Đang tải... (xem toàn văn)
Trong c¸c nhãm chÊt chÝnh ® îc chiÕt xuÊt tõ nguån gèc thùc vËt nh terpenoit, steroit, ancaloit..., nhãm c¸c hîp chÊt ancaloit ®ãng mét vai trß v« cïng quan träng... Trong sè c¸c anca[r]
(1)T¹p chÝ Hãa häc, T 40, sè 1, Tr 79 - 85, 2002
c¸c ancaloit từ vỏ melodinus oblongus (apocynaceae)
Đến Tòa soạn 25-9-2001
Lê Ngọc Liên1, Phạm Gia Điền1, M Pais2
1Viện Hóa học, Trung tâm KHTN v*CNQG 2ICSN - CNRS - Giff sur Yvette - Ph¸p
Summary
Melodinus oblongus is one species still non-investigated From the stem barks of this plant 18 indole alkaloids have been isolated and characterized by spectroscopic methods
Trong nhóm chất đ ợc chiết xuất từ nguồn gốc thực vật nh terpenoit, steroit, ancaloit , nhóm hợp chất ancaloit đóng vai trị vơ quan trọng Chúng l -nguồn d ợc liệu quý giá đ ợc sử dụng rộng r3i lĩnh vực y tế v- nông nghiệp đ ợc sử dụng nh loại thuốc hữu hiệu phòng chống sâu bệnh Họ Trúc đ-o (Apocynaceae) l -một họ m- họ n-y chứa l ợng ancaloit lớn v- đ3 đ ợc sử dụng nhiều y tế l-m thuốc chữa bệnh - Chi Melodinus đ3đ ợc nghiên cứu nhiều song nhiều lo-i Việt Nam ch a đ ợc nghiên cứu th-nh phần hóa học [1] Các ancaloit chi n-y l- hợp chất có khung indol
Melodinus oblongus Pierre l-một lo-i có Việt Nam v-trên giới nh Việt Nam lo-i n-y ho-n to-n ch a đ ợc nghiên cứu th-nh phần hóa học Các lo-i thực vật thuộc chi Melodinus (Apocynaceae) đ ợc sử dụng để chữa bệnh viêm m-ng n3o, tủy sống trẻ em, chữa thấp khớp chạy v-o tim Một số lo-i đ ợc dùng để tăng c ờng vận chuyển máu [2] Nhằm tìm kiếm nguồn d ợc liệu mới, đ3 tiến h-nh nghiờn cu lo-i n-y
Mẫu đ ợc thu ng-y 05/04/1996 t¹i
Paco- Hịa Bình Tên khoa học đ3 đ ợc tiến sĩ Trần Ngọc Ninh (viện Sinh thái v- t-i nguyên sinh vật, Trung tâm KHTN v- CNQG) xác định Mẫu đ ợc l u Viện Sinh Thái v- T-i nguyên sinh vật, Trung tâm KHTN v- CNQG-Việt Nam v- Viện Hóa HCTN, Trung tâm nghiên cứu Quốc Gia Cộng hòa Pháp d ói tên VN-86
(2)N
N 15
R'
O R
H
9 10 11
12 13
2 16
17 20 19
18 14
3
6
1: R= COOMe, R'=H Scandin
2: R= COOMe
5: R=R'= H Meloscin
R'= OH 10- Hydroxyscandin ,
N
N
H COOMe
H 10
11
6: Tabersonin
8: R = COOMe,19- H Vindolin 9: R = COOMe,19- H Epi- vindolin 10:R = OH, 19- H 16-Hiđrôxyvindolin 11: R = OH,19 H 16 Hiđrôxy-epi- vindolin
