Tiếp tục nghiên cứu chiết xuất phân lập một số hợp chất từ phân đoạn Ethylacetat của lá cây khôi đốm (Sanchezia nobilis Hook.f)

Theo kết quả của các nghiên cứu đã được công bố cho thấy dịch chiết methanol từ lá cây cho thấy hoạt tính gây độc tế bào cao nhất trên MCF-7, trung bình với SK-MEL-5, và thấp nhất [r]

(1)

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI

KHOA Y DƯỢC

NGUYỄN THỊ HOÀI THU

TIẾP TỤC NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ PHÂN ĐOẠN ETHYLACETAT

CỦA LÁ CÂY KHƠI ĐỐM (Sanchezia nobilis Hook.f)

KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC

(2)

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI

KHOA Y DƯỢC

NGUYỄN THỊ HOÀI THU

TIẾP TỤC NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ PHÂN ĐOẠN ETHYLACETAT

CỦA LÁ CÂY KHƠI ĐỐM (Sanchezia nobilis Hook.f)

KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC

KHÓA: QH.2014.Y

NGƯỜI HƯỚNG DẪN: TS VŨ ĐỨC LỢI THS BÙI THỊ XUÂN

(3)

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU

LỜI CẢM ƠN

Em xin chân thành cảm ơn TS Vũ Đức Lợi- Chủ nhiệm Bộ môn Dược liệu- Dược học cổ truyền, Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội ThS

Bùi Thị Xuân, Giảng viên Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, tận

tình truyền đạt kiến thức cho em suốt thời gian thực khóa luận Khoa Những kiến thức tiếp thu tảng cho trình nghiên cứu khóa luận hành trang qúy báu giúp em tự tin bước vào đời

Em xin chân thành cảm ơn đề tài khoa học công nghệ cấp Đại học Quốc gia Hà Nội, mã số: QG.18.20 hỗ trợ kinh phí tạo điều kiện cho em hồn thành khóa luận tốt nghiệp.

Em xin chân thành cảm ơn thầy cô Bộ môn Dược liệu – Dược

cổ truyền Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội tạo điều kiện thuận

lợi, giúp đỡ em q trình học tập hồn thành khóa luận tốt nghiệp Em xin trân trọng cảm ơn Ban Chủ nhiệm Khoa Y Dược cho phép và tạo điều kiện cho em tham gia nghiên cứu học hỏi Khoa

Trong trình em làm khóa luận nghiên cứu Khoa khơng tránh khỏi thiếu sót Em mong nhận góp ý thầy để khóa luận của em hoàn thiện

Cuối em xin kính chúc thầy ln mạnh khỏe, hạnh phúc thành công công việc sống

Em xin chân thành cảm ơn !

Hà Nội, ngày 24 tháng 04 năm 2019 Sinh viên

(4)

DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT, KÍ HIỆU

STT Ký hiệu, chữ viết tắt Tên đầy đủ

1 CC Sắc ký cột

2 CH2Cl2 Dicloromethan

3 CHCl3 Chloroform

4 DEPT

Distortionless Enhancement byPolarization Transfer

5 d Doublet

6 dt doublet of triplets

7 ESI-MS Phổ khối ion hóa phun mù điện tử

8 HMBC Heteronuclear Multiple Bond Correlation HSQC Heteronuclear Single Quantum Correlation

10 MeOH Methanol

11 m/z Khối lượng/ điện tích

12 NMR Phổ cộng hưởng từ hạt nhân

13 pTLC Sắc ký lớp mỏng điều chế

14 q Quarlet

15 s Singlet

16 TLC Sắc ký lớp mỏng

17 t Triplet

(5)

DANH MỤC HÌNH

STT Tên hình Trang

1 Hình 1.1: Đặc điểm quan sinh dưỡng Khơi đốm Hình 1.2: Đặc điểm quan sinh sản Khôi đốm

3 Hình 1.3: Đặc điểm vi phẫu thân

4 Hình 1.4: Đặc điểm vi phẫu

5 Hình 1.5: Đặc điểm vi phẫu bột thân 10

6 Hình 1.6: Đặc điểm vi phẫu bột 11

7 Hình 2.1: Hình ảnh Khơi đốm 21

8 Hình 3.1: Sơ đồ chiết xuất phân đoạn Khơi đốm 28 Hình 3.2: Cấu trúc hóa học hợp chất X6 31 10

(6)

DANH MỤC BẢNG

STT Tên bảng Trang

1 Bảng 1.1: Cấu trúc hóa học hợp chất phân lập

được từ Khôi Đốm 15

2 Bảng 3.1: Dữ liệu phổ DEPT,

1H- 13C-NMR X6

và chất tham khảo 29

3 Bảng 3.2: Dữ liệu phổ DEPT,

1H- 13C-NMR X9

(7)

MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN

DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT, KÍ HIỆU DANH MỤC HÌNH

DANH MỤC BẢNG MỤC LỤC

ĐẶT VẤN ĐỀ 1

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 2

1.1 Thực vật học

1.1.1 Chi Sanchezia

1.1.2 Cây Sanchezia nobilis

1.2 Thành phần hóa học 12

1.2.1 Chi Sanchezia 12

1.2.2 Cây Sanchezia nobilis 13

1.3 Tác dụng sinh học 18

1.3.1 Chi Sanchezia 18

1.3.2 Cây Sanchezia nobilis 19

CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21

2.1 Đối tượng nguyên vật liệu nghiên cứu 21

2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 21

2.1.2 Nguyên vật liệu nghiên cứu 22

2.2 Phương pháp nghiên cứu 23

2.2.1 Phương pháp chiết xuất phân lập hợp chất 23

2.2.2 Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất 24

CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 26

3.1 Kết chiết xuất phân lập hợp chất 26

3.1.1 Hợp chất X6: Rutin 29

3.1.2 Hợp chất X9: Epicatechin 32

3.2 Bàn luận 34

(8)

3.2.2 Về hai hợp chất phân lập 35

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO

(9)

ĐẶT VẤN ĐỀ

Xã hội ngày phát triển, lối sống người theo mà thay đổi Theo bác sĩ Nguyễn Thúy Oanh - Trưởng khoa Nội Tiêu hóa - Nội soi - Bệnh viện Đa khoa Quốc tế Vinmec Central Park, việc sinh hoạt cá nhân không điều độ thức khuya, bỏ bữa ăn sáng việc ăn uống khơng giấc, thói quen ăn khuya, lười vận động, thường xuyên hút thuốc lá, uống rượu bia ảnh hưởng nghiêm trọng đến sức khỏe mà yếu tố thuận lợi dẫn đến bệnh viêm loét dày-tá tràng Ngoài ra, Hội nghị khoa học tiêu hóa gan mật Bệnh viện Bạch Mai phối hợp với Đại học Nagoya (Nhật Bản) tổ chức ngày 16/9/2017, chuyên gia cho biết, khoảng 70% dân số nước ta nhiễm vi khuẩn HP (nguyên nhân gây viêm, loét dày-tá tràng dẫn đến ung thư dày) Có thể thấy viêm loét dày tá tràng vấn đề không nhưngđáng quan tâm[40, 42]

(10)

Hook.f)” Để tiếp nối chuỗi nghiên cứu Sanchezia nobilis Hook.f, khóa luận tiến hành thực đề tài: ”Tiếp tục nghiên cứu chiết xuất phân lập một số hợp chất từ phân đoạn ethylacetat Khôi đốm (Sanchezia

nobilis Hook.f)” với mục tiêu:

1 Chiết xuất, phân lập số hợp chất từ phân đoạn ethylacetat của Khôi Đốm

2 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Thực vật học

1.1.1 Chi Sanchezia

(11)

Theo “Hệ thống phân loại ngành Ngọc lan (Magnoliophyta)” tác giả A.Takhtajan, chi Sanchezia có vị trí phân loại sau[12]:

Giới Thực vật: Plantae

Ngành Ngọc lan: Magnolipphyta

Lớp Cỏ tháp bút: Equisetopsida C Agardh

Phân lớp Mộc lan: Magnoliidae Novák ex Takht Bộ Hoa môi: Lamiales

Họ Ơ rơ: Acanthaceae Chi: Sanchezia

1.1.1.2 Đặc điểm thực vật

Cây bụi hay cỏ xanh nửa mùa Rễ khơng có lông Thân trơn màu xanh tươi sáng với màu tím Lá hình mác, dài, lớn đến 26cm, màu xanh đậm có vân trắng kem vàng Hoa mọc đơn hợp lại thành chùm, hình ống có màu vàng, cam, đỏ, tím mọc ngọn, bắc có màu đỏ dài khoảng 5cm, đài thùy, tràng 5, dính thành hình ống, nhị 4, nhị lép nhị thị ra, bao phấn Qủa nang, 6-8 hạt Hạt hình cầu[17, 5]

1.1.1.3 Phân bố

Chi Sanchezia chủ yếu phân bố phía Tây Nam Mỹ Trung tâm đa dạng loài thuộc chi nằm Peru Ecuador Một số lồi phân bố vùng phía bắc phía đơng Bắc Mỹ, Trung Mỹ vùng biển Caribbean Chi

Sanchezia mô tả lần Ruiz Pavón vào năm 1794 với hai

(12)

đã thống kê lại lịch sử phát triển chi Sanchezia, lập danh lục 55 loài thuộc chi[18]

Ở Việt Nam, chi có lồi, Khơi đốm Sanchezia nobilis Hook.f, Phạm Hồng Hộ mơ tả, liệt kê Danh lục loài thực vật Việt Nam[1]

