Nghiên cứu tạo phức hệ nano tích hợp curcumin

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT ooo0ooo ĐẶNG THỊ MINH LỤA NGHIÊN CỨU TẠO PHỨC HỆ NANO TÍCH HỢP CURCUMIN LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội - 2012 1Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT ooo0ooo ĐẶNG THỊ MINH LỤA NGHIÊN CỨU TẠO PHỨC HỆ NANO TÍCH HỢP CURCUMIN Ngành: Sinh học Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60.42.30 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS LÊ QUANG HUẤN Hà Nội - 2012 2Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn LỜI CẢM ƠN Trước hết, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS TS Lê Quang Huấn, Trưởng phịng Phịng Cơng nghệ tế bào động vật - Viện Công nghệ sinh học - Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam tận tình hướng dẫn, dạy bảo dành phần kinh phí thích hợp từ đề tài khoa học định hướng ứng dụng để thực nội dung nghiên cứu đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn TS Lã Thị Huyền, ThS Lê Thị Minh Phúc nhóm nanomedicine phịng Cơng nghệ tế bào động vật trực tiếp giúp đỡ tơi q trình thực khóa luận Tơi xin gửi lời cảm ơn tới anh, chị, bạn đồng nghiệp phịng Cơng nghệ tế bào động vật giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi q trình làm khóa luận Tôi xin gửi lời cảm ơn tới thầy giáo, cô giáo dạy khoa Sinh học, Trường Đại học Thái Nguyên, Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật dạy bảo giúp đỡ thời gian học tập nghiên cứu Cuối cùng, xin cảm ơn gia đình, người thân bạn bè ln động viên giúp đỡ tơi suốt q trình học tập hoàn thành luận văn Hà Nội, ngày 26 tháng năm 2012 Học viên Đặng Thị Minh Lụa 3Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn NHỮNG TỪ VIẾT TẮT Chi Chitosan CMC Critical Micelle Concentration Cs Cộng DMSO Dimethyl Sulfoxide MN Magnetic Nanoparticles NC Nanocapsules NE Nanoemulsion NLC Nanostructured Lipid Carriers NPs Nanoparticles NS Nanospheres NSAISs Nonsteroidal Antiinflammatory Drugs PEG Polyethylenglycol PF Pluronic® F-127 PLGA Poly-D,L-lactide-co-glycolide QD Quantum Dots RES Reticuloendothelial System SEM Scanning Electron Microscopy SLN Solid Lipid Nanoparticles TEM Transmission Electron Microscopy TPP Tripolyphosphate 4Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn MỤC LỤC MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN 1.1 Các hệ vận chuyển thuốc kích thước nano 1.1.1 Khái niệm 1.1.2 Phân loại 1.2 Tổng quan chitosan nano chitosan 1.2.1 Cấu trúc chitosan 1.2.2 Tính chất chitosan 1.2.3 Ứng dụng chitosan 1.2.4 Nano chitosan 1.3 Curcumin 10 1.3.1.Cấu trúc hóa học curcumin 10 1.3.2 Dược động học curcumin 12 1.3.3 Tác dụng dược lý curcumin 13 1.3.4 Hệ vận chuyển curcumin 15 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Hóa chất thiết bị 20 2.2 Phương pháp nghiên cứu 21 2.2.1 Phương pháp tạo chitosan phân tử lượng thấp 21 2.2.2 Phương pháp tạo hạt nano chitosan 21 2.2.3 Phương pháp tạo phức hệ nano tích hợp curcumin 22 2.2.4 Phương pháp chụp kính hiển vi điện tử truyền qua (Transmission Electron Microscope - TEM) 23 2.2.5 Phương pháp chụp kính hiển vi điện tử quét (Scanning Electron Microscope - SEM) 24 2.2.6 Phương pháp soi kính hiển vi huỳnh quang 25 2.2.7 Phương pháp đo size, phân bố size zeta 26 5Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 2.2.8 Phương pháp xác định hiệu xuất đóng gói 29 2.2.9 Khảo sát tính thấm hạt nano vào tế bào động vật 29 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 