Ngo-i ra, từ sắc ký cột với hệ dung mơi MeOH, EtOAc cịn phân lập đ ợc năm chất v-xác định đ ợc l-picralin (14), desaxetylpicralin (15), akuammilin (16), desaxetylakuammilin (17), pleiocarpamin (18) liệu phổ Điều đáng ý l- phần ancaloit phân cực n-y chiếm l ợng lớn hỗn hợp ancaloit ban đầu
19
H N N
CH3
O O
H
3: 19- H Meloscandonin 4: 19- H Epi meloscandonin
N
N
H
1819 OH COOMe 7: Hydroxyvenalstonin
15
16 14
OH H
H
N N
12:16 H 14
-Vincanol 13: 16 H 14- Epi- vincadol
R H
N
N
H
(3)Trong số ancaloit đ ợc phân lập có số chiếm l ợng lớn so với l ợng ancaloit tổng Trong b-i n-y chủ yếu đề cập chi tiết tới việc xác định cấu trúc số ancaloit có vỏ cây M oblongus l- 10-hydroxyscandin (2) v- chất 15,17,18
Từ phân đoạn rửa giải hỗn hợp EtOAc/heptan (4 : v- : 3) thu đ ợc chất ký hiệu 1v-2 với giá trị Rf= 0,59 v -0,47 t ơng ứng( hệ dung môi triĨn khai EtOAc, thc hiƯn Dragendorff)
Phổ 1H-NMR 1 v- 2 t ơng tự nhau, cho dublet kép vùng 4,8 - ppm (J = 17 v- 11 Hz) đặc tr ng cho nhóm allyl phân tử Ngo-i cịn có singulet 3,6 ppm chứng tỏ hai chất có nhóm COOCH3.ởvùng tr ờng thấp có singulet đặc tr ng cho NH tự nhân inđol ( > ppm) Sự khác hai chất 1 v- 2 đ ợc
thể rõ vùng nhân thơm Chất 1 cho dublet v- dublet kép với số t ơng tác 7,5Hz (dublet) 7,5 Hz v-2 Hz (dublet kep) đặc tr ng cho vịng thơm nhân indol khơng bị Chất 2 cho dublet dublet có số t ơng tác nhỏ (J = 1,9 ) v-1 dublet kép (J =7,5 v- Hz) Từ suy chất 2, vịng thơm có vị trí bị C10 C11 Phổ
13C-NMR chất t ơng tự v-đ ợc trình b-y bảng
Phổ khối cho pic ph©n tư cđa chÊt 1 b»ng 350 v-cđa chÊt 2b»ng 366
MS 1: m/z: 350[M]+, 335, 322, 291, 263, 230, 134, 120
MS 2: m/z: 366 [M]+, 351, 338, 307, 279, 246, 134, 120
Từ số liệu phổ , so sánh với số liệu phổ đ3 công bố , cho phép xác định chất 1
l-scandin v-chÊt 2 l-10- hydroxyscandin [6]
13 16 10 11 12
15 20 19 21 18 N N H H H COOMe
18: Pleocarpamin
Desacetylakuammilin R= CH2OH
17: Akuammilin R=CH COOCH 16: N N COOMe R 10 11 12 17 16 13 14 15 21 20 19 18 18 19 20 21 15 14 13 3 16 17 12 11 10 R N N COOMe O H
14: R= CH2COOCH3 Picralin
(4)Bảng 1: Các số liƯu phỉ 1H v-13C-NMR cđa chÊt 1v-2
1 2
VÞ trÝ C
13C 1H
(Hz) 13C 1H
(Hz)
2 170,3 - 170,8
-3 47,5 m 46,9 3,02 m
5 53,1 3,15 m 53,4 3,2 m
6 39,7 2,24 m 36,6 2,4 m
