Lựa chọn thức ăn để nhân nuôi sâu khoang spodoptera litura phục vụ sản xuất nuclear polyhedrosis virus

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP LỰA CHỌN THỨC ĂN ĐỂ NHÂN NUÔI SÂU KHOANG (Spodoptera litura) PHỤC VỤ SẢN XUẤT NUCLEAR POLYHEDROSIS VIRUS Ngành: Công Nghệ Sinh Học Chuyên ngành: Công Nghệ Sinh Học Giảng viên hướng dẫn : TS Nguyễn Thị Hai Sinh viên thực MSSV: 1151110444 : Nguyễn Huỳnh Ngọc Diễm Lớp: 11DSH05 TP Hồ Chí Minh, 2015 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan đồ án tốt nghiệp thân thực hiện, hướng dẫn TS Nguyễn Thị Hai, môn Công Nghệ Sinh Học, trường Đại học Cơng nghệ Tp Hồ Chí Minh Những kết đạt đồ án hoàn toàn không chép tác giả Các số liệu trình bày đồ án hồn tồn trung thực Tơi xin chịu trách nhiệm hồn tồn đồ án tốt nghiệp Tp Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2015 Sinh viên Nguyễn Huỳnh Ngọc Diễm LỜI CẢM ƠN Nhờ giúp đỡ cá nhân tập thể, em hoàn thành đồ án Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến: TS Nguyễn Thị Hai, người tận tình hướng dẫn, truyền đạt kinh nghiệm, động viên tinh thần để em hồn thành đồ án ThS Huỳnh Văn Thành, ThS Nguyễn Trung Dũng, người thầy tạo điều kiện, giúp đỡ để em thực đồ án Các thầy cô phụ trách môn Công Nghệ Sinh Học trường Đại học Cơng nghệ Tp.Hồ Chí Minh, tận tình bảo, hướng dẫn em suốt thời gian học tập trường thời gian thực đồ án Tập thể bạn thực phòng thí nghiệm Cơng nghệ Sinh Học trường Đại học Cơng nghệ Tp.Hồ Chí Minh, bạn ln quan tâm, ủng hộ động viên tinh thần giúp em vượt qua khó khăn q trình thực đồ án Và đặc biệt em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến với gia đình em, người ủng hộ, động viên, giúp đỡ lúc em gặp khó khăn q trình thực Sau em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến trường Đại học Công Nghệ Tp Hồ Chí Minh, nơi em gắn bó suốt bốn năm học qua, giúp em tiếp cận điều bổ ích, kinh nghiệm sống Tp Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2015 Sinh viên Nguyễn Huỳnh Ngọc Diễm Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC MỤC LỤC .i DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT iii DANH MỤC CÁC BẢNG iv DANH SÁCH CÁC HÌNH v MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu sơ lược sâu khoang (Spodoptera litura) 1.1.1 Đặc điểm sinh học, hình thái của sâu khoang 1.1.2 Tác hại 1.1.3 Biện pháp phòng trừ 1.2 Giới thiệu virus NPV gây bệnh côn trùng 1.2.1 Hình thái: 1.2.2 Cấu trúc 1.2.3 Bệnh lý 1.2.4 Cơ chế gây bệnh của virus diệt côn trùng 10 1.2.5 Triệu chứng của bệnh virus sâu khoang 11 1.2.6 Các yếu tố ảnh hưởng đến hiệu lực của virus hạn chế sử dụng chế phẩm virus 13 1.2.7 Ưu nhược điểm của việc sử dụng chế phẩm NPV phòng trừ dịch hại 15 1.3 Nghiên cứu sử dụng thức ăn nhân tạo để nuôi sâu khoang Spodoptera litura .17 1.3.1 Các kết nghiên cứu giới 17 1.3.2 Kết nghiên cứu tại Việt Nam 23 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.1 Vật liệu 25 2.1.1 Dụng cụ 25 2.1.2 Nguyên liệu 25 i Đồ án tốt nghiệp 2.1.3 2.2 Hóa chất 25 Nội dung phương pháp nghiên cứu 26 2.2.1 Nội dung nghiên cứu 26 2.2.2 Phương pháp nghiên cứu .26 2.2.3 Phương pháp nuôi sâu 31 2.2.4 Quy trình vệ sinh 33 2.3 Chỉ tiêu theo dõi 33 3.1 Ảnh hưởng số công thức thức ăn nhân tạo đến sinh trưởng sâu khoang 35 3.1.1 Ảnh