31 3.1 Kết tạo nano chitosan 31 3.2 Hình thể học hạt nano tích hợp cucurmin 33 3.3 Kết đo size, phân bố size zeta hạt nano tích hợp curcumin 34 3.4 Hiệu suất đóng gói curcumin 36 3.5 Tính thấm hạt nano vào tế bào HEK293 39 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO 42 6Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn MỞ ĐẦU Công nghệ nano tạo hàng loạt hệ vật chất kích thước từ vài nm tới hàng trăm nm để vận chuyển dược chất đến phận mong muốn thể Các hệ vận chuyển thuốc có nhiều triển vọng polymer-micelles, dendrimers, hạt nano có nguồn gốc kim loại polymer, ceramic, protein, virus, hạt nano liposome Các dược chất tác nhân chẩn đốn tích hợp vào bên liên kết hóa học gắn vào bề mặt hạt nano Curcumin hoạt chất chiết xuất từ củ nghệ vàng Curcumin có nhiều hoạt tính sinh học dược học quan trọng tính kháng viêm, chống ung thư kháng virus, ứng dụng y học tiềm tính độc thấp chúng Trong năm gần đây, curcumin chứng minh có khả ức chế tăng sinh tế bào nhiều dòng tế bào ung thư in vitro sử dụng để ngăn ngừa điều trị nhiều bệnh ung thư in vivo Tuy nhiên, độ hòa tan kém, sinh khả dụng thấp bị chuyển hóa nhanh chóng ruột gan làm hạn chế ứng dụng curcumin Curcumin phát triển loại thuốc điều trị thông qua thay đổi công thức gắn lên hệ vận chuyển, cho phép nâng cao khả hấp thụ tế bào Để vận chuyển curcumin đến quan đích, cần phải cải thiện độ hịa tan sinh khả dụng [1] Gần đây, nhiều nghiên cứu tập trung tạo hạt nano polyme dựa copolymer Pluronic® F-127 (PF) Pluronic® F-127 (PF) copolymer không độc hại ưa nước, sử dụng rộng rãi tá dược để làm tăng tính ổn định độ hòa tan thuốc PF ABA copolymer bao gồm tiểu phần A polyoxyethylene (PEO), tiểu phần B polyoxypropylene (PPO) [2] Khi gia tăng nhiệt độ dung dịch PF tiểu phần A, PPO có xu hướng nước tạo thành lõi với vỏ bên chuỗi PEO ngậm nước hợp thành hình cầu micelle [3] Cấu trúc 7Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn micelle tạo copolymer tích hợp thuốc ưa nước, kỵ nước kéo dài thời gian giải phóng thuốc [4,5] Tuy nhiên, việc sử dụng micelle PF làm hệ vận chuyển thuốc đường dài không thực tế, hạt micelle bị kết tụ thay đổi cấu trúc tiếp xúc nồng độ nhiệt độ khác Một số nghiên cứu ổn định hạt micelle cải thiện sau phủ lớp polymer với vật liệu PLGA, polyvinychloride chitosan [6] Chitosan loại polymer carbohydrate tự nhiên, tạo cách deacetyl hóa đầu N- chitin Chitosan có nhiều ưu điểm để làm vật mang hệ thống vận chuyển thuốc kích cỡ nano Chitosan khơng độc, có khả tương thích sinh học, phân hủy sinh học chứng minh để kiểm sốt giải phóng thuốc, protein hay peptide Chitosan hòa tan tốt nước, tránh việc sử dụng dung môi hữu độc hại, không cần tinh tạo hạt nano [7] Sự kết hợp polymer-micelles, phức hệ nano Chitosan-PF tích hợp curcumin tạo hệ vận chuyển curcumin đầy hứa hẹn Xuất phát từ sở khoa học thực tiễn trên, tiến hành thực đề tài: “ Nghiên cứu tạo phức hệ nano tích hợp curcumin” với mục tiêu: - Tạo phức hệ nano tích hợp curcumin - Kiểm tra, đánh giá phức hệ nano tạo - Khảo sát tính thấm hạt nano vào tế bào động vật, kiểm tra độc tính tế bào ung thư, từ định hướng ứng dụng điều trị ung thư 8Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Chương TỔNG QUAN 1.1 Các hệ vận chuyển thuốc kích thước nano 1.1.1 Khái niệm Hệ vận chuyển thuốc kích thước nano hệ cấu tạo hạt nano có kích thước từ 1-1000 nm, với thiết kế thích hợp có vai trị phương tiện vận chuyển chuyên biệt, đảm bảo