1.1.1.4 Một số thuộc họ Sanchezia

Năm 2015 Erin A Tripp Daniel M Koenemann cơng bố “Bản tóm tắt danh pháp chi Sanchezia, 50 năm kể từ lần nghiên cứu cuối cùng” Theo đó, chi sanchezia gồm 55 lồi: Sanchezia arborea, Sanchezia lambra,

Sanchezia nobilis, Sanchezia oblonga, Sanchezia ovata, Sanchezia parviflora, Sanchezia peruviana, Sanchezia putumayensis, Sanchezia woytkowskii,…[18]

Cây Sanchezia woytkowskii

Cây thẳng, nhẵn Phiến to hình elip dài đến 25cm rộng 14,5cm Lá ngắn đầu nhọn, mép có khía cưa nhẹ, bề mặt có gai, gân rõ Cuống nhẵn, dài đến 6cm Hoa mọc thành chùm, hợp thành cụm nhỏ, cụm nhỏ lại hợp lại với thành chum, cánh hoa to nhọn, đài hoa to, dài 15 mm, rộng – 2,5 mm có nhiều lơng Tràng hoa đỏ dài – 3,3 cm[17]

Cây Sanchezia arborea

(13)

hoa đơn, kép, chùm, lỏng lẻo, dài 8cm hình trứng, dài rộng mm, đỉnh tròn, rực rỡ, cạnh ciliolate; hình elip dài 4,5 mm; Nhũ hoa nhẵn, hình thn, dài 1-1,5 cm, rộng 2,4 mm, đỉnh, rìa radiifera phút hyaline; tràng hoa rubroviolaceus, dài 3,4cm, gốc rộng mm, rộng tổng cộng 5-7mm, thùy tròn dài mm, rộng mm; nhị hoa nhô 5-8mm, Ataminodia dài mm, đỉnh dậy thì, bao phấn dài 1,5 mm, cấp tính gốc thúc đẩy bụng dậy thì, buồng trứng nhẵn[17]

Cây Sanchezia pedicellata

Cây bụi cao tới m Lá nhẵn, thuôn dài hình elip, dài 24 cm rộng 10 cm, tù nhọn Trên hai mặt lá, gân cứng có 14 gân bên, cuống nhú sẫm màu dài cm, dày, nhẵn Cụm hoa thưa thớt nằm bẹ lá, màu nâu đỏ, hình mác, tù, nhẵn, dài cm rộng mm, bao phấn dài 4mm, xù xì [17]

1.1.2 Cây Sanchezia nobilis

1.1.2.1 Tên gọi khác

Cây Sanchezia nobilis thuộc ngành Ngọc lan (Magnolipphyta) lớp Cỏ tháp bút (Equisetopsida C Agardh) phân lớp Mộc lan (Magnoliidae Novák ex Takht) Hoa mơi (Lamiales) họ Ơ rô (Acanthaceae) chi Sanchezia[12]

Trong dân gian, Sanchezia nobilis thường gọi Xăng sê, khôi đốm hay ngũ sắc,… tùy thuộc vào vùng miền[1]

1.1.2.2 Đặc điểm thực vật

a Cơ quan sinh dưỡng

(14)

chữ thập; cuống dài khoảng 2-3 cm, lõm, màu đỏ tím, hình trụ; phiến hình mũi mác, dài 10-25 cm, rộng 3-7 cm, nhẵn, mép lượn sóng, mặt có màu xanh đậm, mặt xanh nhạt; hệ gân lơng chim, có 9-12 đôi gân bên, gân rõ mặt có màu, gân có gốc màu đỏ tím, gân bên màu trắng vàng [9, 6, 33]

Hình 1.1: Đặc điểm quan sinh dưỡng Khôi đốm

1 Cành mang lá, hoa; Tiết diện thân; Cách mọc lá; Hình thái lá; Cuống lá; Mép lá; Mặt sau lá; Mặt trước lá.[6]

b Cơ quan sinh sản

(15)

nhạt đặc trưng[9, 6] Đài nhiều, hình vảy, dài 1,5-1,8 cm, rộng 3-5 mm, trịn đỉnh[31] Tràng hình ống trịn, màu vàng có sáp, cao 4-5 cm, rộng 7-8 cm phía trên, thu hẹp dần xuống đến mm, nhẵn, thùy dài3-4 mm, trịn, có khía; nhị dài, nhị có nhị phát triển dài 4-4,5 cm, có lơng nhị tiêu giảm [5, 33] Quả nang có nơ hình trụ, có hạt[5] Cây thường hoa, vào khoảng từ tháng đến hàng năm[6]

