Góp phần nghiên cứu thành phần saponin của bộ phận lá của sâm vũ diệp panax bipinnatifidius seem

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC NGUYỄN ANH ĐỨC GÓP PHẦN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN SAPONIN CỦA BỘ PHẬN LÁ CỦA SÂM VŨ DIỆP (Panax bipinnatifidius Seem.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Hà nội 2020 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC NGUYỄN ANH ĐỨC GÓP PHẦN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN SAPONIN CỦA BỘ PHẬN LÁ CỦA SÂM VŨ DIỆP (Panax bipinnatifidius Seem.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC (NGÀNH DƯỢC HỌC) Khóa: QH.2015.Y Người hướng dẫn 1: PGS.TS NGUYỄN HỮU TÙNG Người hướng dẫn 2: ThS NGUYỄN THỊ HOÀNG ANH Hà Nội-2020 LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình nghiên cứu hồn thành khóa luận này, em nhận nhiều giúp đỡ vô quý báu thầy cô giáo Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội với gia đình bạn bè Trước hết, em xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới ThS Nguyễn Thị Hoàng Anh - Khoa Y Dược Đại học Quốc gia Hà Nội PGS TS Nguyễn Hữu Tùng – Khoa Dược, Đại học Phenikaa; người thầy trực tiếp hướng dẫn, hết lịng bảo tận tình, tạo điều kiện đóng góp ý kiến cho tơi q trình thực nghiên cứu Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Ban chủ nhiệm Khoa, thầy cô Khoa Y Dược đặc biệt Bộ môn Hóa Dược Kiểm nghiệm thuốc ln tạo điều kiện cho em hồn thành khóa luận Lời cuối cùng, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới gia đình bạn bè ln bên cạnh, động viên, ủng hộ em suốt trình học tập đạt kết ngày hôm Hà Nội, ngày 22 tháng 05 năm 2020 Sinh viên Nguyễn Anh Đức MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.1.Tổng quan Sâm vũ diệp 1.1.1 Tên khoa học, tên đồng danh 1.1.2 Đặc điểm thực vật 1.1.3 Phân bố sinh thái 1.1.4 Thành phần hóa học 1.1.5 Tính vị, công 12 1.1.6 Công dụng 12 1.1.7 Tác dụng dược lý 13 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Đối tượng nghiên cứu 14 2.2 Thiết bị, dụng cụ 14 2.4 Phương pháp nghiên cứu 15 2.4.1 Phương pháp xử lý mẫu chiết xuất 15 2.4.2 Phương pháp phân lập hợp chất hóa học 15 2.4.3 Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất phân lập 16 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 17 3.1 Chiết xuất phân lập hợp chất tinh khiết 17 3.2 Đặc điểm vật lý liệu phổ araloside A phân lập 18 3.3 Biện giải cấu trúc saponin stipuleanosid phân lập được: 24 3.4 Bàn luận 28 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 28 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT BuOH n-butanol 13 Carbon (13) Nuclear Magnetic Resonance (Phổ cộng C-NMR hưởng từ hạt nhân Cacbon 13) DAD Diode array detector (Detector mảng diod) DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer ĐHQGHN Đại học Quốc gia Hà Nội ESI-MS Eletrospray Ionization Mass Spectroscopy EtOH Ethanol EtOAc Ethyl acetat Proton Nuclear Magnetic Resonance (Phổ cộng hưởng H-NMR từ hạt nhân