Nghiên cứu tống hợp và hoạt tính kháng viêm, kháng ung thư các hợp chất lai coxib combretastatin TT

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌCVÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - NGUYỄN THỊ THÚY HẰNG NGHIÊN CỨU TỔNG HỢP VÀ HOẠT TÍNH KHÁNG VIÊM, KHÁNG UNG THƢ CÁC HỢP CHẤT LAI COXIB – COMBRETASTATIN TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: 1.PGS TS Ngô Quốc Anh PGS.TS Vũ Đình Hồng HÀ NỘI - 2020 Cơng trình hồn thành Phịng Nghiên cứu phát triển dƣợc phẩm Viện Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC PGS TS Ngơ Quốc Anh PGS TS Vũ Đình Hồng Phản biện 1: Phản biện 2: Phản biện 3: Luận án bảo vệ hội đồng chấm luận án cấp Nhà nước Học Viện Khoa học Công nghệ Vào hồi Có thể tìm thấy luận án tại: - Thư viện Học viện Khoa học Công nghệ - Thư viện Quốc gia MỞ ĐẦU Tính cấp thiết luận án Ung thư nhóm bệnh liên quan đến việc phân chia tế bào cách vơ tổ chức tế bào có khả xâm lấn mơ khác cách phát triển trực tiếp vào mô lân cận di chuyển đến nhiều vị trí khác (di căn) Theo thống kê tổ chức Ung thư toàn cầu GLOBOCAN năm 2018 nước có 300.000 người sống chung với ung thư, có 164.671 ca mới, 114.871 người tử vong bệnh Tồn cầu có khoảng 23 triệu người mắc, năm có 14 triệu người mắc triệu trăm nghìn người tử vong Tổ chức Y tế giới (WHO) xếp Việt Nam nằm 50 nước thuộc top đồ ung thư Việc nghiên cứu tìm thuốc điều trị ung thư lại tác dụng phụ hướng giới khoa học quan tâm Trong số phương pháp điều trị nay, hóa trị liệu phương pháp điều trị ung thư sử dụng nhiều thuốc kháng ung thư - gây độc tế bào Một loại thuốc chống ung thư, sử dụng ngày hóa trị liệu, tác động đến chu kỳ tế bào để ức chế phát triển tế bào ung thư sau gây chết tế bào theo chương trình (apoptosis) Các hướng dẫn điều trị triển vọng thường khuyến nghị kết hợp nhiều loại thuốc chống ung thư hoạt động nhiều chế khác Ngày nay, nghiên cứu khám phá loại thuốc nhắm vào nhiều mục tiêu ý, với mong muốn kết hợp mục tiêu phân tử khác tác nhân hóa học Những ưu điểm phân tử lai so với kết hợp nhiều loại thuốc cải thiện hạn chế kỹ thuật, phản ứng phụ kháng thuốc mục tiêu riêng lẻ [1] Một nhóm chất chống ung thư quan trọng phân tử liên kết tubulin Mặc dù số loại thuốc nhắm mục tiêu vi ống sử dụng lâm sàng, cần tìm kiếm tác nhân khắc phục hạn chế kháng thuốc tác dụng phụ không mong muốn liệu pháp [3] Mục tiêu luận án Thiết kế cấu trúc hợp chất lai coxib - combretastatin Tổng hợp hợp chất lai coxib - combretastatin Sàng lọc hoạt tính kháng ung kháng viêm