vận chuyển hoạt chất đến đích tác dụng Cơng nghệ nano tạo hàng loạt hệ vật chất với kích thước từ vài nm tới hàng trăm nm sử dụng để vận chuyển dược chất đến phận mong muốn thể với liều lượng thích hợp theo thời gian mong muốn, đảm bảo yếu tố góp phần tạo nên tính an tồn hiệu thuốc: nơi, lúc liều Các hệ vận chuyển thuốc có nhiều triển vọng polymer-micelles, dendrimers, hạt nano có nguồn gốc kim loại polymer, ceramic, protein, virus, hạt nano liposome Các dược chất tác nhân chẩn đoán đưa vào bên liên kết hoá học gắn vào bề mặt hạt nano 1.1.2 Phân loại Hiện hạt nano vận chuyển thuốc thường phân loại theo thành phần cấu tạo, cấu trúc đặc tính bề mặt hạt nano Thành phần cấu tạo hạt nano chủ yếu polyme, lipid hợp chất vơ cơ, phân thành lớp lớn: • Hạt nano polyme (polymeric nanoparticles) • Hạt nano lipid (lipid nanoparticles) • Hạt nano vô (inorganic nanoparticles) 9Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Hình 1.1 Một số hạt nano thường gặp Ngồi ra, cịn có hạt nano có cấu trúc hỗn hợp polyme, lipid hợp chất vơ Các polymer có khả phân hủy sinh học tương thích sinh học thường sử dụng polylactide, polyglycolide, poly(lactide-co-glycolide), poly(ε-caprolactone), poly(alkyl-cyanoacrylate), gelatine, chitosan… Các lipid thường sử dụng lipid khơng độc với thể, có cấu tạo tương đồng với lipid sinh học phospholipid, cholesterol, glyceride… dẫn xuất lipid Các hạt nano vô thường sử dụng chẩn đoán điều trị như: hạt nano từ tính (magnetic nanoparticle), chấm lượng tử (quantum dots) Phân loại theo cấu trúc, hạt nano chia thành dạng: • Hạt nano dạng màng bao: cấu tạo giống túi (vesicle) nang (capsule), gồm thành phần polymer màng đơn hay màng kép lipid bao quanh lõi trạng thái rắn, rắn-lỏng lỏng ưa nước ưa dầu • Hạt nano cấu trúc dạng khung xốp (matrix): khung xốp polyme, lipid hợp chất vô phân bố bên hạt nano thường có dạng hình cầu 10Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn kích thước nhỏ có đặc tính như: cải thiện khả vận chuyển thuốc, kéo dài thời gian lưu hành thuốc máu giảm độc tính [16] Kích thước hạt, phân bố kích cỡ zeta hạt nano Chi-PF tích hợp curcumin đo máy Zetasizer Kết cho thấy hạt nano tạo có kích thước khoảng 151 nm (hình 3.6) kích thước không thay đổi nhiều hạt nano Chi-PF không đóng gói curcumin điều chứng tỏ curcumin tích hợp vào bên cấu trúc hạt nano Hình 3.6 Kết đo size, phân bố size nano Chi-PF mang curcumin Thế zeta micelle PF mang curcumin với có mặt vắng mặt chitosan 5,09 mV -2,19 mV (hình 3.7; 3.8) Kết cho thấy, zeta hạt nano không cao, hạt kết tụ lại, vấn đề lớn ứng dụng vận chuyển thuốc Tuy nhiên có mặt chitosan, chitosan tích điện dương, làm tăng lực đẩy tĩnh điện hạt, nên zeta tăng lên đáng kể Do chitosan sử dụng để tăng độ ổn định giảm kết tụ hạt nano 41Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 35 http://www.lrc-tnu.edu.vn Hình 3.7 Thế zeta hạt nano có mặt chitosan Hình 3.8 Thế zeta hạt nano khơng có mặt chitosan 3.4 Hiệu suất đóng gói curcumin Curcumin nồng độ 0,1 mg/ml DMSO đo phổ hấp thụ bước sóng từ 300 nm đến 700 nm, kết cho thấy độ hấp thụ curcumin cao bước sóng 430 nm (hình 3.9) 42Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 36 http://www.lrc-tnu.edu.vn 3.500 3.000 2.500 OD 2.000 D12-Spectrum 1.500 1.000 0.500 0.000 300 350 400 450 500 550 600 650 700 Wavelength (nm) Hình 3.9 Phổ hấp thụ curcumin bước sóng từ 300-700 nm Để xây dựng đường chuẩn curcumin, dung dịch curcumin có nồng độ là: 0,01 mg/ml; 