1. Trang chủ
  2. » Địa lý

IgM

10 5 0

Đang tải... (xem toàn văn)

THÔNG TIN TÀI LIỆU

Thông tin cơ bản

Định dạng
Số trang 10
Dung lượng 274,01 KB

Nội dung

Ủy ban khoa học và chuẩn hóa của hiệp hội quốc tế huyết khối và cầm máu định nghĩa về các tiêu chí lâm sàng và những thông số xét nghiệm mang tính chẩn đoán trong “Tiêu chí Sapporo về [r]

(1)

QUY TRÌNH

N.522 ĐỊNH LƯỢNG KHÁNG THỂ KHÁNG Cardiolipin IgG/IgM N.522 QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG KHÁNG THỂ KHÁNG CARDIOLIPIN IgG

I NGUYÊN LÝ

Xét nghiệm dựa phản ứng miễn dịch gắn enzyme gián bước sau: Các kháng thể có mặt mẫu dương tính gắn với kháng nguyên phủ bề mặt hai giếng phản ứng, hình thành phức hợp kháng nguyên- kháng thể Sau ủ, bước rửa loại bỏ phân tử khơng gắn gắn khơng đặc hiệu Tiếp đó, chất cộng hợp enzyme bổ sung gắn với phức hợp kháng nguyên - kháng thể cố định Sau ủ, bước rửa thứ hai loại bỏ chất cộng hợp không gắn Cơ chất enzyme tiếp tục thêm vào giếng, trình thủy phân tạo màu diễn thời gian ủ Cường độ màu xanh dương tạo tỉ lệ thuận với nồng độ phức hợp kháng nguyên-kháng thể đo phương pháp quang học bước sóng 650 nm hệ thống xét nghiệm miễn dịch ELISA (Enzymelinked immunosorbant assay)

II CHUẨN BỊ

1 Cán thực hiện:

01 bác sĩ 01 cán đại học 01 kỹ thuật viên chuyên ngành Hóa sinh 2 Phương tiện, hóa chất:

Phương tiện xét nghiệm: máy xét nghiệm miễn dịch Alegria- hãng ORGENTEC/ Germany Thuốc thử sẵn sàng sử dụng:

Bộ xét nghiệm định lượng Anti- Cardiolipin IgG sau:

Thanh thử Alegria gồm giếng chứa thành phần sau:

Giếng + Giếng trống khơng phủ (để pha lỗng mẫu) Giếng + Được phủ kháng nguyên (giếng phản ứng) Giếng Mẫu chứng, màu vàng, chứa kháng thể đặc

hiệu, PBS, BSA, chất tẩy, chất bảo quản natri azide 0,09% ProClin 300 0,05%

(2)

Giếng Dung dịch pha loãng mẫu, màu vàng, chứa PBS, BSA, chất tẩy, chất bảo quản natri azide 0,09% ProClin 300 0,05%

Giếng Cơ chất TMB, suốt, chứa 3,3’, 5,5’- Tetramethylbenzidin

Cardiolipin độ tinh cao phủ sẵn vi giếng bão hòa với beta-2-glycoprotein I

Mã sản phẩm mã vạch: Cardiolipin IgG

- Ngồi cịn dung dịch thống như:

+ Wash (1x20mL): Dung dịch rửa, chứa TRIS, detergent, chất bảo quản natri azide 0,09% (50x)

+ System fluid (1x2,5mL): Dung dịch hệ thống chứa acid (1000x)

- Bộ xét nghiệm cần bảo quản bóng tối điều kiện 2-8°C Khơng để hóa chất tiếp xúc với nhiệt, mặt trời ánh sáng mạnh suốt trình bảo quản sử dụng Bảo quản thử Alegria (đậy kín khơ ráo) túi có khóa cung cấp Dung dịch Wash Buffer System Fluid sau pha loãng ổn định tối thiểu 30 ngày bảo quản 2-8°C

Dụng cụ khác: + Máy vortex; Pipet 10 μL; + Ống đong thể tích 1000 mL 2500 mL + Nước cất nước khử ion