proton) HPLC High performace liquid chromatography (Sắc ký lỏng hiệu cao) MeOH Methanol MS Mass spectrum (Phổ khối) NMR Nuclear Magetic Resonance (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân) P Panax SKLM Sắc ký lớp mỏng Rha α-ʟ-rhamnopyranosyl v/v Thể tích/ thể tích DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU STT Tên bảng Trang Bảng 1.1 Axit béo SVD Bảng 1.2 Axit amin SVD 10 Bảng 1.3 Nguyên tố đa lượng vi lượng 10 Bảng 3.1 Dữ liệu phổ 1H, 13C, DEPT phần aglycon 20 chất F223 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ 1H, 13C, DEPT phần đường chất F223 22 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ STT Tên hình Trang Hình 1.1 Hình ảnh Sâm vũ diệp Hình 1.2 Cấu trúc hóa học 10 saponin tách từ rễ SVD Hình 2.1 Mẫu SVD (Panax bipinnatifidus Seem.) 13 thu hái Sapa, Lào Cai Hình 3.1 Quá trình chiết lá SVD ban đầu 16 Hình 3.2 Quá trình tách hợp chất chính aralosid A từ 17 phân đoạn BuOH Hình 3.3 Cấu trúc hóa học aralosid A phân lập 18 Hình 3.4 Phổ IR aralosid A phân lập 19 Hình 3.5 Phổ ESI-MS aralosid A phân lập 20 Hình 3.6 Dữ liệu nhóm chức CH3 phân tử dựa 23 phổ 13C DEPT 10 Hình 3.7 Dữ liệu carbon mang nối đơi, nhóm chức 24 carbonyl liệu carbon vùng 60-100 ppm 11 Hình 3.8 Dữ liệu HMBC thể tương quan các 25 phân tử đường 12 Hình 3.9 Dữ liệu HMBC mối quan hệ 26 đường phần aglycon 13 Hình 3.10 Cấu trúc hóa học saponin phân lập được, aralosid A 26 ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện nay, xu hướng sử dụng sản phẩm chăm sóc sức khỏe có nguồn gốc tự nhiên ngày tăng Từ xu hướng đó, các dược liệu quý nước giới trở thành mục tiêu cho việc nghiên cứu, tìm kiếm, khai thác nguồn tài nguyên Việt Nam quốc gia có nguồn tài nguyên dược liệu phong phú với 5000 lồi thực vật có khả sử dụng làm thuốc Tuy nhiên thực tế loài thảo dược sử dụng trực tiếp dạng nguyên liệu thô thông qua số phương pháp sơ chế đơn giản, điều khiến cho giá trị loài thảo dược chưa phát huy hết tác dụng Một số phải kể đến sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) Sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) dược liệu quý vùng Dược liệu Tây Bắc sử dụng thuốc cổ truyền có tiềm để phát triển thành sản phẩm chăm sóc sức khỏe có nguồn gốc tự nhiên Các kết nghiên cứu công bố gần khẳng định phần thân rễ Sâm vũ diệp chứa nhiều saponin có giá trị Tuy nhiên liên hệ với loài Panax tiếng khác nhân sâm (P ginseng), tam thất (P notoginseng) cho thấy phận khác bao gồm thân, lá hoa giàu hoạt chất saponin không phần thân rễ Bên cạnh đấy, phần thân loài sử dụng y học giống phần mặt đất chúng Hơn nữa, hoa phận tái sinh với quá trình sinh trưởng Sâm vũ diệp Nếu thành phần hoạt chất phần thân, lá Sâm vũ diệp có tương đồng với thành phần hoạt chất phần thân rễ tương lai có khả sử dụng phần mặt đất làm dược liệu thay cho phần thân rễ Sâm vũ diệp Trên sở đó, kế thừa phát triển tiếp nghiên cứu đối tượng Sâm vũ diệp, tiến hành nghiên cứu đề tài “ Góp phần nghiên cứu thành phần