Hình 1.2: Đặc điểm quan sinh sản Khôi đốm

1 Cụm hoa; Hoa nguyên vẹn; Các phận hoa; Đài; Tràng; 6,7 Bộ nhị; Bầu cắt ngang; Bầu cắt dọc.[6]

1.1.2.3 Đặc điểm vi phẫu

a Thân

(16)

theo mô dày gồm 6-8 hàng tế bào xếp thành hình trịn khép kín; mơ mềm gồm 5-7 lớp tế bào, bên có chứa có tinh thể calcioxalat hình kim hạt tinh bột đơn; libe gần hình trịn khép kín, libe ngồi, gỗ trong, bị gián đoạn số tế bào mô mềm; mô mềm ruột cấu tạo nhiều lớp tế bào, tế bào thành mỏng, to, hình đa giác xếp lộn với nhau[9]

Thân già vi phẫu hình vng, Cấu tạo tương tự thân non, ngồi có thêm lớp bần[9]

Vi phẫu thân thể hình 1.3 [9]:

Hình 1.3: Đặc điểm vi phẫu thân

b Lá

(17)

bởi tế bào thành mỏng, gần trịn bên có chứa tinh thể canxi oxalat hạt tinh bột, rải rác có bó mạch phụ Libe gỗ xếp thành hình vịng cung gồm libe phía ngồi gỗ phía Một số tế bào biểu bì thành lơng che chở, lông tiết.[9]

Vi phẫu phiến lá: Gồm biểu bì biểu bì cấu tạo hàng tế bào đa giác xếp đặn Mơ giậu biểu bì cấu tạo hàng tế bào hình chữ nhật xếp đặn Mô khuyết cấu tạo tế bào hình gần trịn xếp lộn xộn.[9]

Vi phẫu cuống hình chén, có đặc điểm tương tự gân lá, nhiên có thêm lớp mơ dày sát lớp biểu bì.[9]

Vi phẫu thể hình 1.4 [9]:

Hình 1.4: Đặc điểm vi phẫu

1.1.2.4 Đặc điểm bột dược liệu

(18)

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU 10

Bột thân Khôi đốm: Bột có màu xanh vàng màu nâu, vị đắng Soi kính hiển vi thấy có đặc điểm sau: Mảnh mô mềm, mảnh mô mềm mang tinh bột, mảnh mô dày, mảnh mạch xoắn mạch điểm, tinh thể calci oxalat hình kim, sợi, hạt tinh bột đơn, mảnh bần màu nâu, mảnh biểu bì mang lơng che chở [9, 2, 6]

Hình 1.5: Đặc điểm vi phẫu bột thân [6]

Chú thích: 1- Mảnh mơ mềm; 2- Mảnh mơ mềm chứa hạt tinh bột; 3- Mô dày 4- Mạch xoắn; 5,6- Mạch điểm; 7- Tinh thể calci oxalat hình kim;

8- Sợi; 9- Hạt tinh bột; 10- Lông che chở

(19)

Bột có màu xanh lục, vị đắng, soi kính hiển vi thấy có đặc điểm: mảnh biểu bì, mảnh biểu bì mang lỗ khí, mảnh biểu bì mang lơng tiết, lơng che chở, mảnh mô mềm, mảnh mô dày, mảnh mạch xoắn, mảnh mạch điểm, mảnh mô khuyết, mảnh mô giậu, tinh thể calci oxalat hình kim, sợi, lơng che chở, lơng tiết, tinh bột [9, 2, 6]

Hình 1.6: Đặc điểm vi phẫu bột [6]

Chú thích:1- Lỗ khí; 2-Mảnh mơ mềm; 3- Mảnh mơ dày; 4- Mảnh mạch xoắn; 5,6-Mảnh mạch điểm; 7-Tinh thể calci oxalat hình kim;

(20)

Cây Khôi đốm phân bố huyện miền núi cao Tây Giang, tỉnh Quảng Nam, huyện Hòa Vang thành phố Đà Nẵng, số huyện miền núi Chiêm Hóa tỉnh Tuyên Quang Cây trồng Tuyên Quang, Nam Định, Hà Nội, Thừa Thiên Huế Cây có nguồn gốc từ Peru, Ecuador [1, 4]

1.2 Thành phần hóa học

Trên giới, chưa có nghiên cứu tổng quát thành phần hóa học chi Sanchezia Các nghiên cứu thành phần hóa học lồi khác ngồi Sanchezia nobilis vơ ỏi

(21)

propylen glycol pha động 80 phần benzen, 15 phần cyclohexan phần metanol Các thuốc thử màu dung dịch etanolic axit phosphomolybdic Bằng cách sử dụng kết hợp kỹ thuật hồng ngoại sắc ký giấy, sapogenin tách ra, xác định liệt kê thành thành phần phụ Kết cho thấy, dịch chiết thân

Sanchezia pennellii từ Tingo Maria, Peru có chứa flavonoid sterol [30]

Năm 2012, Nghiên cứu rễ vỏ cho thấy diện alkaloid, glycosid, steroid, terpenoid tannin[14]

