VNU Journal of Science: Medical and Pharmaceutical Sciences, Vol 35, No (2019) 61-66 Original Article Compounds Isolated from the Leaf of Sanchezia Nobilis Hook.f Bui Thi Xuan1,*, Vu Duc Loi1, Pham Thi Ha1, Tran Minh Ngoc2, Bui Thi Kim Dung3 VNU School of Medicine and Pharmacy, 144 Xuan Thuy, Cau Giay, Hanoi, Vietnam National Institute of Medicinal Materials, 3B Quang Trung, Hoan Kiem, Hanoi, Vietnam Thanh Nhan Hospital, 42 Thanh Nhan, Hai Ba Trung, Hanoi, Vietnam Received 29 January 2019 Revised 20 April 2019; Accepted 21 June 2019 Abstract: The ethylacetate fraction of the leaf of Sanchezia nobilis Hook.f collected in Nam Dinh province isolated two compounds, daucosterol and stigmasterol, for the first time by chromatographic methods Their structures were elucidated by spectroscopic methods, including MS and NMR Keywords: Sanchezia nobillis Hook.f., daucosterol, stigmasterol Corresponding author Email address:sealotus82@gmail.com https://doi.org/10.25073/2588-1132/vnumps.4146 61 VNU Journal of Science: Medical and Pharmaceutical Sciences, Vol 35, No (2019) 61-66 Một số hợp chất phân lập từ phân đoạn n-hexan Khôi đốm (Sanchezia nobilis Hook.f.) Bùi Thị Xuân1,*, Vũ Đức Lợi1, Phạm Thị Hà1, Trần Minh Ngọc2, Bùi Thị Kim Dung3 Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, 144 Xuân Thủy, Cầu Giấy, Hà Nội, Việt Nam Viện Dược liệu, 3B Quang Trung, Hồn Kiếm, Hà Nợi, Việt Nam Bệnh Viện Thanh Nhàn, 42 Thanh Nhàn, Hai Bà Trưng, Hà Nội, Việt Nam Nhận ngày 29 tháng 01 năm 2019 Chỉnh sửa ngày 20tháng năm 2019; Chấp nhận đăng ngày 21 tháng năm 2019 Tóm tắt: Từ phân đoạn dịch chiết ethylacetat Khôi đốm (Sanchezia nobilis Hook.f.) thu hái tỉnh Nam Định phương pháp sắc ký cột phân lập hợp chất Cấu trúc hóa học hợp chất xác định phương pháp phổ như: phổ khối, phổ cộng hưởng từ hạt nhân Các chất xác định là: NS1, NS2 Các hợp chất lần phân lập từ Khơi đốm Từ khóa: Sanchezia Stigmasterol nobilis Hook.F, Sitosterol-3-O-β-D-glucopyranosid Đặt vấn đề toàn phương pháp Brine shrimp lethality bioassay phân đoạn N-hexan ethyl acetat kết cho thấy phân đoạn an toàn vincristine sulphate [3]; tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm diệt côn trùng Abu Shuaib Rafshanjani cs phương pháp disc difusion dịch chiết cho kết khả quan [4]; Mohammadjavad Paydar cs thử tác dụng chống oxi hóa chống ung thư phân đoạn methanolic từ dịch chiết Sanchezia speciosa [5], tác dụng chống ung thư tế bào Hela từ rễ Sanchezia nobilis cho kết tốt Chi Sanchezia (họ Acanthaceae) loài vùng nhiệt đới cận nhiệt đới, chi phân bố khu vực Địa Trung Hải, Ấn Độ, châu Phi, châu Úc, Mỹ số nước Đông Nam Á Hầu hết lồi có từ lâu năm rừng mưa nhiệt đới miền Trung Nam Mỹ (Ecuador) [1] Ở Việt Nam, chi Sanchezia có số tỉnh như: Tuyên Quang, Quảng Nam, Đà Nẵng, Nam Định, Vĩnh Phúc, Phú Thọ, Thái Nguyên [2] Trên giới Khôi đốm Abu Shuaib Rafshanjani cộng đánh giá độ an (daucosterol), Tác giả liên hệ Địa email: sealotus82@gmail.com https://doi.org/10.25073/2588-1132/vnumps.4146 62 B.T Xuan et al / VNU Journal of Science: Medical and Pharmaceutical Sciences, Vol 35, No (2019) 61-66 phương pháp MTT Nusrat Shaheenvà cs [6], nghiên cứu tác dụng chống oxy hóa