Khảo sát thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của cao alkaloid chiết xuất từ lá cây thuốc thượng ở tỉnh quảng nam (phaenthus vietnamensis ban)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA LÂM BÍCH THẢO KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CAO ALKALOID CHIẾT XUẤT TỪ LÁ CÂY THUỐC THƯỢNG Ở TỈNH QUẢNG NAM (PHAENTHUS VIETNAMENSIS BAN) Chuyên ngành: Kỹ thuật hoá học Mã số: 60520301 LUẬN VĂN THẠC SĨ TP HỒ CHÍ MINH, tháng 01 năm 2019 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA –ĐHQG -HCM Cán hướng dẫn khoa học : Cán chấm nhận xét : Cán chấm nhận xét : Luận văn thạc sĩ bảo vệ Trường Đại học Bách Khoa, ĐHQG Tp HCM ngày 12 tháng 01 năm 2019 Thành phần Hội đồng đánh giá luận văn thạc sĩ gồm: (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị Hội đồng chấm bảo vệ luận văn thạc sĩ) PGS.TS PHẠM THÀNH QUÂN TS HOÀNG THỊ KIM DUNG TS LÊ VĂN MINH TS HUỲNH KHÁNH DUY TS PHAN THỊ HOÀNG ANH Xác nhận Chủ tịch Hội đồng đánh giá LV Trưởng Khoa quản lý chuyên ngành sau luận văn sửa chữa (nếu có) CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG PGS.TS PHẠM THÀNH QUÂN TRƯỞNG KHOA KỸ THUẬT HÓA HỌC GS TS PHAN THANH SƠN NAM ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HCM CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA Độc lập - Tự - Hạnh phúc NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: Lâm Bích Thảo MSHV: 1670201 Ngày, tháng, năm sinh: 25/11/1983 Nơi sinh: Cà Mau Chuyên ngành: Kỹ thuật hoá học Mã số: 60520301 TÊN ĐỀ TÀI: KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CAO ALKALOID CHIẾT XUẤT TỪ LÁ CÂY THUỐC THƯỢNG Ở TỈNH QUẢNG NAM (PHAENTHUS VIETNAMENSIS BAN) NHIỆM VỤ Chiết xuất cao alkaloid từ Thuốc thượng Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào cao chiết alkaloid từ Thuốc thượng Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn cao chiết alkaloid từ Thuốc thượng Phân lập xác định cấu trúc hợp chất cao chiết alkaloid từ Thuốc thượng NỘI DUNG Chiết xuất cao alkaloid từ Thuốc thượng Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào cao chiết alkaloid từ Thuốc thượng Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn cao chiết alkaloid từ Thuốc thượng Phân lập hợp chất cao chiết alkaloid từ Thuốc thượng Xác định cấu trúc hợp chất phân lập cao chiết alkaloid từ Thuốc thượng I NGÀY GIAO NHIỆM VỤ: 20/8/2018 II NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: 20/12/2018 III CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: PGS.TS Trần Công Luận TP.HCM, ngày 12 tháng 01 năm 2019 CÁN BỘ HƯỚNG DẪN CHỦ NHIỆM BỘ MÔN ĐÀO TẠO TRƯỞNG KHOA LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin cảm ơn Ba Mẹ Anh Chị bên tạo điều kiện tốt để đạt thành ngày hôm Cảm ơn PGS TS Trần Công Luận, người Thầy tận tình hướng dẫn em thực đề tài Cảm ơn GS TS Phan Thanh Sơn Nam, PGS.TS Lê Thị Hồng Nhan thầy cô giảng viên cao học K2016 Khoa Kỹ Thuật Hóa Học trường Đại học Bách Khoa Tp HCM dạy bảo, truyền đạt kiến thức cho em suốt khóa học Cảm ơn PGS TS Nguyễn Thị Thu Hương, ThS Dương Thị Mộng Ngọc, ThS Bùi Thế Vinh, TS Lê Văn Minh Thầy Cô, Anh Chị em, bạn bè Trung tâm Sâm Dược liệu Tp HCM, mơn Hóa Hữu Cơ, khoa Kỹ Thuật Hóa Học, trường Đại học Bách Khoa Tp HCM giúp đỡ thực đề tài Lời cảm ơn sau em dành cho Chồng, người