Năm 2015, Md Abu Shuaib Rafshanjani cộng khác nghiên cứu rằng: dịch chiết Khơi đốm có diện alkaloid, glycoside,flavonoid, triterpenoid,carbohydrat, steroid, hợp chất phenolic, saponin tannin Phân đoạn ethyl acetat chiết xuất từ dương tính tất chất hoá học thử nghiệm phân đoạn n-hexan âm tính flavonoid hợp chất phenolic [34]

Năm 2013, Ahmed E.Abd Ellah thành viên khác phân lập chất có hợp chất matsutake alcohol hợp chất alcohol glycosid[10]

✓ 1-Octen-3-ol (1)

✓ 3-O-β-glucopyranosyl-1-octen-3-ol (2)

✓ 3-O-β-glucopyranosyl-(1-6)-β-glucopyranosyl-1-octen-3-ol (3) ✓ 3-O-β-arabinopyranosyl-(1-6)-β-glucopyranosyl-1-octen-3-ol

(4)

(22)

Năm 2014, từ dịch chiết methanol rễ Khôi đốm, Ahmed E phân lập hợp chất khác nhau: Hai hợp chất benzyl alcohol glycosid: Một hợp chất neolignan glucosid [11]:

✓ 9-O-β -glucopyranosyl trans-cinnamyl alcohol (6)

✓ 9-O-β-xylopyranosyl-(1→6)-O-β-glucopyranosyl-(1→6)-O-β-glucopyranosyltrans-cinnamyl alcohol (7)

✓ Syringin (8)

✓ 4-O-β -glucopyranosyl dehydrodiconiferyl alcohol (9) ✓ 7-O-β -glucopyranosyl benzyl alcohol (10)

✓ 7-O-β-apiofuranosyl-(1→6)-O-β -glucopyranosyl benzyl alcohol (11)

Năm 2014, từ dịch chiết methanol lấy từ hoa Khơi đốm, nhóm nghiên cứu phân lập hợp chất flavonoid [11]:

✓ apigenin-7-O-β–glucopyranoside (12) ✓ apigenin-7-Ogentiobioside (13)

✓ apigenin-7-O- β–glucuronopyranoside (14)

Năm 2016, theo nghiên cứu chiết xuất từ Khôi đốm tiến sĩ Vũ Đức Lợi cộng khác cô lập hợp chất [23]:

✓ Quercetin 3-O-α-L-rhamnopyranosid (quercitrin) (15) ✓ Quercetin 3-O-β-D-galactopyranosid (hyperosid) (16) ✓ Sitosterol-3-O-β-D-glucopyranosid (daucosterol) (17) ✓ 3-Metyl-1H-benz [f] indolo-4,9-dion (18)

Năm 2018, khóa luận tốt nghiệp dược sĩ Đại học Vũ Thị Mây xác định cấu trúc hợp chất [7]:

(23)

Như vậy, giới nghiên cứu phân lập 21 hợp chất từ dịch chiết khác phận Khôi Đốm

Bảng 1.1: Cấu trúc hóa học hợp chất phân lập từ Khôi Đốm

Hợp chất Cấu trúc hóa học

1: R= -H 2: R= -Glc

3: R= -Glc-(6→1)-Glc 4: R= -Glc-(6→1)-Ara 5: R=

-Glc-(6→1)-Glc-(6→1)-Ara

OR

6: R= -Glc

7: R=

-Glc-(6→1)-Glc-(6→1)-Xyl

OR

8

HO

O O

OGlc

9

GlcO

OCH3

O H H HO

OCH3

(24)

10: R= -Glc

11: R= -Glc-(6→1)-Api

OR

12: R= -Glc

13: R= -Glc-(1→6)-Glc 14: R= -Glr

(25)

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU 17 17 OH O O HO HO OH H H H

18 N

H O

O

19 N

(26)

1.3 Tác dụng sinh học

Cũng nghiên cứu thành phần hóa học, ngồi Sanchezia

nobilis nghiên cứu tác dụng sinh học loài khác thuộc chi Sanchezia

Năm 2012, tác giả Jin Hye-Young cộng thực nghiên cứu “Kiểm soát sinh học chống lại rệp sử dụng kẻ thù tự nhiên Trung tâm nghiên cứu tài nguyên thực vật nhiệt đới Vườn ươm quốc gia Hàn Quốc “ Kết cho thấy, trường hợp Sanchezia parvibracteata, mật độ trung bình 626 giảm dần lần khảo sát đầu tiên, mật độ giảm dần Nói chung, rệp động vật ký sinh, Collemani jadebell, có hiệu việc triệt tiêu mật độ chiếu xạ tỷ lệ thích hợp, với tỷ lệ 6: (rệp: Collemani jadebell) có hiệu lập tức, với tỉ lệ 10: 25: phải khoảng 15-20 ngày để ngăn chặn[35] Khái niệm kiểm sốt sinh học trì mật độ dịch hại tối thiểu mà kẻ thù tự nhiên duy trì ngưỡng chấp nhận được, trường hợp Sanchezia

parvibracteata, mơ hình mật độ kẻ thù tự nhiên kiểm soát

(27)

