Sự hoạt động của một số máy móc trong phòng thí nghiệm vi sinh vật: máy khử trùng, máy làm khô, máy thanh trùng, môi trường nuôi cấy … Giới thiệu các dụng cụ và sử dụg trong phòng thí ng[r]
(1)Bài 1: Môi trường phân lập ni cấy vi sinh vật (VSV) I Mục đích
Nắm vững môi trường sống vi sinh vật môi trường sử dụng để nuôi cấy vi sinh vật
Sự hoạt động số máy móc phịng thí nghiệm vi sinh vật: máy khử trùng, máy làm khô, máy trùng, môi trường nuôi cấy … Giới thiệu dụng cụ sử dụg phịng thí nghiệm: pipet, ống nghiệm, đĩa ni cấy,…
Giới thiệu hoá chất
Giới thiệu cách bao gói sản phẩm II Nội Dung
1 Tạo môi trường phản lập nuôi cấy nấm men:Môi trường Hanxen
a Dụng cụ hoá chất
Dụng cụ: nồi nhơm, ống nghiệm, hộp petri Hố chất:
Glucozo: 30g KH2PO4: 3g MgSO4.7H2O: 2g Nước: 1000ml Thạch: 15 – 20g,
Chúng ta lấy hoá chất trộn với
Tiếp đun bếp điện 5-10 phút bắc cho giảm nhiệt độ
Sử dụng ống nghiệm hộp petri vo trùng cáh làm dùng ống hút hút đổ vào ống nghiệm hộp petri
* Chú ý: Khi làm phải nhìn hình vẽ để quan sát lượng dung dịch cần cho (ống nghiệm để nghiêng tạo môi trường phân lập nuôi cấy nghiêng – thạch nghiêng )
(2)Cách bao gói: Chúng ta dùng giấy báo để bao gói mơi trường đưa vao để khử trùng, trùng
Chúng ta bao gói cẩn thận bảo đảm an tồn làm theo hướng dẫn giáo viên
Bài (tiếp) Phân lập vi sinh vật va nuôi cấy vi sinh vật
I Phân lập vi sinh vật
1 Mục đích
Để tách khuẩn lạc phải tạo khuẩn lạc chủng riêng rẽ không bị lẫn khuẩn lạc khác
Nếu sử dụng mẫu tự nhiên hay ni cấy trực tiếp số lượng vi sinh vật nhiều chồng chất phân tách khó, ta phải làm giảm sồ lượng cách phân lập
2 Nội dung
a Dụng cụ:
Ta lấy đến 10 ống nghiệm Pipet
(3)Ta sử dụng pipet với lượng ống nghiệm 10-8 cho vài giọt vào đĩa petri dùng trang thuỷ
II Nuôi cấy vi sinh vật
1 Mục đích
Làm cho biết cách ni cấy bảo quản sản phẩm
2 Nội dung:
Nuôi cấy môi trường thạch đĩa Nuôi cấy môi trường thạch nghiêng
a Nuôi môi trường thạch nghiêng Ta lấy dung dịch táo mèo 10-8
Đèn cồn Pipet
(4)Dùng que cấy vô trùng lấy mẫu ống thạch nghiêng mẫu A đảm bảo vô trùng, cấy mẫu sang mơi trường B theo đường zíc zắc
b Nuôi cấy môi trường thạch đĩa: Ta lấy dung dịch táo mèo 10-8
Đèn cồn Pipet
Môi trường vô trùng Que cấy ( trang ) Sau tiến hành:
Kết là: sau tuần khuẩn lạc phát triển thành cụm, trải thạch nhìn thấy mắt thường
(5)b Thí nghiệm quan sát hình dạng tế bao dưa chua:
Cách tiến hành ta giọt giọt tren lam kính để khơ sau đặt lên kính hiển vi quan sát ta thấy kết hình đây:
Hình: vi khuẩn lên men dưa chua
(Sheptoccus)
b Thí nghiệm 2: Quan sát hình dạng vi khuẩn lên men sữa chua Hoá chất: sữa chua
Cho dung dịch sữa chua ta lấy giọt nhỏ lên lam kinh để khô quan sát kính hiển vi ta nhìn thấy hình vẽ
Thí nghiệm: Quan sát hình dạng vi khuẩn dấm
(6)
Vi khuẩn dấm
Bài 2: Sử dụng nhuộm đơn để quan sát hình dạng tế bào vi sinh vật I Mục đích:
Giúp quan sát hình thái tế bào vi sinh vật rõ người ta sử dụng phương pháp nhuộm đơn thuốc nhuộm
Khi nhuộm làm cho tề bào bắt màu thuốc nhuộm sau dưa lên kinh hiển vi để quan sát hình dạng tế bào
II Nội dung:
1 Thí nghiệm 1: Nhuộm đơn tế bào vi khuẩn sữa chua