Saponin phận lá Sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidius Seem.)” Nội dung KLTN phần đề tài “Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) Việt Nam” (Mã số: B2019_BKA.02 (2019-2020); CNĐT: PGS TS Vũ Đình Hồng TKĐT: PGS TS Nguyễn Hữu Tùng), đề tài nghiên cứu khoa học cấp bộ, Bộ Giáo dục Đào tạo Mục tiêu đề tài: Chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Sâm vũ diệp 1.1.1 Tên khoa học, tên đồng danh Sâm vũ diệp loài thực vật thuộc chi Panax, họ Araliaceae Seem miêu tả lần vào năm 1868 SVD cịn có tên gọi khác Tam thất xẻ, Vũ diệp tam thất, Sâm hai lần xẻ, Phan xiết (Dao), Hoàng liên thất, Nữu tử thất, Tam thất lông chim, Hương sơn tam thất (Trung Quốc), Hoa diệp tam thất, Trúc tiết nhân sâm [1,3] Ngoài tên khoa học cho loài Panax bipinnatifidus (Seem.) Sâm Vũ Diệp cịn có tên đồng danh khác Aralia bipinnatifida (Seem.) C.B.Clarke; Aralia quinquefolia (L.) Dec et Plan var major Burk; Aralia quinquefolia (L.) Dec et Plan var elegantior Burk; Panax pseudoginseng Wall var bipinnatifidus (Seem.) Li; Panax pseudoginseng Wall var major (Burk.) Li; Panax major Ting ex Pei; Panax pseudoginseng Wall Spp himalaicus Hara; Panax pseudoginseng Wall var elegantior (Burk) Hoo et Tseng; Panax japonicas Mey var bipinnatifidus (Seem.) Wu et Feng [1,3] 1.1.2 Đặc điểm thực vật Cây thân thảo sống lâu năm, cao 0,3- 0,5 m Rễ củ dài, vặn vẹo, có nhiều đốt vết sẹo to thân rụng để lại, đầu rễ có hình quay Thân khí sinh mảnh, thường đơn độc, mọc thẳng, rỗng giữa, có vạch dọc, cao 20-30 cm Lá kép chân vịt gồm 2-3 mọc vịng Lá chét 5-7 (ít 3) thuôn, dài 2,5- 14 cm, rộng 1,5- cm, gốc trịn, đầu thn thành mũi nhọn, xẻ thùy lơng chim khơng đều, mép khía răng, có lơng Cụm hoa tán đơn mọc ngọn, hoa màu trắng đục; cánh hoa; nhị; bầu 2- Quả mọng, hình cầu dẹt, màu đỏ chín, có châm đen to đầu, chứa 1-2 hạt Hạt hình cầu gần cầu, màu xám trắng; vỏ cứng, có rốn hạt [1,3] PB223-Pyridine-COSYGP Current Data Parameters NAME 22DUONG_PB223 EXPNO PROCNO ppm F2 - Acquisition Parameters Date_ 20200419 Time 23.04 INSTRUM spect PROBHD mm PABBO BB/ PULPROG cosygpppqf TD 2048 SOLVENT Pyr NS DS SWH 4854.369 Hz FIDRES 2.370297 Hz AQ 0.2109440 sec RG 30.85 DW 103.000 usec DE 6.50 usec TE 304.3 K D0 0.00000300 sec D1 1.94224596 sec D11 0.03000000 sec D12 0.00002000 sec D13 0.00000400 sec D16 0.00020000 sec IN0 0.00020600 sec ======== CHANNEL f1 ======== SFO1 500.1912561 MHz NUC1 1H P0 10.20 usec P1 10.20 usec P17 2500.00 usec PLW1 22.00000000 W PLW10 2.54320002 W ====== GRADIENT CHANNEL ===== GPNAM[1] SMSQ10.100 GPZ1 10.00 % P16 1000.00 usec F1 - Acquisition parameters TD 128 SFO1 500.1913 MHz FIDRES 75.849518 Hz SW 9.705 ppm FnMODE QF F2 - Processing parameters SI 1024 SF 500.1890320 MHz WDW QSINE SSB LB Hz GB PC 1.40 ppm F1 - Processing parameters SI 1024 MC2 QF SF 500.1890315 MHz WDW QSINE SSB LB Hz GB PB223-Pyridine-COSYGP Current Data Parameters NAME 22DUONG_PB223 EXPNO PROCNO ppm F2 - Acquisition Parameters