3 Người bệnh: Người bệnh giải thích tư vấn trước thực XN, tốt nhịn ăn sáng lấy máu vào buổi sáng

4 Phiếu xét nghiệm: có đầy đủ thơng tin bệnh nhân bao gồm họ tên, tuổi, khoa phòng, chẩn đốn, tình trạng mẫu, tên BS định, ngày định, ngày lấy mẫu, loại thuốc sử dụng (nếu có)…

III CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH

1 Lấy mẫu bệnh phẩm xử lý mẫu:

(3)

- Bệnh phẩm nhận từ khoa lâm sàng phận lấy mẫu phịng khám Nhân viên nhận mẫu lấy thơng tin bệnh nhân từ phần mềm quản lý Bệnh viện, in dán barcode vào ống bệnh phẩm, sau cho ly tâm 4000 vòng phút trước tiến hành kỹ thuật

Bệnh phẩm lưu 2-8°C vòng ngày -20°C vòng tháng Bảo quản chất chuẩn, QC sau hoàn nguyên nhiệt độ -20°C, tiến hành chạy phải để nhiệt độ phòng (20- 25°C) rã đơng hồn tồn lắc trước tiến hành xét nghiệm

2 Tiến hành kỹ thuật

Máy xét nghiệm, hóa chất chuẩn trước thực phân tích Việc chuẩn xét nghiệm định lượng Anti- cardiolipin IgG hiệu chuẩn thay đổi lơ hóa chất Kiểm tra chất lượng nằm giới hạn cho phép Thông thường chạy nội kiểm (QC) mức ngày: mức bình thường khơng bình thường Đối chiếu với luật kiểm tra chất lượng đạt tiến hành phân tích mẫu

Thanh thử Alegria Test Strips với công nghệ SMC sử dụng với thiết bị chẩn đốn Alegria Để có thơng tin chi tiết quy trình vận hành thiết bị, tham khảo tài liệu hướng dẫn sử dụng thiết bị

(1) Bóc miếng dán phủ giếng trống từ đến thử Alegria Test Strips Khơng bóc phần dán phủ có in mã vạch, phủ giếng từ đến

(2) Hút 10 μL mẫu khơng pha lỗng vào đáy giếng (4) Đặt thử vào khay SysTray

(5) Đặt khay SysTray vào vị trí thiết bị Alegria bắt đầu chạy Tất bước sau thực tự động Xét nghiệm chạy hoàn tất thiết bị bắt đầu in kết Định kỳ: Chuẩn lại chạy mức QC sau thay lô thuốc thử sau bảo dưỡng, sửa chữa máy cố, thay trang thiết bị phân tích quan trọng Ghi lại kết vào bảng theo dõi kết chuẩn máy xét nghiệm

Đưa bệnh phẩm vào phân tích theo protocol máy Khi có kết phân tích đối chiếu với phiếu xét nghiệm, trả, lưu kết vào hệ thống mạng, in phiếu kết xét nghiệm trả kết cho người bệnh thời gian quy định

IV NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ

1 Giá trị tham chiếu: Bình thường: Anti- Cardiolipin IgG : < 10 GPL-U/mL 2 Ý nghĩa lâm sàng:

(4)

Các tự kháng thể gắn với phospholipid cardiolipin phospholipid gắn protein beta-2-glycoprotein I

Hội chứng kháng phospholipid (APS, hội chứng Hughes) bệnh tự miễn hệ thống gây tình trạng huyết khối, sảy thai liên tiếp thai chết lưu Các triệu chứng lâm sàng kèm với xuất tự kháng thể đặc hiệu có khả phát máu bệnh nhân bị APS Các tự kháng thể gắn với phospholipid cardiolipin với protein gắn phospholipid beta-2-glycoprotein I

Triệu chứng lâm sàng APS không đủ đặc hiệu để đưa chẩn đoán xác định Do đó, kết xét nghiệm đóng vai trị quan trọng chẩn đoán bệnh Ủy ban khoa học chuẩn hóa hiệp hội quốc tế huyết khối cầm máu định nghĩa tiêu chí lâm sàng thơng số xét nghiệm mang tính chẩn đốn “Tiêu chí Sapporo việc phân loại hội chứng kháng phospholipid”, xuất năm 1999 Tài liệu chỉnh sửa tái năm 2006 2012