0,02 mg/ml; 0,04 mg/ml; 0,06 mg/ml; 0,08 mg/ml 0,1 mg/ml đo độ hấp thụ bước sóng 430 nm máy đo quang phổ kế Synergy HT (Biotek), kết đo thể bảng 3.1 Bảng 3.1 Giá trị OD nồng độ curcumin mẫu chuẩn Tên mẫu Nồng độ (mg/ml) OD 430 nm STD1 0.1 3.404 STD2 0.08 2.937 STD3 0.06 2.249 STD4 0.04 1.544 STD5 0.02 0.817 STD6 0.01 0.416 43Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 37 http://www.lrc-tnu.edu.vn Dựa vào nồng độ độ hấp thụ đo được, sử dụng phần mền Gen5 máy đo quang phổ kế Synergy HT để xây dựng đường chuẩn curcumin (hình 3.10) Đường tương quan tuyến tính có phương trình: Y = 33,7X + 0,151 Trong đó: X nồng độ curcumin dung dịch (mg/ml) Y độ hấp thụ đo (OD) Hệ số tương quan R2 0,9902, phương trình sử dụng để tính nồng độ curcumin biết độ hấp thụ Hình 3.10 Đường chuẩn curcumin Hiệu suất đóng gói curcumin hạt nano Chi-PF tính tốn gián tiếp dựa vào lượng curcumin dư thừa (lượng curcumin tự do) khơng đóng gói nằm dịch sau ly tâm Theo giá trị OD đo được, dựa vào phương trình tuyến tính đường tương quan tuyến tính độ hấp thu nồng độ curcumin (đường chuẩn curcumin) xác định nồng độ curcumin khơng đóng gói dịch sau ly tâm 44Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 38 http://www.lrc-tnu.edu.vn Hàm lượng curcumin tự dịch sau ly tâm tính tốn theo cơng thức: Lượng curcumin tự (mg) = A.N.V Trong đó: A hệ số pha loãng N nồng độ curcumin tự dịch sau ly tâm V thể tích dịch sau ly tâm (ml) Bảng 3.2 Giá trị OD, nồng độ hàm lượng curcumin tự Mẫu OD430 Nồng độ (mg/ml) Hàm lượng (mg) Bank 0,048 0,00 0,00 Curcumin tự 0,812 0,0196 3,92 Dựa vào cơng thức tính hiệu suất đóng gói, chúng tơi tính tốn hiệu suất đóng gói curcumin sau: Như hiệu suất đóng gói curcumin hạt nano Chi-PF 60,8 %, kết tương ứng với kết nghiên cứu Hosniyeh H Cs (2012) 3.5 Tính thấm hạt nano vào tế bào HEKA293 Hạt nano Chi-PF tích hợp curcumin, cấu tạo bao gồm lõi khối cầu PF hình thành qua trình tự lắp ráp sử dụng nồng độ micelle tới hạn [63,64] Tiếp theo lớp chitosan phủ bề mặt hạt nano cách sử dụng tương tác tĩnh điện chitosan tích điện dương PF tích điện âm Chitosan polymer có tính phân hủy sinh học tương thích sinh học, vỏ chitosan bảo vệ hợp chất có hoạt tính sinh học khỏi q trình phân hủy tự nhiên thủy phân đo kéo dài thời gian tồn thuốc hệ thống tuần hoàn [65,66] Hạt nano co-polymer (PF) 45Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 39 http://www.lrc-tnu.edu.vn ghép cộng hóa trị với chitosan, chitosan tích điện dương nên dễ dàng hấp phụ bề mặt tế bào nhờ tương tác điện tích thấm vào tế bào thơng qua q trình nội bào hóa (endocytosis) [67] Sau vào bên tế bào, hoạt chất phóng thích theo chế hợp hóa với thể lysosome tiêu thụ hạt nano tương tác làm phá vỡ thể nội bào môi trường tế bào chất Vỏ chitosan bị phá hủy enzyme lysozyme, làm phá vỡ micelle giải phóng curcumin Tế bào HEKA293 ủ với hạt nano Chi-PF tích hợp curcumin 24h, sau tiến hành quan sát kính hiển vi huỳnh quang (hình 3.11) (a) (b) (c) Hình 3.11 Sự phát quang curcumin tế bào HEKA293 (a) Ảnh truyền qua, (b) Ảnh huỳnh quang truyền qua (c) Ảnh huỳnh quang Hình ảnh phát huỳnh quang cho thấy, curcumin xâm nhập vào tế bào HEK trường kính quan sát Tuy nhiên, có vài tế bào, chiếm tỷ lệ nhỏ tổng số tế bào, phát huỳnh quang màu xanh sau ủ với nano Chi-PF tích hợp curcumin Điều cho thấy hiệu hấp thu tế bào không cao Kết phù hợp với nghiên cứu trước Manaspon cs, cho có 15% thuốc chống ung thư tích lũy sau 24h 46Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 40 http://www.lrc-tnu.edu.vn KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Đã chế tạo thành công nano chitosan phương pháp tạo gel ion sử dụng TPP Hạt nano chitosan tạo có dạng hình cầu, đồng với kích thước trung bình 119,9 nm Đã tạo hạt nano Chi-PF tích hợp curcumin phương pháp tự lắp ráp đơn giản, không cần sử dụng dung môi hữu độc hại Ảnh chụp SEM chụp TEM cho thấy hạt có dạng hình cầu, đồng Kích thước trung bình hạt 151 nm, zeta 5,09 mV Sự tương phản chitosan PF ảnh chụp TEM cho thấy hợp PF bên cấu trúc hạt nano chitosan Ảnh soi huỳnh quang cho thấy curcumin tích hợp vào bên cấu trúc hạt nano với hiệu suất đóng gói 60,8% Bước đầu kiểm tra tính thấm hạt nano vào tế bào HEK293 KIẾN NGHỊ Tối ưu hóa quy trình tạo hạt nano Chi-PF tích hợp curcumin nhằm tăng hiệu suất đóng gói curcumin Thử độc tính hạt nano tạo tế bào ung thư, từ hướng đến ứng dụng để làm thuốc điều trị ung thư 47Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 41 http://www.lrc-tnu.edu.vn TÀI LIỆU THAM KHẢO Purusotam Basnet and Natasa Skalko-Basnet, 2011, Curcumin: An AntiInflammatory Molecule from a Curry Spice on the Path to Cancer Treatment Molecules 2011, 16, 4567-4598 Bohorquez M, Koch C, Trygstad T, and Pandit N 1999, J Colloid Interf Sc 216(1), 34-40 Wenzel JGW, Balaji K, Koushik K, et al 2002, J Control Release 85(1-3), 51-59 Veyries M, Couarraze G, Geiger S, et al 1999, Int J Pharm 192(2), 183193 Bae KH, Ha YJ, Kim C, Lee KR, and Park TG 2008, Journal of Biomaterials Science 19(12), 1571-1583 Agnihotri SA, Mallikarjuna NN, Aminabhavi TM, 2004, J Control Release 100(1), 5-28 Hosniyeh H, Fatemeh A, Rassoul D, and Aeyed NO 2012, Int J Nanomedicine 7, 1851-1863 Nguyễn Minh Đức, Trương Cơng Trí, 2010, Hạt nano: kỹ thuật bào chế, phân tích tính chất ứng dụng ngành dược, Nxb Y học HCM Kumar MNVR, 2002, A review of chitin and chitosan applications, Reactive & Functional Polymers, 46, 1-27 10 Rinaudo M, 2006, Chitin and chitosan: Properties and applications, Progress in Ploymer Science, 31, 603-632 11 Zhang H, Wu S, Tao Y, Zang L, Su Z, 2010, Preparation and Characterrization of Water-Soluble Chitosan nanoparticles as Protein Delivery System, Journal of Nanometerials, 1-5 48Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 42 http://www.lrc-tnu.edu.vn 12 Tiyaboonchai W, 2003, Chitosan Nanoparticles: APromising System for Drug Delivery, Naresuan University Journal, 11 (3), 51-66 13 Gan Q, Wang T, 2007, Chitosan nanoparticle as protein delivery carrierSystematic examineation of fabrication conditions for efficient loading and release, Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, 59, 24-34 14 Du WL, Niu SS, Xu YL, Xu ZR, Fan CL, 2009, Antibacterial activity of chitosan tripolyphosphate nanoparticles loaded with various metal ions, Carbohydrate Plymers, 75, 385-389 15 Qui L, Xu Z, Jiang X, Hu C, Zou X, 2004, Preparation and antibacterial activity of chitosan nanoparticles, Carbohydrate Reasearch, 339, 26932700 16 Chen L, Remondetto GE, Subirade M, 2006, Food protein-based materials as nutraceutical delivery systems, Trends in Food Science & Technology, 17, 272-283 17 Chen L, Subirade M, 2005, Chitosan/β-lactoglobulin core-shell nanoparticles as nutraceutical carriers, Biomaterials, 26, 6041-6053 18 Gan Q, Wang T, Cochrane C, McCarron P, 2005, Modulation of surface charge, particle size and morphological properties of chitosan-TPP nanoparticles