Date_ 20200419 Time 23.04 INSTRUM spect PROBHD mm PABBO BB/ PULPROG cosygpppqf TD 2048 SOLVENT Pyr NS DS SWH 4854.369 Hz FIDRES 2.370297 Hz AQ 0.2109440 sec RG 30.85 DW 103.000 usec DE 6.50 usec TE 304.3 K D0 0.00000300 sec D1 1.94224596 sec D11 0.03000000 sec D12 0.00002000 sec D13 0.00000400 sec D16 0.00020000 sec IN0 0.00020600 sec 4.0 4.2 4.4 4.6 4.8 5.2 ======== CHANNEL f1 ======== SFO1 500.1912561 MHz NUC1 1H P0 10.20 usec P1 10.20 usec P17 2500.00 usec PLW1 22.00000000 W PLW10 2.54320002 W 5.4 ====== GRADIENT CHANNEL ===== GPNAM[1] SMSQ10.100 GPZ1 10.00 % P16 1000.00 usec 5.0 F1 - Acquisition parameters TD 128 SFO1 500.1913 MHz FIDRES 75.849518 Hz SW 9.705 ppm FnMODE QF 5.6 5.8 F2 - Processing parameters SI 1024 SF 500.1890320 MHz WDW QSINE SSB LB Hz GB PC 1.40 6.0 6.2 6.4 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 ppm F1 - Processing parameters SI 1024 MC2 QF SF 500.1890315 MHz WDW QSINE SSB LB Hz GB PB223-Pyridine-COSYGP Current Data Parameters NAME 22DUONG_PB223 EXPNO PROCNO ppm F2 - Acquisition Parameters Date_ 20200419 Time 23.04 INSTRUM spect PROBHD mm PABBO BB/ PULPROG cosygpppqf TD 2048 SOLVENT Pyr NS DS SWH 4854.369 Hz FIDRES 2.370297 Hz AQ 0.2109440 sec RG 30.85 DW 103.000 usec DE 6.50 usec TE 304.3 K D0 0.00000300 sec D1 1.94224596 sec D11 0.03000000 sec D12 0.00002000 sec D13 0.00000400 sec D16 0.00020000 sec IN0 0.00020600 sec 3.9 4.0 4.1 4.2 4.3 ======== CHANNEL f1 ======== SFO1 500.1912561 MHz NUC1 1H P0 10.20 usec P1 10.20 usec P17 2500.00 usec PLW1 22.00000000 W PLW10 2.54320002 W 4.4 4.5 ====== GRADIENT CHANNEL ===== GPNAM[1] SMSQ10.100 GPZ1 10.00 % P16 1000.00 usec 4.6 F1 - Acquisition parameters TD 128 SFO1 500.1913 MHz FIDRES 75.849518 Hz SW 9.705 ppm FnMODE QF 4.7 F2 - Processing parameters SI 1024 SF 500.1890320 MHz WDW QSINE SSB LB Hz GB PC 1.40 4.8 4.9 5.0 5.0 4.9 4.8 4.7 4.6 4.5 4.4 4.3 4.2 4.1 4.0 ppm F1 - Processing parameters SI 1024 MC2 QF SF 500.1890315 MHz WDW QSINE SSB LB Hz GB PB223-Pyridine-COSYGP Current Data Parameters NAME 22DUONG_PB223 EXPNO PROCNO ppm F2 - Acquisition Parameters Date_ 20200419 Time 23.04 INSTRUM spect PROBHD mm PABBO BB/ PULPROG cosygpppqf TD 2048 SOLVENT Pyr NS DS SWH 4854.369 Hz FIDRES 2.370297 Hz AQ 0.2109440 sec RG 30.85 DW 103.000 usec DE 6.50 usec TE 304.3 K D0 0.00000300 sec D1 1.94224596 sec D11 0.03000000 sec D12 0.00002000 sec D13 0.00000400 sec D16 0.00020000 sec IN0 0.00020600 sec 1.0 1.5 ======== CHANNEL f1 ======== SFO1 500.1912561 MHz NUC1 1H P0 10.20 usec P1 10.20 usec P17 2500.00 usec PLW1 22.00000000 W PLW10 2.54320002 W 2.0 ====== GRADIENT CHANNEL ===== GPNAM[1] SMSQ10.100 GPZ1 10.00 % P16 1000.00 usec 2.5 3.0 F1 - Acquisition parameters TD 128 SFO1 500.1913 MHz FIDRES 75.849518 Hz SW 9.705 ppm FnMODE QF 3.5 F2 - Processing parameters SI 1024 SF 500.1890320 MHz WDW QSINE SSB LB Hz GB PC 1.40 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 ppm F1 - Processing parameters SI 1024 MC2 QF SF 500.1890315 