1.3.2.1 Tác dụng chống oxi hóa chống viêm loét dày

CâyKhôi đốm chứng minh có chất chống oxy hóa chất chống tăng sinh tế bào invitro Ngoài ra, loài cịn có cơng dụng diệt khuẩn HP, thủ phạm gây bệnh viêm loét dày hàng loạt bệnh đường tiêu hóa Chính nhờ tính chất mà Khơi đốm giúp chữa viêm đại tràng, viêm loét dày tá tràng hiệu

Một số kết thử nghiệm nhà khoa học cho thấy Khôi đốm giúp chống oxy hóa tốt dịch chiết từ có khả chống oxy hóa tương tự quercetin

Trong y học cổ truyền Khôi đốm dược liệu quý từ thiên nhiên giúp điều trị nhiều bệnh Một tác dụng lớn Khơi đốm chữa đau dày, loại thảo dược coi vị cứu tinh cho mắc viêm loét dày mãn tính Ngồi ra, Thái Lan rễ Khôi đốm dùng để điều trị chứng bất lực tăng cường ham muốn tình dục[41]

1.3.2.2 Tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm

Bên cạnh tác dụng kháng khuẩn kháng nấm dịch chiết Khôi Đốm quan tâm nghiên cứu Cụ thể, năm 2014, nghiên cứu Rafshanjani M cộng cho thấy phân đoạn chloroform có tác dụng kháng khuẩn mạnh chủng vi khuẩn Escherichia coli,

Salmonella paratyphi, Bacillus megaterium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa Shigella shiga số chủng nấm Candida albicans, Rizopus oryzae, Aspergillus niger, Trycophyton rubrum; phân đoạn ethyl acetate có

(28)

1.3.2.3 Tác dụng diệt côn trùng

Thí nghiệm diệt trùng Tribolium Castaleum (Herbst) cho thấy tỷ lệ tử vong côn trùng 60%, 40%, 20% tương ứng với phân đoạn chloroform, ethyl acetate ether liều lượng 50 mg/ml 48h [8]

1.3.2.4 Tác dụng chống ung thư

(29)

CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nguyên vật liệu nghiên cứu

2.1.1 Đối tượng nghiên cứu

Lá Khôi đốm thu hái vào tháng 15/01/2018 Thị trấn Cổ Lễ, huyện Trực Ninh, tỉnh Nam Định, phơi sấy, bảo quản túi nilon kín Mẫu ThS.Nguyễn Quỳnh Nga, Viện Dược liệu giám định tên khoa học là: Sanchezia nobilis Hook.f họ Acanthaceae (họ Ơ rơ) Mẫu lưu tại: Phòng tiêu bản, Khoa Tài Nguyên Cây Thuốc, Viện Dược liệu (số hiệu tiêu bản: DL-150118)

(30)

2.1.2 Nguyên vật liệu nghiên cứu

2.1.2.1 Hóa chất dung mơi

Chiết xuất phân lập sử dụng dung môi: (EtOH 80%, n-hexan (Hx), ethyl acetat (EtOAc), methanol (MeOH), dichloromethan (DCM), aceton (Ac) Tất dung môi đạt tiêu chuẩn độ tinh khiết

Pha tĩnh dùng sắc ký cột silica gel pha thường cỡ hạt 0,063-0,200 mm (Merck), (0,040 - 0,063 mm, Merck) Bản mỏng tráng sẵn DC-Alufolien 60 F254 (Merck) (silica gel, 0,25 mm) mỏng pha đảo RP-18

F254 (Merck, 0,25 mm) 2.1.2.2 Trang thiết bị

Sắc ký cột: sắc ký loại cột thủy tinh có kích cỡ khác

Phổ cộng hưởng từ hạt nhân: NMR ghi máy Bruker Avance 500MHz Viện Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Phổ khối ESI-MS: đo máy AGILENT 1260 Series LC-MS ion Trap (Agilent Technologies, Hoa Kỳ), Khoa Y Dược, ĐHQGHN

Góc quay cực riêng: đo máy PLR-4, MRC scientific instruments, Khoa Y Dược, ĐHQGHN

Nhiệt độ nóng chảy: đo máy SMP10 BioCote, Khoa Y Dược, ĐHQGHN

Các dụng cụ thí nghiệm thường quy: ống nghiệm, bình nón, bình gạn, cốc có mỏ, pipet…

(31)