hợp chất lai Xác định chế kháng viêm kháng ung thư hợp chất lai Tiến hành docking phân tử hợp chất lai coxib - combretastatin với hai đích tác dụng COX2 tubulin Những nội dung nghiên cứu chủ yếu luận án - Nghiên cứu tổng hợp hợp chất dị vịng lai hóa combretastatin celecoxib - Nghiên cứu tổng hợp hợp chất dị vòng aza- podophyllotoxin - Xác định cấu trúc hợp chất tổng hợp - Sàng lọc hoạt tính chất tổng hợp - Nghiên cứu sâu mặt chế tác dụng tác động lên chu kỳ tế bào số chất tiêu biểu - Nghiên cứu khẳng định tương quan mơ hình cấu trúc lai hóa mặt hóa học sinh học lớp chất mục tiêu Hình 31: Mô hợp chất lai coxib – combretastatin theo mục tiêu đặt CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN Tổng quan trình bày chung hợp chất kháng ung thư theo chế ức chế tubulin, sơ lược chế tubulin Nhóm hợp chất theo chế tubulin đề tài đáng quan tâm lĩnh vực nghiên cứu thuốc chống ung thư Các hợp chất combretastatin có hoạt tính sinh học phong phú ứng dụng điều trị số bệnh ung thư, chúng biết đến với hoạt tính gây độc tế bào theo chế ức chế trùng hợp tubulin vị trí colchicin [2] Cho đến hợp chất điều trị ung thư theo chế ứng dụng rộng rãi hướng nghiên cứu nhận nhiều quan tâm - Tổng quan hợp chất combretastatin, thuộc lớp chất cis-stilben, nguồn phong phú hợp chất dẫn đường việc tìm kiếm loại thuốc mới, hợp chất điển resveratrol combretastatin A-4 phosphat thử nghiệm để điều trị bệnh Alzheimer ung thư lâm sàng Các stilben phân lập gần cho thấy có nhiều hoạt tính sinh học đa dạng, bao gồm tính chống oxy hóa, kháng khuẩn, chống sốt rét, gây độc tế bào, bảo vệ gan chống viêm Combretastatin A-4 (CA4) xem tác nhân gây độc tế bào tiềm ức chế mạnh trùng hợp vi ống cách gắn vào điểm gắn kết colchicin tubulin CA-4 có độc tính cao nhiều mơ hình tế bào ung thư, cấu trúc mục tiêu quan tâm - Tổng quan Pyrazol dị vòng có năm cạnh tạo thành nhóm hợp chất đặc biệt hữu ích tổng hợp hữu Chúng nhóm hợp chất nghiên cứu nhiều họ azol Pyrazol báo cáo qua tài liệu có SAR cho thấy, cần thiết cho việc thiết kế chất ức chế chọn lọc COX2 Một hợp chất quan trọng thông dụng hợp chát pyrazole ứng dụng thương mại celecoxib, chất biết đến với hoạt tính kháng viêm mạnh, thuốc ức chế chọn lọc COX2 thông qua hoạt động prostaglandin gây trình viêm đau mà không tác dụng lên prostaglandin COX1 có tác dụng bảo vệ đường tiêu hóa Hơn Celecoxib ức chế tăng sinh mơ hình in vitro tế bào ung thư vú người MCF7 MDAMB-231 Một số nghiên cứu celecoxib hợp chất liên quan gây bắt giữ chu kỳ tế bào giai