Tổng hợp nghiên cứu phức chất của honmi ecbi với l tyrosin l tryptophan và bước đầu thăm dò hoạt tính sinh học của chúng

ðẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ðẠI HỌC SƯ PHẠM TRƯƠNG THỊ HUÂN TỔNG HỢP, NGHIÊN CỨU PHỨC CHẤT CỦA HONMI, ECBI VỚI L – TYROSIN, L – TRYPTOPHAN VÀ BƯỚC ðẦU THĂM DỊ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CHÚNG LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC HOÁ HỌC Thái Nguyên - Năm 2013 ðẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ðẠI HỌC SƯ PHẠM TRƯƠNG THỊ HUÂN TỔNG HỢP, NGHIÊN CỨU PHỨC CHẤT CỦA HONMI, ECBI VỚI L – TYROSIN, L – TRYPTOPHAN VÀ BƯỚC ðẦU THĂM DỊ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CHÚNG Chun ngành : Hố vơ Mã số: 60 44 0113 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC HOÁ HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Lê Hữu Thiềng Thái Nguyên - Năm 2013 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn LỜI CẢM ƠN Luận văn hồn thành khoa Hóa học, trường ðại học Sư phạm, ðại học Thái Nguyên Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Lê Hữu Thiềng, ñã giao ñề tài, hướng dẫn tận tình, chu đáo giúp đỡ em suốt q trình thực đề tài Em xin chân thành cảm ơn thầy giáo, cô giáo ban Giám hiệu, phịng Quản lý đào tạo Sau đại học, khoa Hóa học - trường ðại học Sư phạm, ðại học Thái Nguyên, phòng máy Viện Khoa học Sự sống – ðại học Thái Nguyên, phòng máy quang phổ hồng ngoại, phòng thử hoạt tính sinh học Viện Hóa học – Viện Khoa học Cơng nghệ Việt Nam, phịng thí nghiệm Hóa lý trường ðại học Sư phạm I Hà Nội ñã tạo ñiều kiện thuận lợi cho em suốt trình học tập nghiên cứu thực ñề tài Xin chân thành cảm ơn bạn bè ñồng nghiệp ñã giúp ñỡ, ñộng viên, tạo ñiều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình thực nghiệm hoàn thành luận văn Cùng với biết ơn sâu sắc xin chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu, tổ Hố-Sinh trường THPT Lê Hồng Phong giúp đỡ, động viên tơi suốt q trình học tập hoàn thành luận văn Thái Nguyên, tháng 05 năm 2013 Tác giả Trương Thị Huân Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn LỜI CAM ðOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tác giả Trương Thị Hn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn MỤC LỤC Trang Trang bìa phụ Lời cảm ơn Lời cam ñoan Mục lục i Danh mục ký hiệu, từ viết tắt iii Danh mục bảng iv Danh mục hình vi MỞ ðẦU Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Sơ lược nguyên tố ñất khả tạo phức chúng 1.1.1 ðặc ñiểm cấu tạo tính chất chung NTðH 1.1.2 Giới thiệu số hợp chất NTðH 1.1.3 Sơ lược nguyên tố honmi, ecbi 1.2 Giới thiệu L – tyrosin, L – tryptophan 14 1.2.1 Giới thiệu L – tyrosin 14 1.2.2 Giới thiệu L- tryptophan 16 1.3 Khả tạo phức NTðH với aminoaxit 18 1.3.1 Khả tạo phức NTðH 18 1.3.2 Khả tạo phức NTðH với aminoaxit 20 1.4 Hoạt tính sinh học phức chất NTðH với aminoaxit 21 1.5 Một số phương pháp nghiên cứu phức rắn 22 1.5.1 Phương pháp phân tích nhiệt 22 1.5.2 Phương pháp phổ hấp thụ hồng ngoại 23 1.5.3 Phương pháp ño ñộ dẫn ñiện 24 i Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 1.6 Thăm dị hoạt tính sinh học phức chất 26 1.6.1 Hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm ñịnh 26 1.6.2 Giới thiệu ngô, protein, proteaza α-amilaza 28 Chương 2: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 31 2.1 Hóa chất thiết bị 31 2.1.1 Hóa chất 31 2.1.2 Thiết bị 32 2.2 Tổng hợp phức chất rắn xác ñịnh thành phần chúng 33 2.2.1 Tổng hợp phức chất rắn 33 2.2.2 Xác ñịnh thành phần phức chất 33 2.3 Nghiên cứu phức chất phương pháp phân tích nhiệt 35 2.4 Nghiên cứu phức chất phương pháp phổ hấp thụ hồng ngoại 40 2.5 Nghiên cứu phức chất phương pháp ño ñộ dẫn ñiện 45 2.6 Bước ñầu thăm dị hoạt tính sinh học số phức chất NTðH với L – tyrosin, L – tryptophan 47 2.6.1 Thăm dò ảnh hưởng hàm lượng phức [Ho(tryp)3]Cl3.3H2O, [Er(tryp)3]Cl3.3H2O ñến nảy mầm phát triển mầm hạt ngơ 47 2.6.2 Hoạt tính kháng khuẩn phức chất 62 KẾT LUẬN 63 TÀI LIỆU THAM KHẢO 64 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC CĨ LIÊN QUAN ðẾN LUẬN VĂN ii Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT STT Chữ viết tắt Chữ viết ñầy ñủ ADN Axit ñeoxyribo Nucleic DMSO ðimetyl sunphooxit DTA Differential thermal analysis (phân tích nhiệt vi phân) DTPA ðietylen triamin pentaaxetic EDTA Etylen ñiamin tetraaxetic IMDA Iminoñiaxetic IR Infared (hồng ngoại) Ln Lantanit Ln3+ Ion Lantanit 10 NTðH Nguyên tố ñất 11 TGA Thermogravimetry or Thermogravimetry analysis (phân tích trọng lượng nhiệt) 12 Tyr Tyrosin 13 Tryp Tryptophan iii Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 1.1 Các phân nhóm dãy ngun tố đất Bảng 1.2 Một số thơng số vật lí nguyên tố honmi, ecbi Bảng 1.3 Một số ñặc ñiểm L – tyrosin 14 Bảng 2.1 Kết phân tích thành phần (%) nguyên tố (Ln, C, N,Cl) phức chất 35 Bảng 2.2 Kết phân tích giản đồ nhiệt phức chất 38 Bảng 2.3 Các tần số hấp thụ ñặc trưng (cm-1) L – tyrosin, L - tryptophan phức chất 43 Bảng 2.4 ðộ dẫn điện mol phân tử (µ) L – tyrosin, L – tryptophan phức chất 25 ± 0,50C 46 Bảng 2.5: Ảnh hưởng hàm lượng phức [Ho(tryp)3]Cl3.3H2O, [Er(tryp)3]Cl3.3H2O ñến nảy mầm hạt ngô 48 Bảng 2.6: Ảnh hưởng phức chất [Ho(tryp)3]Cl3.3H2O ñến phát triển mầm hạt ngô 48 Bảng 2.7: Ảnh hưởng phức chất [Er(tryp)3]Cl3.3H2O ñến phát triển mầm hạt ngô 49 Bảng 2.8: Ảnh hưởng hàm lượng phức [Ho(tryp)3]Cl3.3H2O, HoCl3 Ltryptophan ñến nảy mầm hạt ngô 51 Bảng 2.9: Ảnh hưởng hàm lượng phức [Er(tryp)3]Cl3.3H2O, ErCl3 Ltryptophan ñến nảy mầm hạt ngô 51 Bảng 2.10: Kết so sánh ảnh hưởng phức [Ho(tryp)3]Cl3.3H2O, HoCl3 L- tryptophan ñến phát triển mầm hạt ngô 52 Bảng 2.11: Kết so sánh ảnh hưởng phức [Er(tryp)3]Cl3.3H2O, ErCl3 L- tryptophan ñến phát triển mầm hạt ngô 53 Bảng 2.12: Sự phụ thuộc ñộ hấp thụ quang vào khối lượng protein 54 iv Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Bảng 2.13: Sự phụ thuộc ñộ hấp thụ quang vào nồng ñộ tyrosin 55 Bảng 2.14 Sự phụ thuộc ñộ hấp thụ quang vào khối lượng tinh bột 56 Bảng 2.15: Ảnh hưởng phức chất [Ho(tryp)3]Cl3.3H2O ñến hàm lượng protein ngô 57 Bảng 2.16: Ảnh hưởng phức chất [Er(tryp)3]Cl3.3H2O ñến hàm lượng protein ngô 58 Bảng 2.17: Ảnh hưởng phức chất [Ho(tryp)3]Cl3.3H2O ñến hàm lượng proteaza hạt ngô 59 Bảng 2.18: Ảnh hưởng phức chất [Er(tryp)3]Cl3.3H2O ñến hàm lượng proteaza hạt ngô 60 Bảng 2.19: Ảnh hưởng phức chất [Ho(tryp)3]Cl3.3H2O