hưởng của thức ăn đến kích thước của sâu 35 3.1.2 Ảnh hưởng của thức ăn đến trọng lượng sâu khoang 37 3.1.3 Ảnh hưởng của các loại thức ăn nhân tạo đến khả sống sót của sâu khoang 42 3.1.4 Ảnh hưởng của các loại thức ăn nhân tạo đến khả sinh sản của bướm 43 3.2 Ảnh hưởng thức ăn đến hiệu sản xuất NPV sâu khoang 47 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .49 4.1 Kết luận 49 4.2 Kiến nghị .49 TÀI LIỆU THAM KHẢO 50 ii Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT MTTANT: Môi trường thức ăn nhân tạo NPV: virus đa diện nhân (Nuclear Polyhedrosis Virus) iii Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1 Thành phần môi trường thức ăn nhân tạo cải tiến 18 Bảng Thành phần thức ăn dựa môi trường thạch bột sắn Ấn Độ 20 Bảng Kích thước thể sâu nuôi công thức 36 Bảng Trọng lượng thể sâu nuôi công thức 37 Bảng 3 Thời gian phát dục sâu khoang nuôi công thức thức ăn nhân tạo 41 Bảng Ảnh hưởng loại thức ăn nhân tạo đến khả sống sâu khoang .42 Bảng Khả sinh sản bướm .43 Bảng Giá thành thức ăn nhân tạo nuôi sâu khoang 45 Bảng Giá thành thức ăn nuôi sâu ở công thức 46 Bảng Tỷ lệ (%) sâu chết virus ở ngày sau nhiễm 47 Bảng Hiệu lực diệt sâu 47 iv Đồ án tốt nghiệp DANH SÁCH CÁC HÌNH Hình 1 Vịng đời sâu khoang Hình Cấu trúc thể vùi Hình Thức ăn nhân tạo công thức (đậu xanh casein) 27 Hình 2 Thức ăn nhân tạo cơng thức (đậu xanh đậu nành) .28 Hình Thức ăn nhân tạo cơng thức (đậu trắng) 29 Hình Thức ăn nhân tạo cơng thức (mầm lúa mì) .30 Hình Kích thước sâu ở cơng thức vào ngày ni 36 Hình Trọng lượng sâu ở công thức vào ngày ni 38 Hình 3 Sâu khoang ngày tuổi thứ công thức 39 Hình Sâu khoang ngày tuổi thứ công thức 39 Hình Sâu khoang ngày tuổi thứ 11 công thức 40 Hình Ở trứng sâu nở .44 Hình Sâu chết virus 48 v Đồ án tốt nghiệp MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Việt Nam nước có khí hậu nhiệt đới ẩm gió mùa nên mang lại nhiều thuận lợi cho nơng nghiệp, bên cạnh đó, điều kiện thuận lợi để phát sinh nhiều loại dịch bệnh nơng nghiệp Điển hình loài sâu khoang ăn tạp (Spodoptera litura), gây hại với 112 loại trồng thuộc 44 họ thực vật (Chair Patel, 1983) bao gồm loại rau đậu, thực phẩm, công nghiệp, lương thực, Nông dân sử dụng nhiều biện pháp để phòng trừ sâu khoang gây hại việc sử dụng thuốc hóa học ln lựa chọn hàng đầu, khơng có hiệu diệt sâu cao mà rút ngắn thời gian phòng trừ Tuy nhiên, hệ lụy kèm theo sau vơ nguy hiểm như: gây hại cho sức khỏe người, tiêu diệt lồi sinh vật có ích, tạo dịng kháng thuốc hóa học, gây ô nhiễm môi trường, Trước thực trạng đó, việc tìm biện pháp giải để hướng đến nông nghiệp xanh, bền vững yêu cầu cấp thiết Biện pháp sinh học giải pháp cho có hiệu quả, khơng khơng gây hại cho người, an tồn cho gia súc, khơng gây ảnh hưởng đến lồi sinh vật có ích mà cịn góp phần cải thiện mơi trường giảm sử dụng thuốc hóa học Hiện giới có khơng cơng trình nghiên cứu sử dụng lồi thiên địch để phịng trừ sâu khoang như: lồi ăn mồi, ong ký sinh, Bt, NPV Các cơng trình nghiên cứu chứng minh NPV ( Nuclear Polyhedrosis Virus) có hiệu tiêu diệt sâu khoang cao, khả gây chết lây lan NPV quần thể sâu Chính vậy, việc tạo chế phẩm NPV để phòng trừ sâu khoang thay cho thuốc hóa học cần thiết Biện pháp sản xuất sinh khối NPV ở Việt Nam nhiều quốc gia khác giới nhân