DPPH chống viêm phương pháp inhibition of albumin denaturation assay Bùi Thanh Tùng cs [7]… Về thành phần hóa học lồi có số cơng bố cho thấy, có chứa số nhóm chất như: flavonoid, glycosid, carbohydrat, alcaloid, steroid, phenolic, saponin tannin Một số chất cụ thể phân lập hợp chất matsutake alcohol hợp chất lần đầu phân lập từ họ Acathanceae chất lần phân lập từ tự nhiên hợp chất khác từ dịch chiết methnol rễ Khôi đốm có chất lần phân lập từ tự nhiên, chất phân lập lần từ họ Acanthaceae chất báo cáo lần từ chi Sanchezia Ahmed E cộng sự; Bùi Thanh Tùng cs phân lập hợp chất hợp chất lần đầu phân lập từ Sanchezia speciosa [3, 8-10]… Ở Việt Nam, dân gian ta truyền sử dụng Khôi đốm vị thuốc quý để chữa bệnh viêm dày Nhưng chưa có nhiều nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng sinh học loài Việt Nam giới Vì vậy, nghiên cứu cung cấp thêm thơng tin thành phần hóa học phân đoạn n-hexan chiết từ Khôi đốm Đối tượng phương pháp nghiên cứu 2.1 Đối tượng nghiên cứu Lá Khôi đốm thu hái vào tháng 1/2018 Thị trấn Cổ Lễ, huyện Trực Ninh, tỉnh Nam Định, phơi sấy, bảo quản túi nilon kín Mẫu ThS.Nguyễn Quỳnh Nga, Viện Dược liệugiám định tên khoa học là: Sanchezia nobilis Hook.f họ Acanthaceae (họ Ơ rơ).Mẫu lưu tại: Phịng tiêu bản, Khoa Tài Nguyên Cây Thuốc, Viện Dược liệu (số hiệu tiêu bản: DL-150118), 2.2 Dung mơi, hóa chất - Dung mơi hóa chất dùng để chiết xuất phân lập (Ethanol (EtOH) 70%, n-hexan (Hx), ethyl acetat (EtOAc), methanol (MeOH), 63 dichloromethan (DCM), aceton (Ac) đạt tiêu chuẩn tinh khiết - Pha tĩnh dùng sắc ký cột silica gel pha thường cỡ hạt 0,063-0,200mm (Merck), (0,040 - 0,063 mm, Merck) Bản mỏng tráng sẵn DC-Alufolien 60 F254 (Merck) (silica gel, 0,25 mm) mỏng pha đảo RP-18 F254 (Merck, 0,25 mm) - Hóa chất dùng đánh giá tác dụng chống viêm cấp: indomethacin, NaCl 0,9%, dung dịch carrageenin 2.3 Thiết bị, dụng cụ - Sắc ký cột: sắc ký cột sử dụng silicagel cỡ hạt 0,063-0,200mm (Merck) cỡ hạt 0,0400,063 mm (Merck) với loại cột sắc ký có kích cỡ khác - Phổ cộng hưởng từ hạt nhân: NMR ghi máy Bruker Avance 500MHz Viện Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam - Phổ khối ESI-MS: đo máyAGILENT 1260 Series LC-MS ion Trap (Agilent Technologies, Hoa Kỳ), Khoa Y Dược, ĐHQGHN - Nhiệt đợ nóng chảy: đo máy SMP10 BioCote, Khoa Y Dược, ĐHQGHN - Góc quay cực riêng: đo máy PLR-4, MRC scientific instruments, Khoa Y Dược, ĐHQGHN 2.4 Chiết tách và phân lập chất Mẫu Khôi đốm (2,5kg) sau rửa sạch, phơi khô, thái nhỏ ngâm chiết dung môi ethanol 80% (3 lần, lần 8L), sử dụng thiết bị chiết siêu âm 40oC vòng Lọc dịch chiết ethanol thu qua giấy lọc, gộp dịch lọc cất loại dung môi áp suất giảm, thu 150g cao chiết tổng ethanol Lấy 100g cao chiết phân tán nước cất chiết phân bố n- hexan ethyl acetat (mỗi dung môi lần, lần 500 ml 30 phút) Các phân đoạn n- hexan, ethyl acetat cất loại dung môi áp suất giảm để thu phân đoạn tương ứng n- hexan ký hiệu H (9,2 64 B.T Xuan et al / VNU Journal of Science: Medical and Pharmaceutical Sciences, Vol 35, No (2019) 61-66 g) ethyl acetat ký hiệu E (28,8g) Phần dịch chiết nước cịn lại cạn thu phân đoạn ký hiệu N (26,6g) Cắn n-hexan (H, 8,0g) đượcphân lập cột sắc ký