ñến hàm lượng αamilaza mầm hạt ngô 61 Bảng 2.20: Ảnh hưởng phức chất [Er(tryp)3]Cl3.3H2O đến hàm lượng αamilaza mầm hạt ngơ 61 Bảng 2.21: Kết thử hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm phức chất 62 v Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Ngun http://www.lrc-tnu.edu.vn DANH MỤC HÌNH ẢNH Trang Hình 1.1 Nguyên tố Honmi Hình 1.2 Nguyên tố Ecbi 11 Hình 2.1 Giản đồ phân tích nhiệt phức chất Ho(tyr)3.3H2O 36 Hình 2.2 Giản đồ phân tích nhiệt phức chất Er (tyr)3.3H2O 36 Hình 2.3 Giản đồ phân tích nhiệt phức chất [Ho(tryp)3]Cl3.3H2O 37 Hình 2.4 Giản đồ phân tích nhiệt phức chất [Er(tryp)3]Cl3.3H2O 37 Hình 2.5 Phổ hấp thụ hồng ngoại L – tyrosin 40 Hình 2.6 Phổ hấp thụ hồng ngoại phức chất Ho(tyr)3.3H2O 41 Hình 2.7 Phổ hấp thụ hồng ngoại phức chất Er(tyr)3.3H2O 41 Hình 2.8 Phổ hấp thụ hồng ngoại L – tryptophan 42 Hình 2.9 Phổ hấp thụ hồng ngoại phức chất [Ho(tryp)3]Cl3.3H2O 42 Hình 2.10 Phổ hấp thụ hồng ngoại phức chất [Er(tryp)3]Cl3.3H2O 43 Hình 2.11 Ảnh hưởng phức chất [Ho(tryp)3]Cl3.3H2O ñến phát triển mầm hạt ngô 49 Hình 2.12 Ảnh hưởng nồng ñộ phức chất [Er(tryp)3]Cl3.3H2O ñến phát triển mầm hạt ngô 50 Hình 2.13 Ảnh hưởng nồng độ phức chất [Ho(tryp)3]Cl3.3H2O, HoCl3 L- tryptophan ñến phát triển mầm hạt ngô 52 Hình 2.14 Ảnh hưởng nồng độ phức chất [Er(tryp)3]Cl3.3H2O, ErCl3 L- tryptophan ñến phát triển mầm hạt ngơ 53 Hình 2.15 ðường chuẩn xác ñịnh protein 54 Hình 2.16 ðường chuẩn xác định proteaza 55 Hình 2.17 ðường chuẩn xác ñịnh α -amilaza 56 vi Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 2.6.1.6 Thăm dò ảnh hưởng phức chất ñến số tiêu sinh hóa có mầm hạt ngơ ðể xác định số tiêu sinh hóa: protein theo phương pháp Lowry, hoạt ñộ proteaza theo phương pháp Anson cải tiến, hoạt ñộ α - amilaza theo phương pháp Wohlgemuth chúng tơi tiến hành xây dựng đường chuẩn: * Xây dựng ñường chuẩn xác ñịnh protein: Dùng ống hút lấy 0,1 ÷ 0,5 ml dung dịch protein huyết bị (0,5 mg/ml) cho vào ống nghiệm đánh số từ ñến Cho vào ống ml dung dịch D (gồm 48 ml dung dịch Na2CO3 2% NaOH 0,1N, ml dung dịch CuSO4 0,5% 1ml dung dịch NaKC4H4O6 1%), thêm nước cất ñến thể tích ml Lắc đều, để n 15 phút, bổ sung vào ống ml dung dịch E (thuốc thử Folin-Xiocanto pha loãng với nước cất tỉ lệ 1:1), lại lắc ñều ñể yên 30 phút Mẫu so sánh khơng có protein: ml dung dịch D, ml nước ml dung dịch E ðo ñộ hấp thụ quang A dung dịch bước sóng 750 (nm) [16] Kết trình bày bảng 2.12, hình 2.15 Bảng 2.12: Sự phụ thuộc ñộ hấp thụ quang vào khối lượng protein M ẫu Khối lượng protein (huyết bò) (mg) 0,05 0,10 0,15 0,20 0,25 A750 0,0601 0,0986 0,1331 0,1821 0,2153 Hình 2.15: ðường chuẩn xác định protein 54 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn * Xây dựng ñường chuẩn xác ñịnh hoạt ñộ proteaza: Dùng ống hút lấy thể tích xác định dung dịch chuẩn tyrosin có nồng độ 1µmol/ml cho vào bình định mức cỡ 25 ml Dùng dung dịch HCl 0,2N pha lỗng đến vạch để dung dịch tyrosin có nồng độ 0,02; 0,04; 0,06; 0,08; 0,1 µmol/ml Lấy ml ống nghiệm cho vào ống nghiệm có đánh số thứ tự, thêm vào ống ml dung dịch Na2CO3 6% Lắc ñều, thêm vào 1ml thuốc thử Folin-Xiocanto pha lỗng lần, để n 30 phút nhiệt độ phịng Mẫu