đoạn G0 /G1 dẫn đến tế bào chết theo chu trình apotosis, ức chế phát triển khối u ngăn chặn hình thành mạch khối u khơng có diện COX2 Qua thấy hợp chất lai hóa combretastatin celecoxib lớp chất đầy hứa hẹn mặt phát triển cấu trúc hoạt tính sinh học góp phần xây dựng chung cho cơng trình nghiên cứu tìm kiếm loại thuốc kháng ung thư ngành hóa dược CHƢƠNG 2: THỰC NGHIỆM 2.1 Hóa chất thiết bị 2.1.1 Hóa chất dung môi 2.1.2 Thiết bị nghiên cứu 2.2 Các phƣơng pháp nghiên cứu 2.2.1 Phương pháp tổng hợp hữu 2.2.3 Phương pháp thử hoạt tính sinh học 2.3 Tổng hợp hợp chất lai coxib- combrestatin 2.3.1 Tổng hợp dẫn chất este chất lai este coxib - combretastatin Hình 2.2 Tổng hợp dẫn chất este hợp chất lai hóa coxib - combrestatin (i) Kiềm: t-BuOLi (3 mmol, eq), đun hồi lưu, (ii) Ethyl chlorooxoacetate (1 mmol, eq) (77), ml THF; (iii) HCl (4 mmol); đun hồi lưu, ml C2H5OH khan; phenylhydrazin (1 mmol, eq) (78) Tổng hợp 20 chất lai dang lai hóa dạng este coxib - combretastatin chất từ 79 đến 98 2.3.2 Tổng hợp hợp chất lai coxib - combrestastatin chứa nhóm CF3 Hình 2.5 Tổng hợp hợp lai hóa coxib - combretastatin chứa nhóm CF3 (a) 100 (1.0 mmol), 99 etyl trifluoroacetat (1,2 eq) NaH (2,5 eq) THF (5 mL), h (b), EtOH (5 mL), axit (1.0 eq); arylhydrazin hydrochlorid 78 (1.0 mmol) thêm liên tiếp vào cặn hồi lưu Chất 102 phân lập qua sắc ký cột 2.3.3 Tổng hợp dẫn chất axit hợp chất lai hóa coxib - combrestatin Hình 2.8 Tổng hợp khung lai ghép combretastatin coxib dạng axit (i) Kiềm: t-BuOLi (3 mmol, eq), đun hồi lưu, (ii) Ethyl chlorooxoacetate (1 mmol, eq), ml THF; (iii) HCl (4 mmol); đun hồi lưu, ml C2H5OH khan; phenylhydrazin (1 mmol, eq) (78) Sản phẩm thu sau phân lập qua sắc ký cột hịa tan hệ dung mơi THF/MeOH/H2O = 3:1:1, sau NaH (1,2 eq) thêm vào hỗn hợp Thực phản ứng 3h thu chất lai hóa dạng axit 103-122 Tổng thành cơng 20 chất lai dang lai hóa dạng axit combretastatin-coxib chất từ 103-122 2.5 Thử nghiệm hoạt tính sinh học hợp chất nghiên cứu Các hợp chất tổng hợp tiến hành sàng lọc hoạt tính kháng ung thư vú MCF7, ung thư đại tràng HT-29, ung thư biểu mô gan Hep-G2 ức chế sản sinh NO CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Những ưu điểm việc sử dụng phân tử lai so với việc đồng thời kết hợp nhiều loại thuốc riêng lẻ cải thiện hạn chế phản ứng phụ kháng thuốc [107] Tuy có hoạt tính trội, combretastatin cịn nhiều tác dụng không mong muốn Đây lý nhóm nghiên cứu đặt mục tiêu kết hợp combretastatin, hợp chất kháng ung thư, celecoxib, chất kháng