TÁC DỤNG HẠ GLUCOSE MÁU CỦA CAO LỎNG SINH ĐỊA TRÊN MƠ HÌNH CHUỘT NH T ĐÁI THÁO ĐƯỜNG TH ựC NGHIỆM s v Trần Quỳnh Trang*; s v H ồng Thanh Loan* TĨM TẮT H ớng dẫn: TS P hạm T h ị Vân A n h * Cao lỏng sinh địa (CLSĐ) gồm thành ph n dược liệu d ng y học cổ truyền để điều ưị đái tháo đườne (ĐTĐ) M ục tiêuỉ Đánh giá tác dụng hạ glucose máu CLSĐ chuột nhắt trắng t m hiểu chế hạ glucose máu CLSĐ Nguyên liệu: CLSĐ Đối tượng: Chuột nhắt trắng chủng Swiss, tế bào vân chuột nhắt C2C 12 Phương pháp nghiên cứu: Tác dụng hạ glucose máu CLSĐ đánh giá chuột gây ĐTĐ týp b ng chế độ ăn giàu ch t béo có bổ sung fructose tiêm alloxan Tìm hiểu chế hạ glucose máu: chuột gây tăng đưòng huyết băng adrenalin, đung nạp glucose chuột gây ĐTĐ alloxan, dung nạp glucose tể bào C2Cj2 K ết quả: CLSĐ liều 10 g/kg, 20 g/kg làm giảm glucose máu chuột ĐTĐ týp 2, chuột tăng đường huyết b ng adrenalin tăng dung nạp glucose chuột gây ĐTĐ b ng alloxan CLSĐ liều 10 làm tăng nhập glucose vào tế bào C2C 12 K ế t lu ận: CLSĐ giảm glucose máu chuột ĐTĐ týp nhờ giảm phân giải glycogen gan, tăng đung nạp glucose tế bào * Từ khóa: Cao lỏng Sinh địa; Tác dụng hạ glucose máu; Đái tháo đường; Chuột thực nghiệm The hypoglycemic effect o f extract o fRadix: Rehmanniae on experimental dmbetic mice Sum m ary Extract o f Radix rehmanniae contains components which are usually used to treat diabetes O bjectives: To identify the hypoglycemic effect of extract of Radix rehmanniae on mice; Evaluate the hypoglycemic mechanisms of extract of Radix rehmanniae M aterials an d m ethods: extract o f Radix rehmanniae was administered to mice orally The hypoglycemic effect was evaluated on alloxan induced diabetic mice fed a high fat diet plus fructose The hypoglycemic mechanisms was evaluated on mice with adrenalin induced hyperglycemia, on glucose tolerance of alloxan induced diabetic mice and C 2C 12cells R esults: extract o f Radix rehmanniae 10 g/kg/day and 20 g/kg/day decreased blood glucose concentration in type diabetic mice, mice with adrenalin induced hyperglycemia and increased glucose tolerance in diabetic mice, extract o f Radix rehmanniae: |xl/mL, 10 n-l/mL increased glucose uptake in C2CĨ2cells Conclusion: Our findings suggest that extract of Radix rehmanniae had hypoglycemic effect OĨ1 mice via preventing glycogenolysis and increasing glucose tolerance * Key words: Extract of Radix rehmanniae; Hypoglycamic effect; Diabetes; M ice LĐẶTVẴNĐ Đái tháo đường (ĐTĐ) bệnh rối loạn chuyển hóa glucose mạn tính, gây nhiều biến chứng thân kinh, t m mạch, thận [1], Bệnh xuất ngày phổ biến Việt Nam toằn giới Hiện nay, có số thuốc điều