bên anh, động viên, an ủi, hỗ trợ chỗ dựa vững cho em vượt qua khó khăn thời gian qua… Xin chân thành cảm ơn! TÓM TẮT LUẬN VĂN Đề tài luận văn: “Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học cao alkaloid chiết xuất từ Thuốc thượng tỉnh Quảng Nam (Phaeanthus vietnamensis Ban)” Học viên thực hiện: Lâm Bích Thảo Cán hướng dẫn: PGS TS Trần Công Luận Thời gian thực hiện: Tháng 07/2017 đến tháng 12/2018 Nội dung đề tài - Chiết xuất cao alkaloid từ Thuốc thượng - Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào cao chiết alkaloid từ Thuốc thượng - Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn cao chiết alkaloid từ Thuốc thượng - Tiến hành sắc ký cột để phân lập hợp chất tinh khiết - Xác định cấu trúc hợp chất phân lập cao chiết alkaloid từ Thuốc thượng Kết đề tài - Thu 36,23g cao chiết alkaloid từ 3,5kg Thuốc thượng - Cao chiết alkaloid từ Thuốc thượng có hoạt tính gây độc tế bào với nồng độ IC50 tương ứng với dòng tế bào ung thư MCF – 7, NCI - H460, HepG2, HeLa, tế bào thường 26,71; 32,28; 11,68; 31,19 70,64 μg/mL - Hoạt tính kháng khuẩn cao alkaloid cao Cao alkaloid cho giá trị IC50 với dòng vi khuẩn E coli ATCC® 25922 TM, P aeruginosa ATCC® 28853 TM, S aureus ATCC® 43300TM (MRSA) S aureus ATCC® 25953TM 1,5625; 3,125; 0,1953; 0,3906 mg/mL - Năm hợp chất phân lập từ Thuốc Thượng bao gồm: AN04, AN02, PV2, PV3 PV4 - Cấu trúc hợp chất phân lập xác định là: AN04 (lupeol), AN02 (acid betulinic), PV2 (N-methyl-6,7-dimethoxy-1-oxoisoquinolin), (oxobuxifolin) PV4 (lanuginosin) PV3 ABSTRACT I RESEARCH CONTENTS - Extraction of alkaloids extract from Phaeanthus vietnamensis Ban leaves - Evaluation of in vitro cytotoxic activity of alkaloids extract from Phaeanthus vietnamensis Ban leaves against human cancer cell lines - Evaluation of antimicrobial activity of alkaloids extract from Phaeanthus vietnamensis Ban leaves - Isolation and purification of compounds using column – chromatographic technique - Identification of chemical structure of compounds from alkaloids extract of Phaeanthus vietnamensis Ban leaves II RESULTS - Obtained 36.23 g alkaloids extract from 3.5 kg of Phaeanthus vietnamensis Ban leaves - Alkaloids extract from Phaeanthus vietnamensis Ban leaves preseted cytotoxic activity against some human cancer cell lines such as MCF-7 (breast cancer cells), NCI-H460 (lung carcinoma cells), HepG2 (liver carcinoma cells), HeLa (cervical carcinoma) and Fibroblast with the IC50 values of 26.71, 32.28, 11.68, 31.19 and 70,64 μg/mL, respectively - The alkaloids extract exhibited a ntibacterial activity against E coli ATCC® 25922 TM, P aeruginosa ATCC® 28853 TM, S aureus ATCC® 43300TM (MRSA) S aureus ATCC® 25953TM (MSSA) with MIC values of 1.5625, 3.125, 0.1953 and 0.3906 mg/mL, sequentialy - Five compounds were isolated from Phaeanthus vietnamensis Ban leaves include AN04, AN02, PV2, PV3 and PV4 These were all lupeol, betulinic acid, N-methyl-6,7-dimethoxy-1-oxoisoquinolin, lanuginosin, respectively oxobuxifolin, and LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam kết luận văn hoàn thành dựa kết nghiên cứu chưa dùng cho luận văn cấp khác Tp HCM, tháng 12 năm 2018 Người thực Lâm Bích Thảo DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Chữ tắt Chữ nguyên Ý nghĩa Abs