so sánh khơng có tyrosin: ml nước cất, ml dung dịch Na2CO3 6% ml thuốc thử Folin-Xiocanto ðo ñộ hấp thụ quang dung dịch bước sóng 750 nm Kết trình bày bảng 2.13, 2.14 hình 2.16, 2.17 Bảng 2.13: Sự phụ thuộc ñộ hấp thụ quang vào nồng ñộ tyrosin Mẫ u tyrosin (1µmol/ml ) 0,02 0,04 0,06 0,08 0,1 A750 0,0454 0,0903 0,141 0,1772 0,2212 Hình 2.16: ðường chuẩn xác định proteaza 55 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn * Xây dựng ñường chuẩn xác ñịnh hoạt ñộ α -amilaza: Dùng ống hút lấy 2, 4, 6, 8, 10ml dung dịch tinh bột 1% cho vào ống nghiệm ñánh số thứ tự từ ñến 5, thêm nước cất ñến 10ml Lấy 0,1ml dung dịch tinh bột ống nghiệm cho vào ống nghiệm khác, thêm vào 0,1ml dung dịch NaCl 0,1%, 0,2ml dịch ñệm pH=6, 0,1ml nước cất 0,5ml dung dịch axit sunfosalisilic 20%.Lắc ñều thêm vào 3ml dung dịch iot pha lỗng 150 lần.Dung dịch so sánh có thành phần tương tự khơng có tinh bột ðo ñộ hấp thụ quang dung dịch bước sóng 560nm Kết trình bày bảng 2.14, hình 2.17 Bảng 2.14 Sự phụ thuộc độ hấp thụ quang vào khối lượng tinh bột M ẫu Khối lượng tinh bột (mg) 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 A560 0,08 0,19 0,28 0,37 0,48 Hình 2.17: ðường chuẩn xác định α -amilaza 2.6.1.7 Ảnh hưởng phức chất ñến hoạt ñộ protein mầm hạt ngơ Phương pháp thí nghiệm: Cân mẫu gam mầm hạt ngô, nghiền cối chày sứ, thêm vào mẫu 10ml dung dịch đệm photphat có pH = 6, trộn ñều, chiết 10 tiếng 4oC lọc li tâm, lấy phần dịch 56 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Lấy mẫu 0,2 ml dịch chiết cho vào ống nghiệm có đánh số, thêm vào ống nghiệm ml dung dịch D, bổ sung thêm nước cất đến thể tích ml, lắc ñều, ñể yên 15 phút Sau ñó lại thêm vào ống ml dung dịch E, lắc ñều tiếp tục để n 30 phút Mẫu so sánh khơng có dịch chiết: ml dung dịch D, ml nước ml dung dịch E ðo ñộ hấp thụ quang mẫu thí nghiệm bước sóng 750 nm ðối chiếu với đường chuẩn protein, tính số mg protein có mẫu Hàm lượng protein tính theo cơng thức : X= Trong đó: a⋅ HSPL ⋅ 100 % m X: Hàm lượng protein (% khối lượng khơ) a: Nồng độ thu đo máy (mg/ml) HSPL: Hệ số pha loãng m: Khối lượng mẫu (mg) Kết phân tích hàm lượng protein mầm hạt ngơ tác động phức chất [Ho(tryp)3]Cl3.3H2O (dựa theo cơng thức đường chuẩn hình 2.15) trình bày bảng số 2.15 Bảng 2.15: Ảnh hưởng phức chất [Ho(tryp)3]Cl3.3H2O đến hàm lượng protein mầm ngơ Nồng ñộ phức (ppm) Hàm lượng protein (%) % so với ñối chứng 21,25 100,00 30 23,32 109,74 60 24,46 115,11 120 25,08 118,02 180 26,14 123,01 240 27,01 127,11 57 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Kết phân tích hàm lượng protein mầm ngơ tác động phức chất [Er(tryp)3]Cl3.3H2O (dựa theo cơng thức đường chuẩn hình 2.15) ñược trình bày bảng số 2.16 Bảng 2.16: Ảnh hưởng phức chất [Er(tryp)3]Cl3.3H2O ñến hàm lượng protein mầm hạt ngơ Nồng độ phức (ppm) Hàm lượng protein (%) % so với ñối chứng 21,23 100,00 30 23,22 109,54 60 24,41 114,11 120 25,18 117,02 180 25,14 121,04 240 27,31 127,25 Nhận xét: Qua bảng 2.15, 2.16 thấy rằng: khoảng nồng ñộ khảo sát từ 30 ppm đến 240ppm, phức chất có tác dụng làm tăng hàm lượng protein hàm lượng protein tăng theo nồng ñộ 2.6.1.8 Ảnh hưởng phức chất ñến hoạt ñộ proteaza