với chất hấp phụ silicagel sử dụng hệ dung môi n-hexan:dichloromethan(15:1, v/v) Hứng dịch rửa giải vào ống kiểm tra SKLM, gộp ống từ 2-16, thu phân đoạn H1, gộp ống từ 17-20, thu đượcphân đoạn H2, tương tự thu phân đoạn H3 Tiến hành sắc ký cột cắn phân đoạn H1với chất hấp phụ silicagel, hệ dung môi n-hexan : dichloromethan (10:1; v/v), kiểm tra ống hứng dịch rửa giải SKLM, gộp ống có thành phần bốc dung môi thu phân đoạn nhỏ gồm: H1.1, H1.2, H1.3, H1.4 Phân đoạn H1.1 tiếptục phân tách cột sắc ký silica gel, rửa giải hệ dung môin-hexan: ethylacetat (10:1; v/v) thu hợp chất ký hiệu NS1 (12 mg) Phân đoạn H1.2 tiếp tục phân tách cột sắc ký silica gel, rửa giải hệ dung môi n-hexan: dichloromethan (5:1; v/v) thu hợp chất ký hiệu hợp chất NS2 (18mg) Kết nghiên cứu Hợp chất NS1: Tinh thể có màu trắng đục, tnc =285oC Rf=0,5 (TLCsilicagel,C2H2/MeOH,9/1v/v); ESI-MS: m/z599[M+Na]+; Ứng với CTPT C35H60O6 M=576 13 - Phổ C-NMR (CDCl3, 125 MHz) δ(ppm): 36,9(C-1); 31,2(C-2); 76,9(C-3); 39,2(C-4); 140,4(C-5); 121,1(C-6); 31,5(C-7); 31,2(C-8); 49,7(C-9); 36,2(C-10); 20,4(C-11); 38,4(C-12); 41,9(C-13); 55,5(C-14); 25,4(C-15); 29,1(C16); 56,3 (C-17); 11,8(C-18); 19,1(C-19); 35,3(C-20);18,6(C-21); 33,2(C-22); 27,6(C-23); 45,2(C-24); 28,8 (C-25); 19,7(C-26); 18,9(C27); 22,4(C-28); 11,8(C-29); 100,9(C-1’); 76,6(C-2’); 73,5(C-3’); 70,1(C-4’); 76,7(C-5’); 61,1 (C-6’) - Phổ 1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ(ppm): 3,54(1H,dt,J=7,0 Hz, H-3); 5,35(1H, dt,J=5,0; H-6); 0,68(1H, s, H-18); 0,92(1H, dt, J=6,5; H- 20); 0,78(2H, m, H-25); 0,88(2H, m, H-28); 4,14(1H, dt,J=8,0; H-1’); 3,44 (1H, m, H-2’); 3,25(1H, m, H-3’); 3,32 (1H, m, H-4’); 3,48 (1H, m, H-5’); 3,75 (2H, dt, J=12,0; H-6’) Hợp chất NS2: Tinh thể hình kim màu trắng, tnc =170171oC HR-ESI-MS(+)m/z:385,3[M+H-H2O]+, ứng với CTPTC29H48O,M=412 Phổ 13C-NMR (CDCl3, 100 MHz) δ(ppm): 37,3(C-1); 31,6(C-2); 71,8(C-3); 42,3(C-4); 140,7(C-5); 121,7(C-6); 31,8(C-7); 31,8(C-8); 50,1(C-9); 36,6(C-10); 21,1(C-11); 39,7(C-12); 42,3(C-13); 56,8(C-14); 24,5(C-15); 28,9(C16); 56,1(C-17); 12,1(C-18); 19,4(C-19); 40,6(C-20); 21,1(C-21); 138,2(C-22); 139,4(C23); 51,2(C-24); 31,9(C-25); 21,2(C-26); 19,1(C-27); 25,3(C-28); 12,2(C-29) - Phổ 1H-NMR (CDCl3, 300 MHz) δ(ppm): 3,52(1H, m, H-3); 5,36(1H, brd, J= 3,5Hz, H-6); 0,85(3H,s, H-18); 1,02(3H, s, H-19); 0,92(3H,d, J=6,5Hz, H-21); 5,16(1H,dd,J=8,5;15,0Hz, H22); 5,03(1H,dd, J=8,5; 15Hz, H-23); 0,83(3H, t, J=8,5; H-26); 0,82(3H, d, J=6,8; H27);0,83(3H, d, J=6,8; H-28); 0,79 (3H, t, J=9,5; H-29) Hợp chất NS 1: Sitosterol-3-O-β-Dglucopyranosid (hay cịn gọi daucosterol) ChấtNS 1tinh thể có màu trắng đục, M= 576, Tnc = 285 0C, Rf= 0,5 (CH2Cl2 - MeOH, 9:1) Hợp chất NS1 phản ứng với thuốc thử H2SO4 10%/EtOH cho màu hồng tươi chuyển dần xanh tím IR (KBr, cm-1) 3430 (OH), 2938 (CH), 1635 (C=CH), 1077 (C-O-C), 1021 (C-OC).ESI-MS: m/z 599 [M+Na]+ Hợp chất NS1 phản ứng với thuốc thử H2SO4 10 %/EtOH cho màu hồng tươi chuyển xanh tím dần chứng tỏ NS1 thuộc nhóm sterol Phổ IR xuất đỉnh hấp thụ cực đại v*max 3430 cm-1đặc trưng cho nhóm O-H; đỉnh v*max 2938 cm- đặc trưng cho dao động hóa trị liên kết C-H; đỉnh v*max 1635 đặc trưng cho liên kết >C=C