (1990) PhylumLabyrinthulomycota In:Margulis L, Corliss JO, Melkonian M, Chapman DJ (eds) Handbook of Protoctista Jones and Bartlett, Boston 388– 398 63 Raghukumar S (2002) Ecology of the marine protists, the Labyrinthulomycetes (Thraustochytrids and labyrinthulids) Eur J Protistol 38: 127– 145 64 Raghukumar S (2008) Thraustochytrid marine protists: production of PUFAs and other emerging technologies Mar Biotechnol 10: 631-640 65 Ratledge C (1993) Single cell oils—Have they a biotechnological future Trends Biotechnol 11: 278–284 66 Rustan AC, Drevon CA (2005) Fatty Acids: Structures and Properties Encyclopedia of life sciences page 67 Sasso S, Pohnert G, Lohr M, Mittag M, Hertweck C (2012) Microalgae in the postgenomic era: A blooming reservoir for new natural products FEMS Microbiol Rev 36: 761–785 68 Sayanova O, Haslam RP, Caleron MV, Ruiz-Lopez N, Worthy C, Rooks P, Allen MJ, Napier JA (2011) Identification and functional characterisation of genes encoding the omega-3 polyunsaturated fatty acid biosynthetic pathway from the coccolithophore Emiliania huxleyi Phytochemistry 72: 594–600 69 Senanayake SPJN, Shahidi E (2000) Concentration of docosahexaenoic acid (DHA) from algal oil via urea complexation J Food Lipids (1): 51-61 70 Siri Tømmerås (2011) Fat, fatty acids and fat soluble nutrients in fillet of farmed and wild Atlantic salmon (Salmo salar L.) Master's Degree Thesis in Fisheries and Aquaculture, Norwegian college of fisheries - University of Tromsø 71 Shene C, Leyton A, Esparza Y, Flores L, Quilodran B, Hinzpeter I, Rubilar M (2010) Microbial oils and fatty acids: Effect of carbon source on docosahexaenoic acid (C22:6 n-3, DHA) production by thraustochytrid strains J Soil Sci Plant Nutr 10: 207–216 72 Suman K, Kiran T, Devi Sarma NSUK (2012) Culture medium optimization and lipid profiling of Cylindrotheca, a lipid- and polyunsaturated fatty acid-rich pennate diatom and potential source of eicosapentaenoic acid Bot Mar 55: 289–299 73 Thompson GA (1996) Lipids and membrane function in green algae Lipids Lipid Metab 1302: 17–45 74 Tonon T, Harvey D, Larson TR, Graham IA (2002) Long chain polyunsaturated fatty acid production and partitioning to triacylglycerols in four microalgae Phytochemistry 61: 15–24 75 Tsamouris G, Hatziantoniou S, Demetzos C (2002) analysis of walnut oil (Juglans regiaL.), Z Naturforsch 57: 51-56 76 Vingrys A (2001) The role of omega-3, polyunsaturated fatty acids in retinol function J Food sci technology 193-217 77 Wanasundara U, Shahidi F (1999) Concentration of omega-3 polyunsaturated fatty acids of seal blubber oil by urea complexation: Optimization of reaction conditions Food Chem 65: 41-49 78 Ward OP, Singh A (2005) Omega-3/6 fatty acids: Alternative sources of production Process Biochem 40: 3627–3652 79 Wynn JP, Ratledge C (2005) Oils from Microorganisms In Bailey’s Industrial Oil and Fat Products; Shahidi F, Ed, John Wiley, Sons: Hoboken, NJ, USA 80 Yaguchi T, Tanaka S, Yokochi T, Nakahara T, Higashihara (1997) Production of high yields of docosahexaenoic acid by Schizochytrium sp strain SR21 J Am Oil Chem Soc 74:1431-1434 81 Yamamura R, Shimomura Y (1997) Industrial high-performance liquid chromatography purification of docosahexaenoic acid ethyl ester and docosapentaenoic acid ethyl ester from single-cell oil J Am Oil Chem Soc 74: 1435-1440 82 Yokochi T, Honda D, Higashihara T, Nakahara T (1998) Optimization of docosahexaenoic acid production by Schizochytrium limacinum SR21 Appl Microbiol Biotech 29:72-76 83 Yongmanitchai W, Ward OP (1989) Omega‐3 fatty acids: alternative sources of production Process Biochem 24: 117‐125 ... ? ?Tối ưu hóa điều kiện tách chiết làm giàu axit béo omega- 3 omega- 6 từ sinh khối vi tảo biển dị dưỡng Schizochytrium mangrovei PQ6 Vi? ??t Nam? ?? Trong nghiên cứu chúng tơi bước đầu tìm điều kiện thích... khối tảo; tách chiết FFA từ dầu thô; tách chiết làm giàu axit béo omega- 3 omega- 6 từ hỗn hợp FFA Do đó, để thu hiệu suất tách chiết dầu sinh học giàu axit béo omega- 3 omega- 6 cao hiệu suất tách chiết. .. nghiên cứu ? ?Tối ưu hóa điều kiện tách chiết làm giàu axit béo omega- 3 omega- 6 từ sinh khối VTB dị dưỡng Schizochytrium mangrovei PQ6 Vi? ??t Nam? ?? với hi vọng kết thu bước đầu cung cấp sở khoa học cho