mầm hạt ngô Phương pháp thí nghiệm: Cân mẫu gam mầm hạt ngơ, nghiền cối chày sứ, thêm vào mẫu 10ml dung dịch đệm photphat xitrat có pH = 6, trộn ñều, chiết tiếng 4oC lọc li tâm, lấy phần dịch Cho vào ống nghiệm có đánh số thứ tự ml phối tử (tyrosin, tryptophan), ml dịch chiết mẫu, lắc ñều, ñể yên 300C 10 phút Thêm vào ống ml axit tricloaxetic, lắc ñều, tiếp tục giữ 300C 30 phút Mẫu kiểm tra làm tương tự cho dung dịch axit tricloaxetic vào trước Mẫu so sánh thay ml phối tử nước cất Cho vào ống nghiệm khác ml dung dịch lọc mẫu thí nghiệm, mẫu kiểm tra mẫu so sánh, thêm vào ống ml dung dịch Na2CO3 6% ml thuốc thử Folin-Xiocanto pha lỗng lần, lắc giữ 30 phút nhiệt độ phịng 58 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ðo độ hấp thụ quang mẫu thí nghiệm mẫu kiểm tra bước sóng 750 nm Lấy hiệu số giá trị ñộ hấp thụ quang mẫu kiểm tra mẫu thí nghiệm Dựa vào đồ thị chuẩn proteaza tính lượng µmol phối tử tương ứng Từ tính đơn vị hoạt độ proteaza Hoạt độ proteaza tính theo cơng thức: ðVHð/mg = Trong đó: (n − k ) ⋅ HSPL t ⋅m n: Số ño máy ống thí nghiệm (mg/ml) k: Số ño máy ống kiểm tra (mg/ml) HSPL: Hệ số pha loãng t: Thời gian ủ enzim với chất m: Khối lượng mẫu (mg) Kết phân tích hàm lượng proteaza ngơ tác động phức chất [Ho(tryp)3]Cl3.3H2O (dựa theo cơng thức đường chuẩn hình 2.16) trình bày bảng 2.18 Bảng 2.17: Ảnh hưởng phức chất [Ho(tryp)3]Cl3.3H2O ñến hàm lượng proteaza mầm hạt ngơ Nồng độ phức chất (ppm) ðơn vị hoạt độ (mg/ml) % so với ñối chứng 0,491 100.00 30 0,501 102,03 60 0,520 105,91 120 0,531 108,15 180 0,543 110,59 240 0,553 112,63 Kết phân tích hàm lượng proteaza mầm hạt ngơ tác động phức chất [Er(tryp)3]Cl3.3H2O (dựa theo cơng thức đường chuẩn hình 2.16) trình bày bảng 2.18 59 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Bảng 2.18: Ảnh hưởng phức chất [Er(tryp)3]Cl3.3H2O ñến hàm lượng proteaza mầm hạt ngơ Nồng độ phức chất (ppm) ðơn vị hoạt ñộ (mg/ml) % so với ñối chứng 0,493 100.00 30 0,521 102,13 60 0,523 105,81 120 0,534 108,25 180 0,545 110,49 240 0,557 112,68 Qua bảng 2.17, 2.18 thấy rằng: Trong khoảng nồng ñộ khảo sát từ 30 ppm ñến 240 ppm, phức chất có tác dụng làm tăng hàm lượng proteaza Hàm lượng proteaza tăng theo nồng ñộ 2.6.1.9 Ảnh hưởng phức chất ñến hàm lượng α - amilaza mầm hạt ngơ Phương pháp thí nghiệm: Cân mẫu gam mầm hạt ngô, nghiền cối chày sứ, thêm vào mẫu 10ml dung dịch đệm photphat có pH = 6, trộn ñều, chiết tiếng 4oC lọc li tâm, lấy phần dịch Cho vào ống nghiệm có đánh số thứ tự 1ml dung dịch tinh bột 1%, 1ml dung dịch NaCl 0,1%, 2ml dung dịch ñệm phốt phát 0,05M ( pH= 6), lắc ñều giữ 30oC 15 phút , thêm vào hỗn hợp 1ml dung dịch chiết mẫu, lắc ñều tiếp tục giữ 30oC 30 phút sau cho 5ml dung dịch axit sunfusalisilic 20% Mẫu so sánh: gồm 1ml dung dịch chiết mẫu thí nghiệm, 9ml dung dịch iốt pha lỗng 150 lần ðo độ hấp thụ quang A dung dịch bước sóng 560 nm Từ tính đơn vị hoạt độ α-amilaza Hoạt độ α-amilaza tính theo cơng thức: 60 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ðVHð/mg = Trong đó: (k − n) ⋅ HSPL m n: Số đo máy ống thí nghiệm (mg/ml) k: Số ño máy ống kiểm tra (mg/ml) HSPL: Hệ số pha loãng m: Khối lượng mẫu (mg) Kết phân tích