intended for gene delivery, Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, 44, 65-73 19 Nguyễn Anh Dũng, 2010, Nghiên cứu chế tạo vật liệu nano chitosan làm tá chất miễn dịch cho vaccine cum A H5N1 xây dựng mơ hình thử nghiệm động vật, Trường Đại học Tây Nguyên, Thành Phố Hồ Chí Minh 20 Trần Đại Lâm, Phùng Nguyễn Hào, 2006, Tổng hợp, đặc trưng ứng dụng dẫn thuốc chitosan nano, Tạp chí phân tích Hóa, Lý Sinh học, 11 (3), 70-86 49Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 43 http://www.lrc-tnu.edu.vn 21 Conney A, 2003, Enzyme induction and dietary chemicals as approaches to cancer chemoprevention: The seventh DeWitt S, Goodman lecture, Cancer Res, 63, 7005-7031 22 Aggarwal BB, Surh YJ, Shishodia S, Eds, 2007, Advances in experimental medicine and biology, In The Molecular Target and Therapeutic Uses of Curcumin in Health and Disease, Springer: New York, NY, USA 23 Roughley PJ, Whiting DA, 1973, Experiments in the biosynthesis of curcumin, J Chem Soc Perkin Trans 1, 20, 2379-2388 24 Basnet P, Tho I, Skalko-Basnet N Curcumin, 2010, A Wonder Drug of 21st Century: Liposomal Delivery System Targeting Vaginal Inflammation, 5th International Congress on Complementary Medicine Research, Tromsø, Norway, Abstract Number A9M2K9C 25 Jovanovic SV, Steenken S, Boone CW, Simic MG, 1999, H-atom transfer is a preferred antioxidant mechanism of curcumin, J Am Chem Soc, 121, 9677-9681 26 Wahlstrom B, Blennow GA, 1978, Study on the fate of curcumin in the rat, Acta Pharmacol Toxicol (Copenh), 43, 86-92 27 Ravindranath V, Chandrasekhara N, 1981, In vitro studies on the intestinal absorption of curcumin in rats, Toxicology, 20, 251-257 28 Ravindranath V, Chandrasekhara N, 1981, Metabolism of curcumin: Studies with curcumin, Toxicology, 22, 337-344 29 Holder GM, Plummer JL, Ryan AJ, 1978, The metabolism and excretion of curcumin (1,7-bis-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-1,6- heptadiene-3,5- dione) in the rat, Xenobiotica, 8, 761-768 50Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 44 http://www.lrc-tnu.edu.vn 30 Shoba G, Joy D, Joseph T, Majeed M, Rajendran R, Srinivas PS, 1998, Influence of piperine on the pharmacokinetics of curcumin in animals and human volunteers, Planta Med, 64, 353-356 31 Strimpakos AS, Sharma RA, 2008, Curcumin: Preventative and therapeutic properties in laboratory studies and clinical trials, Antioxid Redox Sign, 10, 511-545 32 Kurien BT, Scofield RH, 2009, Oral administration of heat-solubilized curcumin for potentially increasing curcumin bioavailability in experimental animals, Int J Cancer, 125, 1992-1993 33 Zebib B, Mouloungui Z, Noirot V,2010, Stabilization of curcumin by complexation with divalent cations in glycerol/water system, Bioinorg Chem Appl, doi:10.1155/2010/292760 34 Kudva AK, Manoj MN, Swamy BN, Ramadoss CS, 2011, Complexation of amphoterecin B and curcumin with serum albumin: Solubility and effect on erythrocyte membrane damage, J Expt Pharmacol, 3, 1-6 35 Qiu X, Du Y, Lou B, Zuo Y, Shao W, Huo Y, Huang J, Yu Y, Zhou B, Du J, Fu H, Bu X, 2010, Synthesis and identification of new 4-arylidene curcumin analogues as potential anticancer agents targeting nuclear factorκB signaling pathway, J Med Chem, 53, 8260-8273 36 Safavy A, Raisch KP, Mantena S, Sanford LL, Sham SW, Rama Krishna N, Bonner JA, 2007, Design and development of water-soluble curcumin conjugates as potential anti-cancer agents, J Med