virus thể sâu ký chủ Điều địi hỏi phải có sâu ký chủ khỏe, đồng Yêu cầu thỏa mãn nuôi điều kiện nhân tạo Trên giới có nhiều nghiên cứu nhân ni sâu khoang Nhưng ở Việt Nam, thức ăn nhân tạo để nhân nuôi sâu khoang phù hợp với điều kiện nguồn vật liệu nước cịn bỏ ngỏ Chính Đồ án tốt nghiệp vậy, sinh viên thực đề tài mang tên: “LỰA CHỌN THỨC ĂN NHÂN TẠO ĐỂ NHÂN NUÔI SÂU KHOANG (Spodoptera litura) VÀ SẢN XUẤT NUCLEAR POLYHEDROSIS VIRUS” Mục đích nghiên cứu đề tài Tìm thành phần thức ăn nhân tạo để nhân nuôi sâu khoang số lượng lớn sản xuất NPV in vivo Mục tiêu nghiên cứu đề tài - Lựa chọn công thức thức ăn nhân tạo tốt để nhân nuôi sâu khoang - Xác định ảnh hưởng công thức thức ăn nhân tạo đến sản xuất NPV sâu khoang Đồ án tốt nghiệp 16 Tỷ lệ sâu vào nhộng ANOVA Table for ty le sau vao nhong by cong thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 1550.89 775.444 Within groups 33.44444 200.667 23.19 0.0015 Total (Corr.) 1751.56 Multiple Range Tests for ty le sau vao nhong by cong thuc -Method: 95.0 percent LSD cong thuc Count Mean Homogeneous Groups -CT2 51.0 X CT1 62.0 X CT3 82.6667 X 74 Đồ án tốt nghiệp 17 Tỷ lệ nhộng vũ hóa ANOVA Table for ty le nhong vu hoa by cong thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups Within groups 412.82 206.41 98.7463 16.4577 12.54 0.0072 Total (Corr.) 511.567 Multiple Range Tests for ty le nhong vu hoa by cong thuc -Method: 95.0 percent LSD cong thuc Count Mean Homogeneous Groups -CT2 72.5467 X CT1 79.22 X CT3 89.0367 X 75 Đồ án tốt nghiệp 18 Khả sinh sản bướm ANOVA Table for so o trung by cong thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 48.7021 24.351 Within groups 13.5213 2.25356 10.81 0.0103 Total (Corr.) 62.2234 Multiple Range Tests for so o trung by cong thuc -Method: 95.0 percent LSD cong thuc Count Mean Homogeneous Groups -CT2 4.79 X CT1 6.43333 X CT3 10.3367 X 76 Đồ án tốt nghiệp 19 Tỷ lệ sâu chết virus ở ngày nhiễm thứ ANOVA Table for ty le sau chet by cong thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 69.1309 34.5654 Within groups 947.896 157.983 0.22 0.8096 Total (Corr.) 1017.03 Multiple Range Tests for ty le sau chet by cong thuc -Method: 95.0 percent LSD cong thuc Count Mean Homogeneous Groups -CT1 4.44333 X CT3 6.66667 X CT2 11.11 X 77 Đồ án tốt nghiệp 20 Tỷ lệ sâu chết virus ở ngày nhiễm thứ ANOVA Table for ty le sau chet by cong thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 1372.95 686.477 Within groups 918.815 153.136 4.48 0.0644 Total (Corr.) 2291.77 Multiple Range Tests for ty le sau chet by cong thuc -Method: 95.0 percent LSD cong thuc Count Mean Homogeneous Groups -CT1 20.0 X CT2 26.6667 XX CT3 48.89 X 78 Đồ án tốt nghiệp 21 Tỷ lệ sâu chết virus ở ngày nhiễm thứ ANOVA Table for ty le sau chet by cong thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 1610.0 805.002 Within groups 2547.67 424.612 1.90 0.2301 Total (Corr.) 4157.68 Multiple Range Tests for ty le sau chet by cong thuc -Method: 95.0 percent LSD cong thuc Count Mean Homogeneous Groups -CT2 28.8867 X CT1 35.5567 X CT3 60.0 X 79 Đồ án tốt nghiệp 22 Tỷ lệ sâu chết virus ở ngày nhiễm thứ ANOVA Table for ty le sau chet by cong thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 3822.29 1916.14 Within groups 