hàm lượng α-amilaza mầm hạt ngơ tác động phức chất [Ho(tryp)3]Cl3.3H2O (dựa theo cơng thức ñường chuẩn hình 2.17) ñược trình bày bảng số 2.19 Bảng 2.19: Ảnh hưởng phức chất [Ho(tryp)3]Cl3.3H2O ñến hàm lượng α-amilaza mầm hạt ngơ Nồng độ phức chất (ppm) ðơn vị hoạt ñộ (mg/ml) % so với ñối chứng 0,0338 100,00 30 0,0345 102,07 60 0,0359 106,21 120 0,0370 109,47 180 0,0382 113,02 240 0,0391 115,68 Kết phân tích hàm lượng α-amilaza mầm hạt ngơ tác động phức chất [Er(tryp)3]Cl3.3H2O (dựa theo cơng thức đường chuẩn hình 2.17) trình bày bảng số 2.20 Bảng 2.20: Ảnh hưởng phức chất [Er(tryp)3]Cl3.3H2O đến hàm lượng α-amilaza mầm hạt ngơ Nồng ñộ phức chất (ppm) ðơn vị hoạt ñộ (mg/ml) % so với ñối chứng 0,0341 100,00 30 0,0346 102,17 60 0,0363 106,23 120 0,0373 109,57 180 0,0380 113,12 240 0,0393 115,69 61 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Qua bảng 2.19, 2.20 thấy rằng: Trong khoảng nồng ñộ khảo sát từ 30 ppm đến 240 ppm, phức chất có tác dụng làm tăng hàm lượng α-amilaza Hàm lượng α-amilaza tăng theo nồng ñộ 2.6.2.Hoạt tính kháng khuẩn phức chất Mẫu nghiên cứu tiến hành phịng Thử hoạt tính Sinh học - Viện Hóa học – Viện Khoa học Cơng nghệ Việt Nam Kết thử hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm phức chất ñược bảng 2.21 Bảng 2.21: Kết thử hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm phức chất Tên chủng vi sinh vật kiểm ñịnh Tên mẫu Ho-tyr Er-tyr Ho-tryp Er-tryp Giá trị IC50 (µg/ml) Bacillus subtilis >128 >128 >128 >128 Staphylococcus aureus >128 >128 >128 >128 Escherichia coli >128 >128 >128 >128 Pseudomonas aeruginosa >128 >128 >128 >128 Candida albicans >128 >128 >128 >128 Lactobacillus fermentum >128 >128 >128 >128 Enterococcus faecium >128 >128 >128 >128 Kết thử khả kháng khuẩn, kháng nấm phức chất cho thấy nồng ñộ thử với chủng khuẩn nấm đem thử phức chất chưa thể hoạt tính sinh học Kết đóng góp cho lĩnh vực nghiên cứu mối quan hệ cấu tạo hoạt tính sinh học phức chât có tyrosin, tryptophan sau 62 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn KẾT LUẬN ðã tổng hợp ñược phức rắn Ln3+ với L – tyrosin, L - tryptophan (Ln3+: Ho3+, Er3+) Bằng phương pháp: phân tích ngun tố, phân tích nhiệt, đo độ dẫn điện quang phổ hồng ngoại kết luận: • Phức rắn Ln3+- tyr có thành phần Ln(tyr)3.3H2O • Phức rắn Ln3+- tryp có thành phần [Ln(tryp)3]Cl3.3H2O • Mỗi phân tử L – tyrosin, L – tryptophan chiếm vị trí phối trí phức chất, liên kết với ion Ln3+ qua nguyên tử nitơ nhóm amin NH2 qua nguyên tử oxi nhóm cacboxyl -COO- • Các phức chất tổng hợp ñược bền nhiệt Phức [Ln(tryp)3]Cl3.3H2O bền nhiệt phức Ln(tyr)3.3H2O Ln: (Ho, Er) • Phức Ln3+- tyr đimetyl sunphoxit chất khơng điện li • Phức Ln3+- tryp nước chất điện li Bước đầu thăm dị ảnh hưởng phức [Ho(tryp)3]Cl3.3H2O, [Er(tryp)3]Cl3.3H2O ñến nảy mầm, phát triển mầm hàm lượng protein, proteaza , α- amilaza mầm hạt ngơ chúng tơi đến kết luận: + Trong khoảng nồng ñộ khảo sát từ 30÷240 ppm, phức chất [Ho(tryp)3]Cl3.3H2O, [Er(tryp)3]Cl3.3H2O có tác dụng ức chế nảy mầm phát triển mầm hạt ngơ, ức chế tăng theo nồng độ + Phức chất làm tăng hàm lượng protein, proteaza α- amilaza có mầm hạt ngơ ðã tiến hành thử hoạt tính