viêm theo chế COX2, chất bắt nguồn cho hợp chất lai với hy vọng tìm chất mang đặc điểm hoạt tính sinh học lý thú kháng ung thư kháng viêm chất gốc đồng thời gây tác dụng phụ 3.1 Thiết kế cấu trúc hoạt tính sinh học phân tử lai 3.1.1 Thiết kế cấu trúc phân tử lai Nghiên cứu áp dụng chiến lược lai ghép để lai hóa nhóm dược lý quan trọng hai hợp chất gốc celecoxib CA4 phân tử Vòng pyrazole thay 1,2-diphenyl khung celecoxib cấu trúc tương tự cis-1,2-diphenylethylene CA4 Sự thay liên kết đôi vòng khẳng định mặt hoạt tính gây độc tế bào ức chế tubulin [108] Các hợp chất bị khóa dạng cấu hình cis thể số lợi ích ngăn chặn trình đồng phân hóa từ dạng cis thành trans, giúp tăng độ đặc hiệu hoạt chất với mục tiêu tế bào cải thiện tiềm điều trị Sự diện nhóm trimethoxybenzene CA4 cần thiết cho hoạt tính độc tế bào [76] Chúng đặc biệt quan tâm đến việc trì nhóm sulfonamid đặc điểm liên quan đến celecoxib điều dường dẫn đến việc bảo tồn tính chọn lọc COX2 chất lai thu [109] Tác dụng ức chế COX2 có góp phần vào tổng thể hoạt động chống khối u phân tử lai Hình 3.1 Cấu trúc celecoxib, Combretastatin A4 hợp chất lai combretastatin – coxib 3.1.2 Thiết kế hoạt tính sinh học phân tử lai Tác dụng gây độc tế bào hợp chất chống lại ba dòng bào ung thư người HT-29, Hep-G2, MCF-7 ức chế sản sinh NO cách kích hoạt lipopolysaccharide (LPS) tế bào đại thực bào RAW 264.7 Vai trị NO khối u phức tạp, có vai trị kích thích ức chế q trình tế bào tùy thuộc vào điều kiện, ức chế sản sinh NO không liên quan trực tiếp đến độc tính tế bào Nhưng NO thể loạt đặc tính dược lý có ích tương tự prostaglandin hệ tim mạch bao gồm giãn mạch, ức chế kết tập tiểu cầu điều hòa mảng bám bạch cầu vào thành mạch [110] Hơn nữa, việc sử dụng celecoxib phòng chống ung thư vú khối u ác tính bị hạn chế tác dụng phụ nó, đặc biệt nguy biến chứng tim mạch liên quan chủ yếu đến khả giảm sản sinh prostacyclin PGI2 [111] Nhờ thấy trì sản sinh NO với đặc tính ức chế COX2 celecoxib giúp tránh nguy biến chứng tim mạch, chiến lược nhằm thiết kế loạt phân tử đa 11 3.3.1 Sàng lọc hoạt tính sinh học hợp chất lai coxib - combretastatin Sàng lọc hoạt tính 20 hợp chất lai hóa coxib - combretastatin dạng este 02 chất lai chứa nhóm CF3 Độc tính tế bào 20 hợp chất lai hóa coxib dạng este 02 hợp chất chứa nhóm CF3 đánh giá tỷ lệ ức chế phát triển tế bào ba dòng HT-29, Hep-G2 MCF-7 phương pháp phát triển Monks cộng [120] Kết tóm tắt Bảng 3.4 theo hoạt tính giảm dần Các hoạt tính chống tăng sinh celecoxib thể tế bào ung