2.2 Phương pháp nghiên cứu

2.2.1 Phương pháp chiết xuất phân lập hợp chất

Mẫu Khôi đốm sau thu hái rửa sạch, phơi khô, thái nhỏ, bảo quản túi nilon kín Mẫu dược liệu ngâm chiết dung mơi ethanol 80% (3 lần, lần 8L), nhiệt độ phòng ngày Lọc dịch chiết ethanol thu qua giấy lọc, gộp dịch lọc cất loại dung môi áp suất giảm, thu cao chiết tổng ethanol

Phân tán cao chiết ethanol nước cất chiết phân bố n- hexan ethyl acetat (3 lần) Thu phân đoạn n- hexan, ethyl acetat nước Các phân đoạn cất loại dung môi áp suất giảm để thu phân đoạn tương ứng

Sử dụng phương pháp sắc ký cột để phân lập hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat Các phân đoạn trình phân lập theo dõi sắc ký lớp mỏng sắc ký lớp mỏng điều chế

Sắc ký cột (CC): tiến hành với chất hấp phụ silicagel pha thường pha đảo, lựa chọn hệ dung mơi có độ phân cực tăng dần Silicagel pha thường cỡ hạt 0,063-0,200 mm (Merck) cỡ hạt 0,040-0,063 mm (Merck) với loại cột sắc ký có kích cỡ khác

Sắc ký lớp mỏng (TLC): thực mỏng nhôm tráng sẵn silicagel 60 F254 (Merck), độ dày 0,2 mm RP-18F254s, độ dày 0,25 mm

(Merck) Sau triển khai sắc ký, mỏng kiểm tra đèn tử ngoại bước sóng 254 nm 365 nm, sau phun thuốc thử dung dịch H2SO4 10% ethanol đốt nóng bếp điện từ

Sắc ký lớp mỏng điều chế (pTLC): thực mỏng nhôm tráng sẵn silicagel 60G F254, độ dày 1,0 mm (Merck) Sau triển khai sắc

(32)

nm cắt rìa mỏng để phun thuốc thử dung dịch H2SO4 10% ethanol, đốt nóng bếp điện từ, ghép lại mỏng cũ để xác định vùng chất dung mơi thích hợp

2.2.2 Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất

Xác định cấu trúc hợp chất phân lập phương pháp đo nhiệt độ nóng chảy, phổ khối (MS), phổ cộng hưởng từ hạt nhân (1H-NMR,

13C-NMR, DEPT) so sánh liệu thu từ thực nghiệm với

liệu công bố

2.2.2.1 Phổ khối lượng (MS)

Phổ khối lượng cung cấp thông tin khối lượng ion sinh từ phân tử Phổ khối lượng không xác định trực tiếp khối lượng ion mà xác định tỷ lệ khối lượng (m) điện tích (z) ion (m/z) Khi để xác định khối lượng phân tử (M) cần phải biết số điện tích ion

Trong điều kiện ion hóa, phân mảnh tạo thành ion từ ion mẹ tuân theo định luật định Các chất có cấu trúc tương tự tạo phân mảnh giống Từ khối lượng phân mảnh phân tử, phương pháp phổ khác người ta xác định cấu trúc chất chưa biết So sánh phổ khối chất chưa biết với phổ khối chất biết giúp định danh chất chưa biết dễ dàng xác[3]

2.2.2.2 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR)

Khi đặt chất có hạt nhân có số spin (I) lẻ (1H, 13C ) đặt

một từ trường (B0), spin hạt nhân xếp lại theo hai hướng:

(33)

lượng (cộng hưởng) chuyển lên mức lượng cao (sắp xếp ngược chiều với từ trường) Khi ngưng chiếu xạ, spin hạt nhân giải phóng lượng để trở trạng thái cân Xác định lượng mà hạt nhân loại nguyên tố phân tử hấp thu (hay giải phóng) thu phổ cộng hưởng từ hạt nhân chất Có cách xác định lượng cộng hưởng Cách thứ xác định tần số cộng hưởng theo tần số suốt dải tần số cộng hưởng, cách gọi cộng hưởng từ hạt nhân quét Cách thứ hai ghi nhận đồng thời tần số cộng hưởng sử dụng biến đổi Fourier để tách riêng tần số cộng hưởng hạt nhân Kỹ thuật gọi cộng hưởng từ hạt nhân biến đổi Fourier (Fourier transform - NMR, FT - NMR) kỹ thuật sử dụng chủ yếu

Như trình bày trên, tần số cộng hưởng hạt nhân phụ thuộc vào từ trường máy Từ trường cao, dải tần số dùng để kích thích hạt nhân rộng, phép đo nhạy xác, độ phân giải ngày cao Do vậy, ta thường gọi phổ kế cộng hưởng từ hạt nhân 200 MHz, 300 MHz hay 500 MHz theo tần số dùng để kích thích proton[3]