1511.29 251.881 7.61 0.0226 Total (Corr.) 5343.58 Multiple Range Tests for ty le sau chet by cong thuc -Method: 95.0 percent LSD cong thuc Count Mean Homogeneous Groups -CT2 35.5567 X CT1 48.89 X CT3 84.4467 X - 80 Đồ án tốt nghiệp 23 Tỷ lệ sâu chết virus ở ngỳ nhiễm thứ 11 ANOVA Table for ty le sau chet by cong thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 2258.21 1279.11 Within groups 1303.76 217.294 5.89 0.0385 Total (Corr.) 3861.98 Multiple Range Tests for ty le sau chet by cong thuc -Method: 95.0 percent LSD cong thuc Count Mean Homogeneous Groups -CT2 46.6667 X CT1 51.1133 X CT3 84.4467 X 81 Đồ án tốt nghiệp 24 Hiệu lực diệt sâu ở ngày nhiễm thứ ANOVA Table for hieu luc diet sau by cong thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 80.1768 40.0884 Within groups 610.046 101.674 0.39 0.6904 Total (Corr.) 690.223 Multiple Range Tests for hieu luc diet sau by cong thuc -Method: 95.0 percent LSD cong thuc Count Mean Homogeneous Groups -CT1 2.38 X CT3 4.60333 X CT2 9.52333 X 82 Đồ án tốt nghiệp 25 Hiệu lực diệt sâu ở ngày nhiễm thứ ANOVA Table for hieu luc diet sau by cong thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 1461.97 730.986 Within groups 684.231 114.039 6.41 0.0324 Total (Corr.) 2146.2 Multiple Range Tests for hieu luc diet sau by cong thuc -Method: 95.0 percent LSD cong thuc Count Mean Homogeneous Groups -CT1 18.2533 X CT2 25.2367 X CT3 48.0967 X 83 Đồ án tốt nghiệp 26 Hiệu lực diệt sâu ở ngày nhiễm thứ ANOVA Table for hieu luc diet sau by cong thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 1785.59 892.793 Within groups 2491.48 415.247 2.15 0.1977 Total (Corr.) 4277.07 Multiple Range Tests for hieu luc diet sau by cong thuc -Method: 95.0 percent LSD cong thuc Count Mean Homogeneous Groups -CT2 25.87 X CT1 32.7 X CT3 58.5733 X 84 Đồ án tốt nghiệp 27 Hiệu lực diệt sâu ở ngày nhiễm thứ ANOVA Table for hieu luc diet sau by cong thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 4641.37 2320.69 Within groups 1542.99 257.164 9.02 0.0155 Total (Corr.) 6184.36 Multiple Range Tests for hieu luc diet sau by cong thuc -Method: 95.0 percent LSD cong thuc Count Mean Homogeneous Groups -CT2 29.4867 X CT1 44.3233 X CT3 83.3333 X 85 Đồ án tốt nghiệp 28 Hiệu lực sâu ở ngày nhiễm thứ 11 ANOVA Table for hieu luc diet sau by cong thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 3094.85 1547.42 Within groups 1322.94 220.49 7.02 0.0269 Total (Corr.) 4417.78 Multiple Range Tests for hieu luc diet sau by cong thuc -Method: 95.0 percent LSD cong thuc Count Mean Homogeneous Groups -CT2 41.7567 X CT1 46.7033 X CT3 83.3333 X 86 Đồ án tốt nghiệp 87 Đồ án tốt nghiệp ... lớn sản xuất NPV in vivo Mục tiêu nghiên cứu đề tài - Lựa chọn công thức thức ăn nhân tạo tốt để nhân nuôi sâu khoang - Xác định ảnh hưởng công thức thức ăn nhân tạo đến sản xuất NPV sâu khoang. .. (2011), sâu khoang tuổi thích hợp để sản xuất NPV Vì vậy, tỷ lệ sống sâu khoang tuổi tiêu quan trọng để đánh giá, lựa chọn loại thức ăn nhân tạo nhân nuôi sâu khoang số lượng lớn, phục vụ sản xuất. .. CHỌN THỨC ĂN NHÂN TẠO ĐỂ NHÂN NUÔI SÂU KHOANG (Spodoptera litura) VÀ SẢN XUẤT NUCLEAR POLYHEDROSIS VIRUS? ?? Mục đích nghiên cứu đề tài Tìm thành phần thức ăn nhân tạo để nhân nuôi sâu khoang