Chem, 50, 6284-6288 37 Ma Z, Haddadi A, Molavi O, Lavasanifar A, Lai R, Samuel J, 2008, Micelles of poly(ethylene oxide)-b-poly(ε-caprolactone) as vehicles for the solubilization, stabilization, and controlled delivery of curcumin, J Biomed Materials Res, Part A, 86A, 300-310 51Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 45 http://www.lrc-tnu.edu.vn 38 Song Z, Feng R, Sun M, Guo C, Gao Y, Li L, Zhai G, 2011, Curcuminloaded PLGA-PEG-PLGA triblock copolymeric micelles: Preparation, pharmacokinetics and distribution in vivo, J Colloid Interface Sci, 354, 116-123 39 Shaikh J, Ankola DD, Beniwal V, Singh D, Ravi Kumar MNV, 2009, Nanoparticle encapsulation improves oral bioavailability of curcumin by at least 9-fold when compared to curcumin administered with piperine as absorption enhancer, Eur J Pharm Sci, 37, 223-230 40 Tsai YM, Jan WC, Chien CF, Lee WC, Lin LC, Tsai TH, 2011, Optimized nano-formulation on the bioavailability of hydrophobic polyphenol, curcumin, in freely-moving rats, Food Chem, 127, 918-925 41 Anitha A, Deepagan VG, Divya Rani VV, Menon D, Nair SV, Jayakumar R, 2011, Preparation, characterization, in vitro drug release and biological studies of curcumin loaded dextran sulphate-chitosan nanoparticles, Carbohyd Polym, 84, 1158-1164 42 Bisht S, Feldmann G, Soni S, Ravi R, Karikar C, Maitra A, 2007, Polymeric nanoparticle-encapsulated curcumin (“nanocurcumin”): A novel strategy for human cancer therapy, J Nanobiotechnol, 5, 1-18 43 Bhawana, Basniwal RK, Buttar HS, Jain VK, Jain N, 2011, Curcumin nanoparticles: preparation, characterization, and antimicrobial study, J Agric Food Chem, 59, 2056-2061 44 Wu W, Shen J, Banerjee P, Zhou S, 2011, Water-dispersible multifunctional hybrid nanogels for combined curcumin and photothermal therapy, Biomaterials, 32, 598-609 45 Gupta NK, Dixit VK, 2011, Bioavailability enhancement of curcumin by complexation with phosphatidylcholine, J Pharm Sci, 100, 1987-1995 52Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 46 http://www.lrc-tnu.edu.vn 46 Sou K, Inenaga S, Takeoka S, Tsuchida E, 2008, Loading of curcumin into macrophages using lipid-based nanoparticles, Int J Pharm, 352, 287-293 47 Kakkar V, Singh S, Singla D, Kaur IP, 2011, Exploring solid lipid nanoparticles to enhance the oral bioavailability of curcumin, Mol Nutr Food Res, 55, 495-503 48 Mulik RS, Moenkkoenen J, Juvonen RO, Mahadik KR, Paradkar AR, 2010, Transferrin mediated solid lipid nanoparticles containing curcumin: enhanced in vitro anti-cancer activity by induction of apoptosis, Int J Pharm, 398, 190-203 49 Yadav VR, Suresh S, Devi K, Yadav S, 2009, Novel formulation of solid lipid microparticles of curcumin for anti-angiogenic and anti-inflammatory activity for optimization of therapy of inflammatory bowel disease, J Pharm Pharmacol, 61, 311-321 50 Di Cagno M, Styskala J, Hlaváč J, Brandl M, Bauer-Brandl A, SkalkoBasnet N, 2011, Liposomal solubilization of new 3-hydroxy-quinolinone derivatives with promising anti-cancer activity: A screening method to identify maximum incorporation capacity, J Liposome Res, doi:10.3109/08982104.2010.550265 51 Kunwar A, Barik A, Pandey R, Priyadarsini IK, 2006, Transport of liposomal and albumin loaded curcumin to living cells: An absorption and fluorescence spectroscopic study, BBA-Gen Subjects, 1760, 1513-1520 52 Chen C, Johnston TD, Jeon H, Gedaly R, McHugh PP, Burke TG, Ranjan D, 2009, An in vitro