Các thông số xét nghiệm bao gồm:

(1) Phát chất kháng đông lupus (LA) huyết tương tăng gấp hai lần vòng 12 tuần

(2) Tăng hiệu giá kháng thể kháng cardiolipin (IgG và/hoặc IgM) Cần xác định hiệu giá kháng thể hai thời điểm cách 12 tuần, sử dụng xét nghiệm ELISA chuẩn hóa để phát kháng thể kháng cardiolipin phụ thuộc beta-2-glycoprotein

(3) Tăng hiệu giá kháng thể kháng beta-2-glycoprotein I (IgG và/hoặc IgM) Cần xác định hiệu giá kháng thể hai thời điểm cách 12 tuần, sử dụng xét nghiệm ELISA chuẩn hóa

APS chẩn đốn xác định đảm bảo đáp ứng tiêu chí lâm sàng tiêu chí xét nghiệm

Sự xuất kháng thể kháng cardiolipin bệnh lupus ban đỏ hệ thống liên quan đến việc giảm tiểu cầu huyết khối tiến triển Trong sản khoa, chúng gây thai chết lưu hỏng thai liên tiếp Hơn nữa, kháng thể anti-cardiolipin phát bệnh thần kinh thiểu tuần hoàn não, thiếu máu não cục bộ, động kinh múa giật Tự kháng thể kháng cardiolipin globulin miễn dịch lớp IgG, IgM, IgA Việc xác định kháng thể IgM điểm có giá trị chẩn đốn giai đoạn mắc bệnh tự miễn, kháng thể IgG xuất giai đoạn tiến triển bệnh Việc xác định kháng thể IgA dường có tầm quan trọng lớn cộng đồng người vùng African-Caribbean

Định lượng kháng thể kháng cardiolipin, đặc biệt IgG, cho thấy độ đặc hiệu cao theo dõi điều trị APS thứ phát liên quan đến SLE

(5)

V NHỮNG SAI SÓT VÀ XỬ TRÍ

Sử dụng bệnh phẩm máu tồn phần thu thập kỹ thuật phê duyệt, tránh gây vỡ hồng cầu

Mẫu huyết dùng cho xét nghiệm phải không bị vỡ hồng cầu Tránh sử dụng mẫu vỡ hồng cầu mẫu nhiễm mỡ, nhiên, mẫu không gây nhiễu xét nghiệm Tránh lặp lại bước làm đông rã đơng mẫu huyết huyết tương làm giảm hoạt tính kháng thể

(6)

N.522 QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG KHÁNG THỂ KHÁNG CARDIOLIPIN IgM I NGUYÊN LÝ

Xét nghiệm dựa phản ứng miễn dịch gắn enzyme gián bước sau: Các kháng thể có mặt mẫu dương tính gắn với kháng nguyên phủ bề mặt hai giếng phản ứng, hình thành phức hợp kháng nguyên- kháng thể Sau ủ, bước rửa loại bỏ phân tử không gắn gắn không đặc hiệu Tiếp đó, chất cộng hợp enzyme bổ sung gắn với phức hợp kháng nguyên - kháng thể cố định Sau ủ, bước rửa thứ hai loại bỏ chất cộng hợp không gắn Cơ chất enzyme tiếp tục thêm vào giếng, trình thủy phân tạo màu diễn thời gian ủ Cường độ màu xanh dương tạo tỉ lệ thuận với nồng độ phức hợp kháng nguyên-kháng thể đo phương pháp quang học bước sóng 650 nm hệ thống xét nghiệm miễn dịch ELISA (Enzymelinked immunosorbant assay)

II CHUẨN BỊ

1 Cán thực hiện: 01 Bác sĩ 01 cán đại học 01 kỹ thuật viên chuyên ngành Hóa sinh

2 Phương tiện, hóa chất:

Phương tiện: máy xét nghiệm miễn dịch Alegria- hãng ORGENTEC/ Germany Thuốc thử sẵn sàng sử dụng:

Bộ xét nghiệm định lượng Anti- cardiolipin IgM sau:

Thanh thử Alegria gồm giếng chứa thành phần sau:

Giếng + Giếng trống khơng phủ (để pha lỗng mẫu)

Giếng + Được phủ kháng nguyên (giếng phản ứng)

Giếng Mẫu chứng, màu vàng, chứa kháng thể đặc hiệu, PBS, BSA, chất tẩy, chất bảo quản natri azide 0,09% ProClin 300 0,05%

(7)

Giếng Dung dịch pha loãng mẫu, màu vàng, chứa PBS, BSA, chất tẩy, chất bảo quản natri azide 0,09% ProClin 300 0,05% Giếng Cơ chất TMB, suốt, chứa 3,3’, 5,5’-

Tetramethylbenzidin

Cardiolipin độ tinh cao phủ sẵn vi giếng bão hòa với beta-2-glycoprotein I

Mã sản phẩm mã vạch: Cardiolipin IgM

- Ngồi cịn dung dịch thống như:

+ Wash (1x20mL): Dung dịch rửa, chứa TRIS, detergent, chất bảo quản natri azide 0,09% (50x)

+ System fluid (1x2,5mL): Dung dịch hệ thống chứa acid (1000x)

- Bộ xét nghiệm cần bảo quản bóng tối điều kiện 2-8°C Khơng để hóa chất tiếp xúc với nhiệt, mặt trời ánh sáng mạnh suốt trình bảo quản sử dụng Bảo quản thử Alegria (đậy kín khơ ráo) túi có khóa cung cấp Dung dịch Wash Buffer System Fluid sau pha loãng ổn định tối thiểu 30 ngày bảo quản 2-8°C

Dụng cụ khác: + Máy vortex; Pipet 10 μL; + Ống đong thể tích 1000 mL 2500 mL + Nước cất nước khử ion

3 Người bệnh: Người bệnh giải thích tư vấn trước thực XN, tốt nhịn ăn sáng lấy máu vào buổi sáng

4 Phiếu xét nghiệm: có đầy đủ thơng tin bệnh nhân bao gồm họ tên, tuổi, khoa phịng, chẩn đốn, tình trạng mẫu, tên BS định, ngày định, ngày lấy mẫu, loại thuốc sử dụng (nếu có)…

III CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH

1 Lấy mẫu bệnh phẩm xử lý mẫu:

(8)

- Bệnh phẩm nhận từ khoa lâm sàng phận lấy mẫu phòng khám Nhân viên nhận mẫu lấy thông tin bệnh nhân từ phần mềm quản lý Bệnh viện, in dán barcode vào ống bệnh phẩm, sau cho ly tâm 4000 vịng phút trước tiến hành kỹ thuật

Bệnh phẩm lưu 2-8°C vịng ngày -20°C vòng tháng Bảo quản chất chuẩn, QC sau hoàn nguyên nhiệt độ -20°C, tiến hành chạy phải để nhiệt độ phịng (20- 25°C) rã đơng hồn toàn lắc trước tiến hành xét nghiệm

2 Tiến hành kỹ thuật

Máy xét nghiệm, hóa chất chuẩn trước thực phân tích Việc chuẩn xét nghiệm định lượng Anti- cardiolipin IgM hiệu chuẩn thay đổi lơ hóa chất Kiểm tra chất lượng nằm giới hạn cho phép Thông thường chạy nội kiểm (QC) mức ngày: mức bình thường khơng bình thường Đối chiếu với luật kiểm tra chất lượng đạt tiến hành phân tích mẫu

Thanh thử Alegria Test Strips với công nghệ SMC sử dụng với thiết bị chẩn đốn Alegria Để có thơng tin chi tiết quy trình vận hành thiết bị, tham khảo tài liệu hướng dẫn sử dụng thiết bị

(1) Bóc miếng dán phủ giếng trống từ đến thử Alegria Test Strips Khơng bóc phần dán phủ có in mã vạch, phủ giếng từ đến