kháng khuẩn phức chất Ln(tyr)3.3H2O, [Ln(tryp)3]Cl3.3H2O với loại vi khuẩn nấm Kết cho thấy phức chất chưa thể hoạt tính kháng khuẩn nồng độ kiểm định 63 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt ð àm Anh (2010), ðất gì, http:// lao ñộng.com.vn/ tin tức/ ðathiem-la-gi Phạm Thị Trân Châu, Trần Thị Áng (1992), Hóa sinh học, NXBGiáo dục Nguyễn Lân Dũng , Phạm Thị Trân Châu, Nguyễn Thanh Hiền, Lê ðình Lương, ðồn Xn Mượu, Phạm Văn Tý (1978), Một số phương pháp nghiên cứu vi sinh vật học, tập III, NXB KH KT, Hà Nội Trần Thị Biên Hà (1989),“Thăm dò ảnh hưởng nguyên tố vi lượng (Bo, Mn, Zn) ñến số tiêu sinh lý suất ngô”, Trần Ích (1978), Hóa sinh học, NXB Giáo dục, Hà Nội, Tr 12-20 Lê Chí Kiên (2007), Hóa học phức chất, Nxb ðại học Quốc gia Hà Nội Koroxotelev P P (1974), Chuẩn bị dung dịch cho phân tích hóa học, NXB KH & KT, Hà Nội Nguyễn ðức Lương, Lương Văn Sơn, Lương Văn Hinh (2000), “Giáo trình ngơ”, ðại học nơng lâm, ðại học Thái Ngun Hồng Nhâm (2001), Hố học vơ tập III NXB Giáo dục 10 Hồ Viết Quí (2009), Các phương pháp phân tích cơng cụ hóa học đại, Nxb ðại học Sư phạm 11 ðỗ ðình Rãng, ðặng ðình Bạch, Lê Thị Anh ðào, Nguyễn Mạnh Hà, Nguyễn Thị Thanh Phong (2009), Hóa học hữu tập III, NXB Giáo dục Việt Nam 12 R.A.Linñin, V.A.Molosco, L.L.Anđreeva, Tính chất lý hóa học chất vơ Người dịch: Lê Kim Long, Hồng Nhuận Người hiệu đính: Hoàng Nhâm Nhà Xuất Bản Khoa Học Kĩ Thuật Hà Nội 13 Phạm Tống Sơn, Trần Quốc Sơn, ðặng Như Tại (1980), sở hóa học hữu cơ, tập 2, NXB ðH TH chuyên nghiệp, Hà Nội 14 ðặng Như Tại, Phan Tống Sơn, Trần Quốc Sơn (1980), Cơ sở hóa học hữu cơ, Nhà xuất ðại học Trung học chuyên nghiệp Hà Nội 64 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 15 Võ Văn Tân (2004), “Nghiên cứu thu tổng oxit ñất từ monazit Thừa Thiên Huế phương pháp kiềm áp suất cao”, Tạp chí hóa học, T.42(4), tr.422-425 16 Lê Hữu Thiềng (2002), Nghiên cứu tạo phức số nguyên tố ñất với axit L - phenylalanin thăm dị hoạt tính sinh học chúng, Luận án tiến sĩ Hóa học, Hà Nội 17 Nguyễn ðình Triệu (1999), Các phương pháp vật lí ứng dụng hóa học, Nhà xuất ðại học Quốc gia 18 Nguyễn Trọng Uyển, ðào Văn Chung, Lê Hữu thiềng, Nguyễn Văn Tý (2002), Hoạt tính sinh học số phức chất ñất với L – phenylalanin, Tạp chí hố học,T.40,số 1, tr 33 – 36 19 Nguyễn Trọng Uyển, Vũ Quang Lợi, Lê Hữu Thiềng (2003), Hoạt tính sinh học phức chất lantan với L – tryptophan chủng nấm mốc aspergillyus niger, tạp chí phân tích Hố, Lý sinh học, T.8,số 20 Nguyễn Trọng Uyển (1979), Giáo trình chuyên ñề nguyên tố hiếm, Trường ðại học Tổng hợp Hà Nội, Hà Nội Tài liệu tiếng Anh 21 http://dictionary.bachkhoatoanthu.gov.vn 22 http://www.jedisaber.com/dark.angel/ency/tryptophan 23 http:// pure bulk.com/L-tyrosine 24 http://vi.wikipedia.org/wiki/Honmi 25 http://vi.wikipedia.org/wiki/Ecbi 26 Celia Carubelli, Ana M G Massabni and Sergio R de A.l Leite (1997), ''Study of the binding of Eu3+ and Tb3+ to L - phenylalanin and L - triptophan'', J Brazil Chem Soc, Vol8, No6, Brazil, pp 597 - 602 27 Gschnerdner KA.et al (1989), Handbook on the physics and chemistry of rare earths, Vol 13, North-Holland, tr 213-230 28 Greenwood N N, Earnshaw A (1984), Chemistry of the elements, Pergamon Press, Oxford-New York-Toronto-Sydney-Paris-Frankfurt 65 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 29 Hadacek, F., Greger, H (2000), “Test of antifungal natural products methodolagies, comparability of result and assay choise”, Phytochem Anal., 90, 137-147 30 Haoxu, Liang Chen (2003), ''Study on the complex site of L - tyrosin with rare - earth element Eu3+'', Spectrochim Acta Part 59, 657 - 662 31 Hirayama, Ohto, Mizogudi, Shinozakik (1995), A gene enconding a fosphatidy linosiol- specific photpholipase is induced by dehydration and salt streess in arabidipris thaliana, Proceedings of the national acedemy of the United of America, 92 (9), pp 3903-0907 32 Iaximitxki KB (1996), Complex of rare earth element, A N Uocain, Kiev 33 Indrasenan P, Lakshmy M (1997), “Synthesis and infraed spectral studies of some lanthanide complexes with leucine”, Indian Journal of Chemistry, Vol 36A, pp 998-1000 34 Moamen S.Refat, Sabry A.El-Korashy, Ahmed S.Ahmed (2008), ''Preparation, structural characterization and biological evaluation of L - tyrosinate metal ion complex'', Journal of Molecular Structure 881, 28-45 35 Pual Cos, Louis Maes, Jean-Bosco Sindambiwe, Arnold J Vlietinck, Dirk Vanden Berghe (2005); “ Bioassay for antibacterial and antifungal activities”; Laboratory for Microbiology, Parasitology and Hygien, Faculty of Pharmaceutical, Biomedical and Veterinary Sciences, University of Antwerp, Belgium,1-13 36 P H Brown et al (1990) Rare earth elements biological system hand book on the physics and chemistry of rare earth, Vol 13, P.432 – 453 37 Xie Higuand, Chang, Qing zhong (1985), “ Study on the effect of rare earth elements on yield of wheat”, New front rare earth, Proc, Int, Conf, Rare Earth Dev, Appl 2, England 38 Yang li (1998), Synthesis and Dissinefectant activiti test of the solid complexes of histicle with lanthannide nitrates, journal of Baoji Collecge of Arts and Siances (Natural Scince) Vol 18 Nol 66 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Ngun http://www.lrc-tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC CÓ LIÊN QUAN ðẾN LUẬN VĂN Lê Hữu Thiềng, Trương Thị Huân, Tổng hợp, nghiên cứu phức chất honmi, ecbi với L – tyrosin Tạp chí hóa học, T 50(5B) tr 79-82, 30-8-2012 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Xác nhận Trưởng khoa chuyên môn: Xác nhận Cán hướng dẫn: Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ... L_ TYROSIN, L_ TRYPTOPHAN VÀ BƯỚC ðẦU THĂM DỊ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CHÚNG” Với hy vọng kết thu đóng góp phần nhỏ liệu cho l? ?nh vực nghiên cứu phức chất L – tyrosin, L – tryptophan hoạt tính sinh học chúng. ..ðẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ðẠI HỌC SƯ PHẠM TRƯƠNG THỊ HUÂN TỔNG HỢP, NGHIÊN CỨU PHỨC CHẤT CỦA HONMI, ECBI VỚI L – TYROSIN, L – TRYPTOPHAN VÀ BƯỚC ðẦU THĂM DỊ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CHÚNG Chun... trình nghiên cứu phức chất ngun tố ñất nặng, ñặc biệt Honmi Ecbi với L – tyrosin, L – tryptophan chưa nhiều Trên sở chúng tơi thực đề tài: “TỔNG HỢP, NGHIÊN CỨU PHỨC CHẤT CỦA HONMI, ECBI VỚI L_ TYROSIN,