study of liposomal curcumin: Stability, toxicity and biological activity in human lymphocytes and Epstein-Barr virustransformed human B-cells, Int J Pharma, 366, 133-139 53Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 47 http://www.lrc-tnu.edu.vn 53 Li L, Braiteh FS, Kurzrock R, 2005, Liposome-encapsulated curcumin: In vitro and in vivo effects on proliferation, apoptosis, signalling, and angiogenesis, Cancer, 104, 1322-1331 54 Li L, Ahmed B, Mehta K, Kurzrock R, 2007, Liposomal curcumin with and without oxaliplatin: Effects on cell growth, apoptosis, and angiogenesis in colorectal cancer, Mol Cancer Ther, 6, 1276-1282 55 Thangapazham RL, Puri A, Tele S, Blumenthal R, Maheshwari RK, 2008, Evaluation of a nanotechnology-based carrier for delivery of curcumin in prostate cancer cells, Int J Oncol, 32, 1119-1123 56 Wang D, Veena MS, Stevenson K, Tang C, Ho B, Suh JD, Duarte VM, Faull KF, Mehta K, Srivatsan ES, Wang MB, 2008, Liposomeencapsulated curcumin suppresses growth of head and neck squamous cell carcinoma in vitro and in xenografts through the inhibition of nuclear factor-κB by an AKT-independent pathway, Clin Cancer Res, 14, 62286236 57 Takahashi M, Inafuku K, Miyagi T, Oku H, Wada K, Imura T, Kitamoto D, Efficient preparation of liposomes encapsulating food materials using lecithins by a mechanochemical method, J Oleo Sci, 56, 35-42 58 Aukunuru J, Joginapally S, Gaddam N, Burra M, Bonepally CR, Prabhakar K, 2009, Preparation, characterization and evaluation of hepatoprotective activity of an intravenous liposomal formulation of bis-demethoxy curcumin analogue (BDMCA), Int J Drug Dev Res, 1, 37-46 59 Narayanan NK, Nargi D, Randolph C, Narayanan BA, 2009, Liposome encapsulation of curcumin and resveratrol in combination reduces prostate cancer incidence in PTEN knockout mice, Int J Cancer, 125, 1-8 54Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 48 http://www.lrc-tnu.edu.vn 60 Mourtas S, Canovi M, Zona C, Aurilia D, Niarakis A, La Ferla B, Salmona M, Nicotra F, Gobbi M, Antimisiaris SG, 2011, Curcumin-decorated nanoliposomes with very high affinity for amyloid-β1-42 peptide, Biomaterials, 32, 1635-1645 61 Moghaddam FA, Atyabi F, Dinarvand R 2009, Nanomedicine 5(2), 208215 62 Calvo P, Remunan LC, Vila Jato J, and Alonso M 1997, Appl Polym Sci 63 (1), 125-132 63 Sharma PK and Bhatia SR 2004, Int J Pharm 278(2), 361-377 64 Kabanov AV, Lemieux P, Vinogradov, and Alakhov V 2002, Advanced Drug Delivery Reviews 54(2), 223-233 65 Zhongli L., Shuxian B 2007, Enz and Microbial technology 40(5), 14421447 66 Beom K, Cheol-Sang K, and Kang-Min L 2008, Archives of Pharm Research 31(8), 1050-1054 67 Stromhaug PE, Berq TO, Gjoen T, and Seglen PO 1997, European Journal of Cell Biology 73(1), 28-39 55Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 49 http://www.lrc-tnu.edu.vn ... thực đề tài: “ Nghiên cứu tạo phức hệ nano tích hợp curcumin? ?? với mục tiêu: - Tạo phức hệ nano tích hợp curcumin - Kiểm tra, đánh giá phức hệ nano tạo - Khảo sát tính thấm hạt nano vào tế bào... thu hạt nano chitosan 2.2.3 Phương pháp tạo phức hệ nano tích hợp curcumin Sau tạo nano chitosan, PF-127 tích hợp vào nano chitosan cách bổ sung PF 15% (w/v) dung dịch TPP 0,25% (w/v) Curcumin. .. dụng dung môi hữu độc hại, không cần tinh tạo hạt nano [7] Sự kết hợp polymer-micelles, phức hệ nano Chitosan-PF tích hợp curcumin tạo hệ vận chuyển curcumin đầy hứa hẹn Xuất phát từ sở khoa