(2) Hút 10 μL mẫu không pha loãng vào đáy giếng (3) Đặt thử vào khay SysTray

(4) Đặt khay SysTray vào vị trí thiết bị Alegria bắt đầu chạy Tất bước sau thực tự động Xét nghiệm chạy hoàn tất thiết bị bắt đầu in kết Định kỳ: Chuẩn lại chạy mức QC sau thay lô thuốc thử sau bảo dưỡng, sửa chữa máy cố, thay trang thiết bị phân tích quan trọng Ghi lại kết vào bảng theo dõi kết chuẩn máy xét nghiệm

Đưa bệnh phẩm vào phân tích theo protocol máy Khi có kết phân tích đối chiếu với phiếu xét nghiệm, trả, lưu kết vào hệ thống mạng, in phiếu kết xét nghiệm trả kết cho người bệnh thời gian quy định

IV NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ

1 Giá trị tham chiếu: Bình thường: Anti- Cardiolipin IgM : < MPL-U/mL 2 Ý nghĩa lâm sàng

(9)

Các tự kháng thể gắn với phospholipid cardiolipin với protein gắn phospholipid beta-2-glycoprotein I

Triệu chứng lâm sàng APS không đủ đặc hiệu để đưa chẩn đốn xác định Do đó, kết xét nghiệm đóng vai trị quan trọng chẩn đốn bệnh Ủy ban khoa học chuẩn hóa hiệp hội quốc tế huyết khối cầm máu định nghĩa tiêu chí lâm sàng thơng số xét nghiệm mang tính chẩn đốn “Tiêu chí Sapporo việc phân loại hội chứng kháng phospholipid”, xuất năm 1999 Tài liệu chỉnh sửa tái năm 2006 2012

Các thông số xét nghiệm bao gồm:

(1) Phát chất kháng đông lupus (LA) huyết tương tăng gấp hai lần vòng 12 tuần

(2) Tăng hiệu giá kháng thể kháng cardiolipin (IgG và/hoặc IgM) Cần xác định hiệu giá kháng thể hai thời điểm cách 12 tuần, sử dụng xét nghiệm ELISA chuẩn hóa để phát kháng thể kháng cardiolipin phụ thuộc beta-2-glycoprotein

(3) Tăng hiệu giá kháng thể kháng beta-2-glycoprotein I (IgG và/hoặc IgM) Cần xác định hiệu giá kháng thể hai thời điểm cách 12 tuần, sử dụng xét nghiệm ELISA chuẩn hóa

APS chẩn đốn xác định đảm bảo đáp ứng tiêu chí lâm sàng tiêu chí xét nghiệm

Sự xuất kháng thể kháng cardiolipin bệnh lupus ban đỏ hệ thống liên quan đến việc giảm tiểu cầu huyết khối tiến triển Trong sản khoa, chúng gây thai chết lưu hỏng thai liên tiếp Hơn nữa, kháng thể anti-cardiolipin phát bệnh thần kinh thiểu tuần hoàn não, thiếu máu não cục bộ, động kinh múa giật Tự kháng thể kháng cardiolipin globulin miễn dịch lớp IgG, IgM, IgA Việc xác định kháng thể IgM điểm có giá trị chẩn đốn giai đoạn mắc bệnh tự miễn, kháng thể IgG xuất giai đoạn tiến triển bệnh Việc xác định kháng thể IgA dường có tầm quan trọng lớn cộng đồng người vùng African-Caribbean

Định lượng kháng thể kháng cardiolipin, đặc biệt IgG, cho thấy độ đặc hiệu cao theo dõi điều trị APS thứ phát liên quan đến SLE

Các dấu hiệu lâm sàng định hướng xác định kháng thể kháng cardiolipin là: SLE, huyết khối, giảm tiểu cầu, thiếu máu não cục bộ, múa giật, động kinh, hỏng thai liên tiếp, thai chết lưu

V NHỮNG SAI SÓT VÀ XỬ TRÍ

(10)

Mẫu huyết dùng cho xét nghiệm phải không bị vỡ hồng cầu Tránh sử dụng mẫu vỡ hồng cầu mẫu nhiễm mỡ, nhiên, mẫu không gây nhiễu xét nghiệm Tránh lặp lại bước làm đông rã đông mẫu huyết huyết tương làm giảm hoạt tính kháng thể

Ngày đăng: 08/02/2021, 07:25

w