thư người ung thư vú (MCF-7), ung thư gan (Hep-G2) ung thư trực tràng (HT29) công bố [121-123] Trong phạm vi cơng trình nghiên cứu 12 hợp chất lai hóa 102, 96, 81, 82, 94, 93, 91, 92, 89, 90, 97, 85 thể độc tính tế bào dòng MCF-7 mạnh celecoxib năm hợp chất 102, 96, 81, 82, 94 có IC50 < 10 µM Trong số hợp chất 102, 96, 94, 93 97 có độc tính Hep-G2 tương đương với chất gốc celecoxib (65) Hơn nữa, 05 hợp chất lai 96, 94, 90, 97, 80 cho thấy khả chống lại tế bào HT29 mạnh 3-6 lần so với chất gốc celecoxib hợp chất 90 có IC50 10 µM Qua khẳng định, diện nhóm chứa nitơ, halogen vị trí para- hai vịng phenyl liền kề 96, 93, 91, 92, 97 góp phần làm tăng độc tính tế bào Hợp chất 102 mang đầy đủ đặc điểm cấu trúc khung celecoxib CA4 cho thấy hoạt tính gây độc tế bào trội với dòng MCF-7 21 hợp chất celecoxib (65) thử tác dụng ức chế oxit nitric (NO) kích hoạt lipopolysaccharide (LPS) đại thực bào RAW 264.7 [124] Điều thú vị là, ngoại trừ hợp chất 102 98 có hoạt tính kép mạnh trội việc ức chế sản xuất NO hoạt động gây độc tế bào dòng tế bào ung thư MCF-7, hợp chất khác nhóm thể hoạt động ức 12 chế sản xuất NO yếu , nhấn mạnh chúng có tính an tồn tốt hệ thống tim mạch so với celecoxib [110] Bảng 3.4 Tác dụng gây độc tế bào hợp chất lai hóa dạng este ba dòng tế bào ung thư HT-29, Hep-G2, MCF7 ức chế sản xuất NO STT Hợp chất R R’ R’’ IC50 (µM) Ức chế xuất NO sản HT-29 Hep-G2 MCF-7 3,4,5triOMe 4-NH2SO2 1.95±0.11 43.0 ± 6.0 39.96± 3.36 4.63± 0.59 H 4-F 4-NH2SO2 81.6 ± 10.6 18.7 ± 1.7 29.37± 1.90 7.97±0.51 81 H H 4-CN 116.83±7.7 37.6±3.5 >254 8.20± 0.93 82 H H 4-NO2 129.88±15.7 21.2±2.1 >242 9.67± 0.92 94 H 4-OH 4-NH2SO2 92.3 ± 7.2 18.8 ± 1.5 14.51±1.36 8.90± 0.79 93 H 4-Br 4-NH2SO2 73.7 ± 2.6 23.5 ± 1.8 35.48±2.85 19.27±0.27 91 H 4-Br 4-CN 116.01±13.6 32.6± 3.0 >211 20.16± 1.83 92 H 4-Br 4-NO2 91.58±7.8 153.2± 10 >203 21.30± 1.40 89 H 4-Br 4-OMe 21.01±4.3 39.6±2.9 >209 21.51± 1.48 10 90 H 4-Br 4-CF3 > 233 10.0±0.7 75.87±4.41 21.65± 1.86 11 97 H 4-Cl 4-NH2SO2 122.2 ± 9.7 14.1 ± 37.04±4.95 23.79± 3.11 12 85 4-OMe 4-OMe 4-CF3 134.10±15.7 107± 10 >201 29.80± 2.71 13 43 4-Me 4-NH2SO2 83.59 ± 5.0 58.4 ± 3.4 37.11±2.14 30.67±3.79 14 98 H 4,6diOMe 4-NH2SO2 4.41±0.17 136.0 ± 12 >197 39.93± 2.64 15 83 H H 4-NH2SO2 > 233 100 ± 10 54.35±4.57 40.54±2.56 102 96 13 16 79 H H 4-OMe 30.0±13.4 >251 21.43±1.93 43.19±4.86 17 87 4-OMe 4-OMe 4-NO2 148.85±8.4 >211 >211 48.81± 2.62 18 86 4-OMe 4-OMe 4-CN 76.42±9.4 110.3±7.0 >220 48.86± 3.13 19 84 4-OMe 4-OMe 4-OMe 67.06±3.7 160±15 >218 49.32± 1.72 20 80 H H 4-CF3 59.52±5.5 17.3±2.0 63.17± 3.01 50.66± 4.46 21 88 4-OMe 4-OMe 4-NH2SO2 103.4 ±10.5 99.0±6.3 58.57± 4.70 68.43± 7.05 22 98 H 4,6-diOH 4-NH2SO2 > 208.5 173.9 ± 12 64.03± 5.75 83.60± 3.44 0.18± 0.04 0.44± 0.05 0.36± 0.04 8.39±0.31 L-NMMA Ellipticine Bảng 3.5 So sánh tác dụng gây độc tế bào hợp chất lai hóa dạng axit dạng este tế bào ung thư MCF-7 ức chế sản xuất NO IC50 (µM) STT R’ R R’’ Este (NO) Acid (NO) Este (MCF-7) Acid (MCF7) 3,4,5-triOMe 4-NH2SO2 1.95±0.11 43.0 ± 6.0 39.96± 3.36 4.63± 0.59 H 4-F 4-NH2SO2 81.6 ± 10.6 194.5±7.6 7.97±0.51 187.7±9.5 H H 4-CN 116.83±7.7 256.7±22.1 8.20± 0.93 154.5±15.1 H H 4-NO2 129.88±15.7 >261.1 9.67± 0.92 187.6±10.4 H 4-OH 4-NH2SO2 92.3 ± 7.2 75.8±2.6 8.90± 0.79 34.6±2.6 H 4-Br 4-NH2SO2 73.7 ± 2.6 >202.0 19.27±0.27 149.5±7.3 H 4-Br 4-CN 116.01±13.6 97.9±9.4 20.16± 1.83 70.1± 4.6 H 4-Br 4-NO2 91.58±7.8 111.2±8.7 21.30± 1.40 34.0±6.4 H 4-Br 4-OMe 21.01±4.3 >223.7 21.51± 1.48 >223.7 14 10 H 4-Br 4-CF3 > 233 80.0±6.3 21.65± 1.86 129.5±9.7 11 H 4-Cl 4-NH2SO2 122.2 ± 9.7 >220.7 23.79± 3.11 191.1±20.6 12 4-OMe 4-OMe 4-CF3 134.10±15.7 140.3±16.7 29.80± 2.71 136.0±8.4 4-Me 4-NH2SO2 83.59 ± 5.0 13 30.67±3.79 30.0±3.3 14 H 4,6- diOMe 4-NH2SO2 4.41±0.17 >208.7 39.93± 2.64 94.0±6.4 15 H H 4-NH2SO2 > 233 >239.8 40.54±2.56 178.9±12.9 16 H H 4-OMe 30.0±13.4 >271.7 43.19±4.86 209.3 ± 20.0 17 4-OMe 4-OMe 4-NO2 148.85±8.4 185.9±9.8 48.81± 2.62 31.8±3.7 18 4-OMe 4-OMe 4-CN 76.42±9.4 157.0±12.2 48.86± 3.13 83.0±10.3 19 4-OMe 4-OMe 4-OMe 67.06±3.7 145.7±15.2 49.32± 1.72 75.7±6.9 20 H 4-CF3 59.52±5.5 109.4±5.8 50.66± 4.46 203.8 ± 5.1 21 4-OMe 4-OMe 4-NH2SO2 103.4 ±10.5 >209 68.43± 7.05 150.0±14.7 22 H 4-NH2SO2 > 208.5 >222.0 83.60± 3.44 >222.0 L-NMMA H 4,6-diOH 8.39±0.31 0.36± 0.04 Ellipticine Ghi chú: * : Cột thống kê hoạt tính chất este **: Cột thống kê hoạt tính chất axit Các hợp chất lai 102, 96, 81, 82, 94 celecoxib thể hoạt tính vượt trội tiếp tục chuyển sang thử nghiệm sản sinh PGE2 nhằm sàng lọc kỹ hoạt tính kháng viêm lẫn kháng ung thư hoạt chất 3.3.2 Nghiên cứu chế kháng viêm kháng ung thư 3.3.2.1 Nghiên cứu hoạt tính ức chế sản sinh PGE2 Các hợp chất tiêu biểu 102, 96, 81, 82, 94, celecoxib tiếp tục thử nghiệm khả ức chế sản sinh PGE2 15 Bảng 3.7 Ảnh hưởng hợp chất thử nghiệm đến việc sản xuất PEG2 đại thực bào RAW 264.7 kích thích LPS PGE2 (pg/ml) Nồng độ (µM) 102 96 81 82 94 Nồng độ (µM) Celecoxib (43) 20 65.31 223.82 253.60 155.07 246.88 100 41.45 133.59 326.20 277.23 383.49 488.82 