7 57,6 - 59,5
-8 128,6 - 129,6
-9 126,8 7,4 d ( 7,5 ) 122,5 6,9 d ( 1,9) 10 123,5 7,1 dd ( 7,5; 2) 122,5 - 11 127,3 7,25dd (7,5; 2) 127,8 6,4dd( 7,5;2) 12 115,5 6,8 d (7,5) 115,3 6,55 d ( 7,5)
13 134,1 - 128,9 -
14 122,7 5,8 m 116,3 5,85 m
15 131,3 5,7 m 133,2 5,7 m
16 63,5 - 62,9 -
17 43,4 2,8 - m 44,4 2,9 - m
18 114,5 4,8-5dd(17;11) 114,5 4,8-5dd(17;11) 19 142,1 5,6 dd (17;11) 143,6 5,75dd(17;11)
20 46,4 - 46,9 -
21 83,5 3,1 s 83,4 3,3 s
COOMe 52,5 3,6 s 53,4 3,5 s
COOMe 169,3 - 169,1 -
NH - 9,7 s - 9,35 s
Các phổ NMR hai chiều COSY, HMQC đ3 khẳng định cấu trúc hai chất 10- Hiđrôxyscandin 2chiếm l ợng lớn tổng ancaloit từ vỏ M.oblongus (gần 15%)
Rưa gi¶i b»ng hỗn hợp 10 v- 20% MeOH/EtOAc cho chất ký hiƯu 14,15,
16 chất 15 chiếm l ợng lớn (~ 11% so với ancaloit tổng) Sắc ký lớp mỏng SiO2 với hệ dung môi triển khai 20% MeOH/EtOAc, thuốc Dragendorff cho giá trị Rft ơng ứng 0,3 (chất 14) v-0,25 (chất 15)
(5)Bảng 2: Các số liệu phổ 1H v-13C-NMR cđa 14v-15
14 15
VÞ trÝ C
13C 1H
(Hz) 13C 1H
(Hz)
2 107,7 - 107,0 -
3 52,2 3,2 bs 51,8 3,35 bs
5 87,8 4,7 d (2,6) 87,1 4,75 d (2,5)
6 45,0 Ha: 237 dd (14; 2,6); Hb: 3,25 44,8 Ha: 237 dd (14; 2,6); Hb: 3,25
7 52,3 d (2,6) - 53,1 -
8 134,4 - 133,0 -
9 128,3 7,35 d (7,5) 128,5 7,38 d (7,5) 10 121,6 6,8 dd (7,5; 1,3) 121,4 6,85 d (7,5;1,3) 11 128,6 6,97dd (7,5; 1,3) 126,5 7,1 dd (7,5;1,3) 12 111,9 6,6 dd (7,5) 111,5 6,65 d (7,5)
13 149,0 - 149,0 -
14 22,6 1,87 m 21,8 m
15 36,3 3,55 bs 33,1 3,55 bs
16 56,9 - 57,9 -
17 67,8 Ha: 3,65d (11); Hb: 4,4 d (11) 64,4 Ha: 3,65d (11); Hb: 4,4 d (11) 18 13,9 1,45 dd ( 7,1; 2) 13,3 1,5 dd (7;2)
19 120,4 5,34 q ( 7,1; 2) 120,3 5,3 q (7,1)
20 137,8 - 137,7 -
21 47,2 Ha: 3,8dq(18;19); Hb: 3,1brd
(18) 46,7
Ha: 3,8dq(18;19); Hb: 3,1brd (18)
COOMe 52,3 3,6 s 51,9
O2CMe - 1,45 s - -
COOMe 170,7 - 174,6 -
MS: m/z chÊt 14: 410 [M]+, 392,51, 338, 337, 333, 247, 240, 239, 194, 182, 181, 180, 168, 157, 156, 130, 108, 106
ChÊt 15: 367 [M]+, 349, 310, 294, 277, 264, 197, 196, 151, 139, 138, 137
Các liệu phỉ 1H, 13C-NMR v- MS cđa
14, 15trùng với liệu đ3công bố v-cho phép khẳng định 14 l- picralin v- 15 l -desacetylpicralin [9 - 11] Ngo-i ra, điều n-y đ ợc khẳng định phổ NMR hai chiều
COSY, HMQC cđa chóng