MHz WDW QSINE SSB LB Hz GB PB223-Pyridine-COSYGP Current Data Parameters NAME 22DUONG_PB223 EXPNO PROCNO ppm F2 - Acquisition Parameters Date_ 20200419 Time 23.04 INSTRUM spect PROBHD mm PABBO BB/ PULPROG cosygpppqf TD 2048 SOLVENT Pyr NS DS SWH 4854.369 Hz FIDRES 2.370297 Hz AQ 0.2109440 sec RG 30.85 DW 103.000 usec DE 6.50 usec TE 304.3 K D0 0.00000300 sec D1 1.94224596 sec D11 0.03000000 sec D12 0.00002000 sec D13 0.00000400 sec D16 0.00020000 sec IN0 0.00020600 sec 0.8 1.0 1.2 ======== CHANNEL f1 ======== SFO1 500.1912561 MHz NUC1 1H P0 10.20 usec P1 10.20 usec P17 2500.00 usec PLW1 22.00000000 W PLW10 2.54320002 W 1.4 1.6 ====== GRADIENT CHANNEL ===== GPNAM[1] SMSQ10.100 GPZ1 10.00 % P16 1000.00 usec 1.8 F1 - Acquisition parameters TD 128 SFO1 500.1913 MHz FIDRES 75.849518 Hz SW 9.705 ppm FnMODE QF 2.0 F2 - Processing parameters SI 1024 SF 500.1890320 MHz WDW QSINE SSB LB Hz GB PC 1.40 2.2 2.4 2.4 2.2 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 ppm F1 - Processing parameters SI 1024 MC2 QF SF 500.1890315 MHz WDW QSINE SSB LB Hz GB PB223-Pyridine-HSQC ppm 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 ppm PB223-Pyridine-HSQC ppm 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 105 110 115 120 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 125 ppm PB223-Pyridine-HSQC ppm 60 62 64 66 68 70 72 74 76 78 80 82 84 86 88 5.0 4.9 4.8 4.7 4.6 4.5 4.4 4.3 4.2 4.1 4.0 3.9 ppm PB223-Pyridine-HMBC ppm 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 ppm PB223-Pyridine-HMBC ppm 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 ppm PB223-Pyridine-HMBC ppm 70 75 80 85 90 95 100 105 110 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 ppm PB223-Pyridine-HMBC ppm 105 110 115 120 125 130 135 140 145 150 155 160 165 170 175 180 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 ppm PB223-Pyridine-HMBC ppm 85 90 95 100 105 110 115 120 125 130 135 140 145 150 155 160 165 170 175 180 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 ppm PB223-Pyridine-HMBC ppm 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 2.4 2.2 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 ppm PB223-Pyridine-HMBC ppm 15 20 25 30 35 40 45 50 55 1.3 1.2 1.1 1.0 0.9 0.8 0.7 ppm ... nghiên cứu đối tượng Sâm vũ diệp, tiến hành nghiên cứu đề tài “ Góp phần nghiên cứu thành phần Saponin phận lá Sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidius Seem. )” Nội dung KLTN phần đề tài ? ?Nghiên cứu thành. ..ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC NGUYỄN ANH ĐỨC GÓP PHẦN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN SAPONIN CỦA BỘ PHẬN LÁ CỦA SÂM VŨ DIỆP (Panax bipinnatifidius Seem. ) KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC (NGÀNH DƯỢC HỌC)... chi Panax KIẾN NGHỊ Bài báo trình bày kết nghiên cứu thành phần saponin phận mặt đất Sâm vũ diệp trồng Sa Pa, Lào Cai để đóng góp thêm vào sở liệu hóa thực vật tiêu chuẩn hóa dược liệu Sâm vũ diệp,