Absorbance Độ hấp thu ATCC American Type Culture Collection br broad 13C-NMR 13C-Nuclear 1H-NMR 1H-Nuclear CF Chloroform Chloroform COSY Correlated Spectroscopy Phổ tương quan 1H – 1H d doublet Đỉnh đôi dd doublet of doublets Đỉnh đôi kép DD Dung dịch Dung dịch DĐVN Dược điển Việt Nam DE Diethyl ether Diethyl ether DMSO Dimethyl sulfoxide Dimethyl sulfoxid EDTA Ethylenediaminetetraacetic acid HBSS Hank’s balanced salt solution HMBC Heteronuclear Multiple Bond Correlation Phổ HMBC HSQC Heteronuclear Single Quantum Correlation Phổ HSQC IC50 Inhibitor concentration 50% Nồng độ ức chế 50% J coupling constant Hằng số ghép J m multiplet Nhiều đỉnh, đỉnh bội MS Mass spectrometry Khối phổ MIC Minium Inhibitory Concentration Nồng độ ức chế tối thiểu NMR Nuclear Magnetic Resonance Cộng hưởng từ hạt nhân OD Optical Density Mật độ hấp thu PBS Phosphate buffered saline Dung dịch đệm phosphat ppm parts per million Phần triệu Đỉnh rộng Magnetic Resonance Cộng hưởng từ hạt nhân Magnetic Resonance Cộng hưởng từ hạt nhân proton 13C s singlet Đỉnh đơn SKLM Sắc ký lớp mỏng Sắc ký lớp mỏng tR Retention time Thời gian lưu TT Thuốc thử UV Ultra violet (Phổ) tử ngoại UV254 Ultra violet, λ=254 nm Đèn UV bước sóng 254 nm UV365 Ultra violet, λ=365 nm Đèn UV bước sóng 365 nm VS Vaniline - sulfuric Thuốc thử Vanilin-sulfuric XTT Màu nhuộm tetrazolium hệ II 120 Phụ lục 5.1 Khối phổ hợp chất PV4 121 Phụ lục 5.2 Phổ 1H-NMR hợp chất PV4 DMSO (500 Hz) (1) 122 Phụ lục 5.3 Phổ 1H-NMR hợp chất PV4 DMSO (500 Hz) (2) 123 Phụ lục 5.4 Phổ 13C-NMR hợp chất PV4 DMSO 124 Phụ lục 5.5 Phổ DEPT hợp chất PV4 DMSO (1) 125 Phụ lục 5.6 Phổ DEPT hợp chất PV4 DMSO (2) 126 Phụ lục 5.7 Phổ HMBC hợp chất PV4 DMSO (1) 127 Phụ lục 5.8 Phổ HMBC hợp chất PV4 (2) 128 Phụ lục 5.9 Phổ HSQC hợp chất PV4 129 Phụ lục 5.10 Phổ HSQC hợp chất PV4 (tt) 130 Phụ lục 5.11 Phổ COSY hợp chất PV4 131 Phụ lục 5.12 Phổ COSY hợp chất PV4 (tt) 132 Phụ lục 5.13 Phổ NOESY hợp chất PV4 (1) 133 Phụ lục 5.14 Phổ NOESY hợp chất PV4 (2) 134 PHẦN LÝ LỊCH TRÍCH NGANG Họ tên: Lâm Bích Thảo Ngày, tháng, năm sinh: Nơi sinh: Cà Mau 25/11/1983 Địa liên lạc: 73/12 Bùi Đình Túy, phường 12, quận Bình Thạnh, TP HCM Q TRÌNH ĐÀO TẠO: (Bắt đầu từ Đại học đến nay) STT Tên trường 01 02 Ngành học Năm học Đại học Khoa Học Tự Nhiên TP Sinh học 2001 HCM (Chuyên ngành Sinh hóa) 2007 Đại học Bách Khoa TP HCM Kỹ Thuật Hóa Học 2016 đến đến (Chuyên ngành Hóa Hữu Cơ) Q TRÌNH CƠNG TÁC: (Bắt đầu từ làm đến nay) STT Tên Cơng ty Vị trí Năm làm việc 01 Công ty Cổ phần BV Pharma Kiểm nghiệm (QC) 3/2008 đến 10/2008 02 Trung Tâm Sâm Dược Liệu TP Nghiên cứu viên 10/2008 đến HCM ... hoá học Mã số: 60520301 TÊN ĐỀ TÀI: KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CAO ALKALOID CHIẾT XUẤT TỪ LÁ CÂY THUỐC THƯỢNG Ở TỈNH QUẢNG NAM (PHAENTHUS VIETNAMENSIS BAN) NHIỆM VỤ Chiết. .. tài ? ?Khảo sát thành phần hóa học hoạt tính sinh học cao alkaloid chiết xuất từ Thuốc thượng tỉnh Quảng Nam (Phaeanthus Vietnamensis Ban)? ?? thực nhằm nghiên cứu thêm hợp chất alkaloid Thuốc thượng. .. chất cao chiết alkaloid từ Thuốc thượng NỘI DUNG Chiết xuất cao alkaloid từ Thuốc thượng Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào cao chiết alkaloid từ Thuốc thượng Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn cao chiết