20 129.83 0.8 225.56 399.56 490.73 478.52 560.34 278.64 LPS 329.60 3.3.2.2 Phân tích chu kỳ tế bào Hợp chất 96, 81, 82 94 gây tăng số lượng tế bào pha G0 /G1 giảm số lượng pha S G2 /M tương tự celecoxib Celecoxib hợp chất liên quan biết có khả ức chế phát triển khối u tạo trình apoptosis Sự bắt giữ tế bào pha G0 /G1 celecoxib xác định tham gia COX2 PGE2 [104] Mặt khác, hợp chất 102 tạo bắt giữ tế bào pha G2 M đồng thời giảm tế bào pha S Việc bắt giữ tế bào Pha G2 /M dẫn đến ngăn cản tế bào khỏi q trình ngun phân, tính thể tác nhân ức chế vi ống giống colchicin combretastatin [78] Trong trường hợp hợp chất 102, thay liên kết đôi CA4 với vịng pyrazol celecoxib mà trì gốc trimethoxybenzen CA4 quan trọng để thu tính gây độc tế bào kháng phân bào chất gốc [98, 115] Bảng 3.8 Phần trăm tế bào theo pha hợp chất thử nghiệm với MCF7 STT Hợp chất Negative control (DMSO 0,5%) 102 (10 µM) 96 (10 µM) 81 (10 µM) 82 (10 µM) 94 (10 µM) Celecoxib (30 µM) Phần trăm tế bào theo phase (%) % G0/G1 %S % G2/M 42.46 40.47 13.15 40.72 49.00 45.22 50.96 49.55 46.80 35.09 34.17 34.46 30.75 34.50 36.69 21.04 14.17 17.45 14.80 14.34 11.45 16 Đối chứng 102 96 81 82 94 Celecoxib (43) Hình 3.3 Phân tích chu kỳ tế bào hợp chất thử nghiệm bao gồm 102, 96, 81, 82, 94 Celecoxib (43) nồng độ 10 µM MCF-7 3.3.2.3 Kết nghiên cứu hoạt tính gây apoptosis hai chất 82 102 Vì hai hợp chất 102 82 chất ức chế hoạt động chống tăng sinh tiềm năng, ức chế sản sinh PGE2 mạnh celecoxib ức chế chu kỳ tế bào cách có chọn lọc chọn để đánh giá thêm khả gây apoptosis 17 Nghiên cứu hoạt tính gây apoptosis hoạt chất nhờ nhuộm nhân tế bào với Hoechst 33342 Bảng Phần trăm ngưng tụ phân mảnh nhân tế bào hợp chất 102 82 gây Tế bào Apoptosis (%) 82 (20 µM) 82 (10 µM) 82 (5 µM) 102 (20 µM) 102 (10 µM) 5.33 ± 0.34 2.69± 0.22 2.42± 0.27 5.18± 12.38± 0.96 0.33 102 (5 µM) 3.55± 0.39 Camptotheci n (5µM) (-) Đối chứng 22.71± 2.01 2.71± 0.29 Các mẫu nghiên cứu thu Hình ảnh tế bào MCF7 sau nhuộm Hoechst 33342 nồng độ khác nhau: Đối chứng âm Camptothecin (5 µM) 102 (20 µM) 102 (10 µM) 82 (20 µM) 82 (10 µM) 18 Hình 3.4 Hình ảnh tế bào MCF7 tác động mẫu nghiên cứu nhuộm Hoechst 33342 nồng độ khác Nghiên cứu hoạt tính gây apotosis thị caspase ‑ Bảng 3.10 Hoạt tính caspase - 102 82 % Tế bào Apoptosis Hợp chất 102 (20 µM) 102 (10 102 µM) (5 µM) 82 (20µM) 82 (10 µM) 82 (5 µM) Camptothecin (5µM) Giá trị 1.36* 1.21* 1.01 1.08 1.12 1.11 1.67** (-) Đối chứng 1.00 Độ lệch 0.033 0.013 0.037 0.023 0.056 0.040 0.020 0.070 - * P