a Dụng: Pipet, đèn cồn, kính hien vi, lam kính
b Hố chất: Dung dịch sữa chua, nước sạch, xanh metylen c Cách tiến hành: Làm sạch, khơ lam kính
Nhỏ giot dung dịch huỳen phù sữa chua lên lam kính, làm khơ để cố định tiêu sau đố nhỏ dung dịch xanh metylen lên liêu để từ 1-2 phút
(7)
Vi khuẩn sữa chua
Bài 3: Nhuộm kép quan sát tế bào vi sinh vật
I Mục đích:
Chúng ta dùng phương pháp nhuộm kép để phân biệt hai nhóm vi sinh vật gram dương (+) gram âm (-)
Giúp biết cách tiến hanh phương pháp nhuộm kép II Cách tiến hành:
- Làm tiêu
(8)Rửa cồn ( axeton giây)
Nhuộm fushen 1-2 phút rửa nước va hong khơ Sau ta dưa lên kính hiển vi để soi quan sát
-Nguyên nhân:
Với nhều lần nhuộm rửa nước nhu tế bào vi khuẩn gram dương vấn giữ màu gential vi khuẩn bắt màu tím gram dương (+)
Còn bắt màu hồnh gram âm (+) sau nhuộm gential bị rửa nước gram âm khơng giữ màu tím bị màu, nhuộm lugon gram bắt màu hồng lugon
III kết thấy là:
Nấm men có màu hồng Vi khuẩn sữa chua có màu gram âm (-) tím gram dương (+)
(9)Bài Chuyển hố hợp chất hữu khơng chứa Nitơ vi sinh vật
I Mục đích:
Giúp định lượng định tính thành phần có sản phẩm có tham gia vi sinh vật
Quan sát hình dạng vi sinh vật lên men
1 Thí nghiệm 1:
Định tính CO2 dung dịch lên men rượu
a Dụng cụ hoá chất: Một ống nghiệm, ống hút, đèn cồn, kẹp gỗ, Dung dịch men rượu, dung dịch Ba(OH)2 10% b Cách tiến hành:
Cho ml dung dịch men rượu, 1ml dung dịch Ba(OH)2 10% cho vào ống nghiệm sau ta lắc đun nhẹ ngon lửa đèn cồn
c Hiện tượng:
Chúng ta thấy dung dịch tạo vẩn đục d Giải thích:
Phản ứng: Ba(OH)2 + CO2 BaCO3 + H2O Trắng
Dung dịch có màu trắng, lượng CO2 nhiều
Ba(OH)2 + CO2 + H2O không màu Ba(HCO3)2 dung dịch màu
2 Thí nghiệm 2:
Định tính C2H3OH dung dịch len men rượu
a Dụng cụ: Một ống nghiệm, dung dịch lên men rượu, dung dịch H2SO4 đặc, dung dịch K2
(10)c Hiện tượng: Dung dịch ban đầu từ màu vàng cam K2Cr2O7 chuyển sang màu xanh lam
3 Thí nghiệm 3
Định tính axít axetic phản ứng tạo este
a Dụng cụ hoá chất: Một ống nghiệm, dung dịch men axetic, cồn 90 độ, H2SO4
b Cách tiến hành: Cho 5ml dung dịch lên men axetic, 2ml H2SO4 cho vào ống nghiệm lắc
c Hiện tượng: Dung dịch tạo thành toả nhiệt có mùi dầu chuối tạo thành este
Phản ứng: C2H5OH + CH3COOH H2SO4đ CH3COOC2H5 + H2O
4 Thí nghiệm 4:
Định tính axit axetích phản ứng tạo sắt axetat
a Dụng cụ hoá chất: Một ống nghiệm, dung dịch lên men axtic, dung dịch FeCl3, dung dịch NaOH2%
b Cách tiến hành: Cho 3ml dung dịch lên men rượu, 1ml NaOH 20%, nhỏ giọt FeCl3
c Hiện tượng: Dung dịch ban đầu có màu vàng nhạt nhỏ dần FeCl3 ta thấy chuyển dần sang màu đỏ nâu
Phản ứng: CH3COOH + NaOH CH3COONa + H2O 3CH3COONa + FeCl3 (CH3COO)3Fe + 3NaCl kết tủa màu nâu đỏ
5 Thí nghiệm 5:
a Mục đích: Định tính axít axetích tronh dung dịch lên men
b Dụng cụ: Một ống thuỷ tinh, dụng cụ chuẩn độ, NaOH 0,5N, dung dịch lên men axetic, dung dịch phenolphtalin
(11)dụng, sử dụng, định lượng CH3COOH màu hồng bền - giây
d Hiện tượng: Phản ứng xảy NaOH CH3COOH, lượng NaOH phản ứng 9ml, Lượng dung dịch lên men rượu 2ml
Ta có 1ml NaOH 0,5N phản ứng 0,009g CH3COOH lượng CH3COOH có 2ml dung dịch 9.0,009= 0,081g
6 Thí nghiệm 6:
a Mục đích: Định lượng axit lactic
b Dụng cụ: Một cốc thuỷ tinh, dụng cụ chuẩn độ, dung dịch nước dưa chua, H2O cất, Dung dịch phenol phtalin, dung dịch, dung dịch NaOH 0,5N
c Cách tiến hành: Cho vào cốc 1ml dung dịch dưa chua, 2ml H2O cất lắc nhỏ - giọt phenol phtalin
Đổ NaOH 0,5N vào dụng cụ chuẩn độ dung dịc vừa hồn thành tới có màu hồng bền từ – giây dừng lại
d Hiện tượng: Phản ứng xảy NaOH axit lắc tích màu hồng phenol phtalin xuất bên – giây dừng lại lúc phản ứng xảy gần gần đủ
Ta xác định lượng NaOH 0,5N số gam axit lắc tích có 1ml dưa chua ( 2ml dung dịch dưa chua 6.0,006= 0,036g )
Thí nghiệm 7: Làm sữa chua
- Rót sữa đặc có đường (sữa ơng thọ )vào ca đựng
- Đổ vào ca hộp nước (dùng hộp sữa để đong0 ấm (hoặc đổ vào 1hộp nước nóng +2 hộp nước đun sơi để nguội ) Nhiệt đọ hỗn hợp vào khoảng 40 C Đun sôi nhẹ để trùng
(12)Giữ 10 – 12h cho protein sữa giãn nở , giảm độ ẩm tự làm sản phẩm trở lên mịn
- chất :theo phương trình phản ứng :
C6H12O6 CH3-CO-COOH CH3-COOH-COOH + Q
Thí nghiệm : Sự phân giải xenlulozo
I Phân giải xenlulozo hiếu khí :
Bản chất :khi có khí O2 , xenlulozo, bị vi sinh vật phân huỷ thành CO2 H2O
(C6H10O5)n +nH2O C6H10O5 R-COOH CO2+H2O +Q
Kiểm tra kết :
+ Nhỏ giọt dung dịch phân huỷ (lấy đoạn bề mặt ), cho lên men lam kính
+ Nhuộm đơn Quan sát vật kính dầu
II Phan giải xenlulozo kỵ khí
- Bản chất : R-COOH +CO2+H2O (C6H10O5)n + nH2O nC6H10H10 nC6H12O6 + Q
R-COOH +CH4+H2O+ Q Kiểm tra kết
(13)
Thí nghiệm 9 :Q trình cố định Nitơ phân tử
Thí nghiệm quan sát vi khuẩn lam bèo hoa dâu
- Lấy cánh bèo hoa dâu , dùng que cấy dầm nát lam , đậy lamen quan sát vật kính 5, 10 , 45
Thấy tế bào có chuỗi hình hạt dài Trong chuỗi thấy tế bào dị hình có kính thước to tế bào khác
Hình ảnh:
(14)Bài 5: Sự chuyển hoá hợp chất chứa Nitơ vi sinh vật Qúa trình amơn hố:
Thí nghiệm 10: Qúa trình amơn hố protein
Chúng ta xác định có mặt NH3 dung giấy quỳ tím đặt lên miệng ống nghiệm bên chữa dịch phân huỷ protein đậy nút lại ta thấy giấy quỳ tím chuyển sang màu xanh có mặt NH3 bay
- Xác định có mặt H2S ta quan sát miếng giấy bọc tẩm dung dịch axetat đặt miệng ống nghiệm chứa dịch phân huỷ protein, giấy hố đen dịch chì axetat chuyển sang thành sunphua chì có H2S giải phóng
Ta có phương trình:
H2S + Pb(CH3COO)2 PbS + 2CH3COOH - Xác định có mặt indol tạo nitritindol: + Ta lấy 2ml dịch nuôi cấy
+ 0,2 ml dịch 10% H2SO4 + 0,2 ml NaNO3 0,01%
Quan sát màu đỏ tạo bề mặt ( màu hồng nhạt ) vịng vài phút có mặt indol tạo thành Nitritindol
- Ta làm tiêu nhuộm đơn dịch phân huỷ protein sau quan sát tiêu nhuộm đơn
* Qúa trình amơn hố ure: xác định có mặt NH3
Đặt miếng giấy quỳ tím lên miệng ống nghiệm chúa sản phẩm amơm hố ere giấy quỳ tím chuyển sang màu xanh
- Quan sát vi sinh vật: Làm tiêu nhuộm đơn
Lấy giọt dịch phân huỷ làm tiêu nhuộm màu cố định quan sát có vi sinh vật hình ảnh
(15)Cố định HNO2: Cho vào sứ 1-2 giọt dịch nuôi cấy 1-2 giọt diphenyl alamin
Kết quả: dịch thử có màu trắng - Làm tiêu bản:
Tiến hành nhuộm đơn dịch thử Quan sát:
3 Làm tiêu nốt sần
Cắt ngang nốt sần để lên lam kinh, ép nhở Nhoẻ dung dịch Fushssin loãng, không rửa
(16)(17)(18)