trị ĐTĐ, hiệu nhiều hạn chế Các thuốc h u chưa có tác đụng hạ glucose máu lâu dài, kể d ng phối hợp, hiệu ngăn ngừa biến chứng th p, nhiều tác dụng * Đại học Dược Hà Nội 544 I không mong muốn, số bệnh nhân kháng thuốc sau thời gian dài sử dụng [5] V vậy, việc nghiên cứu t m kiếm thuốc điều trị ĐTĐ, đặc biệt có nguồn gốc từ tự nhiên nhà khoa học quan tâm Xuất phát từ thực tế đó, đề tài tiến hành với hai mục tiêu: Đ ánh giá tác dụn g h glucos m áu cao lỏng sinh đỉa chuột nhắt - Bướ c đầu tìm hiểu c c h ế h glucos m áu cửa cao lỏng sinh địa II ĐÓI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ứ u 2.1 Nguyên liệu nghiên cứu Cao lỏng sinh địa PGS.TS Vũ Văn Điền xây dựng, bào chế dạng cao lỏng Khoa Dược học c ổ truyền, Đại học Dược Hà Nội, gồm vị: sinh địa, tri mẫu, cát căn, mạch mơn, trương traật, hồng k sống, đó, sinh địa vị thuốc 2.2 Đối tư ợ ng ng hiên cứu Chuột nhắt trắng chủng Swiss, tế bào vân chuột nhắt C2Ci2, lưu giữ nitơ lỏng 2.3 P hươ ng p h áp n ghỉên cửu : nghiên cứu thực nghiệm 2.3.1 Nghiên cún tác dụng hạ giucose lỉpiđ máu CLSĐ chuột nhắt trắng đái tháo đường týp Chế độ ăn giàu chất béo (High fat diet HFD), chế độ ăn b nh thường (Normal fat d ie t" NFD) [3, 6] Chuột nhắt trắng gây béo ph ĐTĐ chế độ ăn giàu lượng từ chất béo fructose (HFD) tuần Chuột thí nghiệm chia làm 10 lô: (I) Lô 1: ché độ NFD, tiêm nước muối sinh lý, uống nước cất ừong 10 ngày; (2) Lô 2: Chế độ HFD, tiêm alỉoxan 200 mg/kg, uống nước cất 10 ngày; (3) Lô 3: Ché độ HFD, tiêm alloxan 200 mg/kg, uống gliclazid 30 mg/kg 10 ngày; (4) Lô 4: Ché độ HFD, tiêm alloxan 200 mg/kgf uống CLSĐ 10 g/kg 10 ngày; (5) Lô 5: Chế độ HFD, tiêm aỉỉoxan 200 mg/kg, uổng CLSĐ 20 g/kg 10 ngày; (6) Lô 6: chế độ NFD, tiêm nước muối sinh lý, uống nước cất 20 ngày; (7) Lô 7: Chế độ HFD, tiêm alloxan 200 mg/kg, uống nước cất 20 ngày; (8) Lô 8: Chế độ HFD, tiêm alloxan 200 mg/kg, uống gliclazid 30 mg/kg 20 ngày; (9) Lô 9: Chế độ HFD, tiêm alloxan 200 mg/kg, uống CLSĐ 10 g/kg 20 ngày; (10) Lô 10: Chế độ HFD, tiêm alloxan 200 mg/kg, uống CLSĐ 20 g/kg 20 ngày Chuột định lượng glucose máu lần sau nhịn đói qua đêm Chuột từ lơ 5, ” 10 ăn chế độ HFD, lô lô ăn chế độ NFD tuần liên tục, sau tuần tất chuột định lượng glucose máu lần Tiêm alloxan liều 200 mg/kg cho lô chuột 1 , lô tiêm nước muối sinh lý 72 sau, định lượng glucose máu lần 3, chọn chuột lô tiêm alloxan bị ĐTĐ (mức glucose đói 10 mmoỉ/1) đưa vào nghiên cứu Các lô chuột uống nước cất CLSĐ 10 ngày 20 ngày sau gây mô h nh Định lượng glucose máu số ỉipid máu lức đói thời điểm sau uống CLSĐ 10 ngày 20 ngày Khi lấy máu chuột xét nghiệm lần cuối, tiến hành mổ chuột