Sắc ký cột SiO2 ,rửa giải hỗn hợp 50% MeOH/EtOAc cho chất 17 Chất 16
v-17cho Rf= 0,43 v- 0,36 t ¬ng øng hƯ dung m«i triĨn khai 50% MeOH/EtOAc, thc hiƯn Dragendorff Chất 17 tồn l ợng lớn gần 10% so với ancaloit tổng, chất 16
khoảng 5% Phỉ 1H, 13C-NMR v-MS cđa 16v
-17 t ¬ng tự v-cũng cho phép suy đoán 17
(6)Bảng 3: Các số liệu phổ 1H v-13C-NMR cđa 16v-17
16 17 VÞ trÝ C
13C 1H(Hz) 13C 1H(Hz)
2 188,7 - 190,4
-3 54,6 4,5 d (5) 54,4 4,6 d (5)
5 52,3 Ha: 2,05 dd (14; 4) Hb: 3,61 m 51,9 Ha: 2,07 dd (14; 4), Hb: 3,65 m
6 37,2 Ha: 2,56 m; Hb: 2,65 m 37,7 Ha: 2,58 m; Hb: 2,67 m
7 58,8 - 58,5
-8 138,6 - 139,4
-9 125,7 7,4 d (7,5) 124,5 7,55 d (7,5)
10 126,4 7,15 dd (7,5; 1,5) 125,7 7,2 dd (7,5; 1,5)
11 128,4 7,3 dd (7,5; 1,5) 128,3 7,35 dd (7,5; 1,5)
12 120,9 7,6 d (7,5) 119,3 7,65 d (7,5)
13 155,6 - 155,5
-14 30,9 Ha: 1,88 dd (14; 3), Hb: 2,35 d (14) 30,3 Ha: 1,9 dd (14; 3); Hb: 2,45 d (14)
15 37,1 3,6 m 34,4 3,64 m
16 64,2 - 60,3 -
17 66,3 3,1 qAB ( 12) 63,9 2,91 qAB ( 12)
18 13,7 1,61 dd ( 7; 2,5) 13,2 1,63 dd ( 7; 2,5)
19 121,4 5,4 m 121,2 5,5 m
20 144,9 - 144,1
-21 53,9 Ha: 3,2 d (17); Hb: 4,1 dd (17; 2,5) 53,6 Ha: 3,15 d (17); Hb:4,14 dd (17; 2,5)
COOMe 52,1 3,7 s 51,8 3,8 s
O2CMe - 1,58 s -
-COOMe 171,5 - 173,4
-MS chÊt 16: m/z: 394 [M]+, 393, 366, 363, 336, 335, 322, 321, 306, 292, 275, 262, 261, 249, 232, 194, 168, 121
MS chÊt 17: m/z: 352 [M]+, 351, 322, 321, 293, 289, 262, 261, 249, 232, 194, 180, 168, 167, 121
So với liệu đ3 đ ợc công bố cho phép xác định 16 l- akuammilin v- 17 l -desaxetylakuammilin [9, 12, 13]
Ngo-i ra, từ phân đoạn rửa giải 50% MeOH/EtOAc, thu đ ợc 243 mg chất 18(hiÖu
suất gần 8% so với ancaloit tổng) với Rf= 0,3 (hệ dung môi triển khai 50% MeOH/EtOAc, thuốc Dragendoff) Dựa liệu phổ 1H, 13C-NMR, MS, so sánh với liệu phổ đ3 công bố, cho phép khẳng định l -pleiocarpamin Chất n-y th ờng xuất dạng vết hỗn hợp ancaloit lo-i thực vật chi Amsonia (Apocynaceae) [6 - 8]
(7)desaxetylpicralin, desaxetyla-kuammilin v -pleiocarpamin chiếm l ợng lớn
Phần thùc nghiƯm 1 ThiÕt bÞ v hãa chÊt
Phổ khối đo máy Kratos MS 50 Phổ NMR proton đ ợc đo máy Bruker AC250 Spectrometer với TMS l-m nội chuẩn, CDCl3l-dung môi hòa tan
Phổ 13C-NMR đo máy Bruker 75 MHz, dung môi ho-tan l-CDCl3