lấy gan, tụy Xác định trọng lượng gan hàm lượng malonyl dialdehyd (MDA) Quan sát mô bệnh học gan, tụy (vi thể) 30% số chuột lô 2.3.2 Nghiên cứu tác dụng hạ glucose m áu CLSĐ chuột nhắt trắng gây tăng đường huyết b ng adrenalin Chuột nhắt trắng truởng thành chia ngẫu nhiên thành lô: (1) Lô 1: u ốn g nước cất + tiêm NaCl 0,9%; (2) Lô 2: Uống nưốc cất + Eiêm adrenalin 0,6 mg/kg; (3) Lô 3: u ố n g gliclazid 30 mg/kg + tiêm adrenalin 0,6 mg/kg; (4) Lô 4: u ố n g CLSĐ 10 g/kg + tiêm adrenalin 0,6 mg/kg; (5) Lô 5: Ưống CLSĐ 20 g/kg + tiếm adrenalin 0,6 mg/kg Chuột định lượng glucose máu lần sau nhịn đói qua đêm Sau đó, cho chuột uống thuốc thử gliclazid liên tục ngày vậo buổi sáng sau uống thuốc cuối, tiêm adrenalin 0,6 mg/kg lô Lô tiêm NaCl ,9 % liều 0,1 ml/10g chuột (trước chuột nhịn ăn qua đêm), i sau tiêm adrenalin 0,6 mg/kg, chuột định lượng glucose máu lần 2.3.3 Đánh giá test đirag nạp glucose chuọỉ nhắt gây đái tháo đường b ng alloxan Chuột nhắt trắng trưởng thành chia ngẫu nhiên thành lô: (1) Lô 1: tiêm NaCl 0,9%, uống nước cất; (2) Lô 2: tiêm alloxan 250 mg/kg, uống nước cất; (3) Lô 3: tiêm aỉloxan 250 mg/kg, tiêm insulin UI/kg; 545 (4) Lô 4: tiêm alloxan 250 mg/kg, uống CLSĐ 10 g/kg; (5) Lô 5: tiêm alỉoxan 250 mg/kg, uống CLSĐ 20 g/kg Chuột định lượng glucose máu lần ỉ sau nhịn đói qua đêm Sau đó, tiêm alloxan 250 mg/kg lô Lô tiêm N aC l 0,9% ỉiều 0,1 ml/10g chu ộ t 72 sau tiêm, chuột định lượng glucose máu lần (sau nhịn đói qua đêm) Sau đó, chuột uống thuốc thử tiêm insulin liên tục ngày vào buổi sáng Sau liều thuốc cuối giờ, chuột ỉô 2 5: uống dung địch glucose liều g/kg (trước chuột nhịn đói qua đêm) Định lượng glucose máu lần (60 phút) sau uống glucose 2.3.4 Đánh giá ảnh hư ng CLSĐ đến khả dung nạp gỉucose tế bào C2C 12 Nguyên tắc tiến hành: ủ tế bào vân C2C 12 với CLSĐ nồng độ khác mơi trường có chứa glucose Xác định gián tiếp lượng glucose vận chuyển vào tế bao thơng q ua định lượng nồng độ glucose cịn lại môi trường nuôi sau ủ với mẫu thử Các giếng tế bào sau nuổi cấy biệt hóa chia thành lơ, mơi ỉơ giếng: (1) Lô ỉ (10 chứng): Bổ sung DMSO nồng 0,1%; (2) Lơ 2: vói insulin nồng độ ,ỉ Ml/ml; (3) Lô 3: ủ với CLSĐ nồng độ ju/ml; (4) Lô 4: ủ v i CLSĐ nồng độ 10 ịil/mỉ lô tế bào 37°c v im ô i trường RPMI 1640 chứa mM glucose 0,1% BSA Xác định mức độ dung nạp glucose vào tế bào 2.4 X lý số liệu: số liệu xử lý phần mềm Microsoft Excel Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê với p0t05) ,9 1* ,80 (p320,05) 5,04 ±1,93 (p42>0,05) LÔ 5,19 ±1,11 (p52>0,G5) 4,72 ±1,05 (p520,05) 5,46 ± 1,62 (pl20,05) 4,58 ±2,55 (p320,05) 15,02 ±3,28 (p420,05) 4,21 ± 2,63 (p5"2