Sắc ký cột với chất hấp phô l- Silicagel Merck 60 (0,040 - 0,063 mm)
Sắc ký lớp mỏng Silicagel Merck tráng sẵn
2 Chiết tách v xác định cấu trúc
Một kg vỏ M oblongus khô đ ợc xay nhá, chiÕt Soxhlet víi 10 lit CH2Cl2 C« kh« dịch chiết, ho-cặn v-o axit HCl 5% Loại phần không tan pha n ớc cách chiết nhiều lần với ete etylic Dịch axit đ ợc kiềm hoá NH4OH, chiết ancaloit CH2Cl2thu đ ợc 6,99 gr ( hiÖu suÊt 0,699% )
3,5 gr ancaloit tổng cho lên cột sắc ký với 80 gr SiO2, rửa giải hỗn hợp heptan, EtOAc v- MeOH theo độ phân cực tăng dần Các ancaloit từ 1-18đ ợc phân lập v-xác đinh cấu trúc nh đ3đ ợc trình b-y
2: 10-hiđrôxyscandin: C21H22N2O4(528 mg) Các liệu phổ trình b-y bảng
14: picralin: C23H27N2O5(87 mg)
15: desaxetylpicralin: C21H24N2O4(382 mg)
16: akuammilin: C23H27N2O4(170 mg)
17: desaxetylakuammilin: C21H24N2O3 (340 mg)
C¸c sè liƯu phổ chất n-y xem bảng v-3
18: pleiocarpamin: C20H22N2O2(243 mg) MS: m/z: 322 [M]+, 263, 234, 232, 180, 131, 108
1NMR: 3,9 brd (3,7, 3); 2,6 m (2H, H-5); 3,8 m (2H, H-6); 7,55d (7,5, H-9); 7,12 m (H-10); 7,07 m (H-11); 6,95 m (H-12); 2,2 m (2H, H-14); 3,2ddd (10,5, 7, 3,9, H-15); 5,25d (4,1, H-16); 1,55dd (6,5, 2, H-18); 5,34 dq (6,4, 1,7, H-19); 2,65 v- 1,8 (12,5, H-21); 3,55 s ( COOMe)
13C-NMR: 136,6 (C-2) ; 61,1 (C-3); 49,7 (C-5); 20,5 (C-6); 107,9 (C-7); 128,4 (C-8); 118,2 (C-9); 119,8 (C-10); 122,8 (C-11); 112,2 (C-12); 137,5 (C-13); 28,2 (C-14); 33,5 (C-15); 51,7 (C-16); 168,9 (C-17); 12,4 (C-18); 120,5 (C-19); 132,9 (C-20); 56,3 (C-21); 50,5 (COO-Me)
T"i liÖu tham khảo
1 Tran Đinh Ly Feddesrepertorium, Band, Vol 97, No and 8, P 410 - 418, Akademie-Berlin (1986)
2 Wei Guo, Yun, Li Zhou Phytochemistry, Vol 34, No 2, P 563 - 566 (1993)
3 B Gabetta and Mustich G Spectral Data of Indole alkaloids, Elli and Pagani, Milan (1975)
4 Michel Dauton, M Hachem Mehri J Org Chem, Vol 40, No 19, P 2838 - 2839 (1975)
5 Y L Thou, J H Ye Planta Medica, Vol 54, P 315 - 317 (1988)
6 Van Beek J Nat Prod, Vol 48, P 400 (1985)
7 Waterman, PG and Zhong S Planta Med., Vol 45, P 98 (1982)
8 Teris A Van Beek J Nat Prod, Vol 48, No 3, P 400 - 423 (1985)
9 Heterocycles, Vol 24, No 11, P 3264 10 He Xia Huaxue Xuebao, Vol 50, No 1, P
96 (1992)
11 F Gueritte, N Langlois J Nat Prod, Vol 46, No 1, P 144 - 147 ( 1983)