Tùy vào mục đích mức độ phức tạp cấu trúc, ta đo hay nhiều loại phổ khác Xác định phổ loại hạt nhân ( 1H hay

13C) phổ chiều (1H-NMR, 13C-NMR, DEPT) hay mối

tương quan loại hạt nhân phổ hai chiều (COSY)

(34)

Phổ cộng hưởng từ hạt nhân carbon-13 (13C-NMR) cung cấp thơng tin mơi trường hóa học carbon Carbon lai hóa sp3 khơng liên kết với

dị tố chuyển dịch khoảng 0-60 ppm Carbon liên kết đơn với oxy (alcol, ether) chuyển dịch khoảng 45-85 ppm Carbon lai hóa sp2 chuyển dịch khoảng 100-150 ppm, có liên kết (đơi) với oxy dịch chuyển tới 240 ppm Với kỹ thuật đo phổ tại, phổ NMR carbon vạch đơn, vạch ứng với carbon (hơn carbon có chung mơi trường hóa học) phân tử

Các kỹ thuật xác định số lượng proton carbon cho biết số lượng proton liên kết carbon, gián tiếp cho biết số C H phân tử Kỹ thuật thường sử dụng DEPT (Detortionless Enhancement by Polarization Transfer)

Các kỹ thuật phổ hai chiều cho thông tin tương tác C H gắn trực tiếp nó, proton carbon kế cận (phổ COSY) hay phổ tương tác dị nhân (HETCOR) proton carbon kế cận (thường sử dụng kỹ thuật HSQC) hay xa (long-range HETCOR, thường dùng HMBC) proton gần không gian (NOESY, ROESY)[3]

CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 Kết chiết xuất phân lập hợp chất

(35)

liệu 2-3cm (8L/lần) tiếp tục chiết thêm hai lần, thu dịch chiết lần hai lần ba

Gộp dịch chiết lần, lọc dịch chiết ethanol thu qua giấy lọc đem cất thu hồi ethanol áp suất giảm thu khoảng 150 g cao chiết tổng ethanol

Hòa tan 100g cao đặc nước nóng, tỷ lệ thể tích cao đặc: nước cất nóng (1 :1) thu dịch chiết nước Dịch chiết nước đem lắc với dung môi: n-hexan, ethyl acetat; dung môi chiết lặp lại lần, lần 500ml dung môi 30 phút, thu phân đoạn dịch chiết tương ứng Các phân đoạn dịch chiết đem cất thu hồi dung môi áp suất giảm cô cách thủy nhiệt độ 600C đến cắn thu cắn tương

(36)

Hình 3.1: Sơ đồ chiết xuất phân đoạn Khôi đốm

Dược liệu

Cắn n-hexan (9,2 g)

Lắc với ethyl acetat

Cao tổng ethanol (150 g)

Dịch chiết ethanol

Cắn

ethylacetat(28,8 g)

Chiết ethanol (8,0 lít x lần)

Thu hồi dung môi

Phân tán nước cất Lắc với n-hexan

Dịch chiết nước Thu hồi n-hexan

Thu hồi ethyl acetat Dịch chiết nước

Cô cạn

(37)

Tiến hành phân tích cắn EtOAc (25,0 g) cột sắc ký silicagel với hệ dung mơi có độ phân cực tăng dần bao gồm n-hexan- EtOAc (5:1→1:1, v/v, phân đoạn 600 mL) tiếp sau CHCl3- MeOH (10:1→ 1:1, v/v,

phân đoạn 500mL) thu phân đoạn ký hiệu E1~E6

Từ phân đoạn E2 (7,2g), chạy sắc ký cột silicagel (Φ45 mm × 350 mm) với hệ pha động EtOAc - MeOH (5:1, v/v, 2,5L) thu phân đoạn nhỏ E2.1~ E2.6

Từ phân đoạn E2.2 (1,2g) tiến hành sắc ký cột silicagel pha thường với hệ dung môi etylacetat:methanol (2/1,v/v) thu hợp chất X6(18mg) Từ phân đoạn E2.5 (1.6g) tiến hành sắc ký cột silicagel với hệ dung môi CH2Cl2:MeOH (1/1,v/v) thu hợp chất X9 (24mg) Sau X6 X9

đo nhiệt độ nóng chảy, góc quay cực riêng, phổ UV-VIS, phổ khối lượng(MS), phổ cộng hưởng từ hạt nhân(NMR) so sánh với hợp chất tham khảo Từ xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập

3.1.1 Hợp chất X6: Rutin Chất bột màu vàng

Nhiệt độ nóng chảy tnc = 214 ÷ 216°C

Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT chất X6 chất tham khảo

được trình bày bảng 3.1

Bảng 3.1: Dữ liệu phổ DEPT, 1H- 13C-NMR X6 chất tham khảo [25]

Vị trí C DEPT δCX6

ppm

δCGa,b

ppm

δHX6 (ppm)

(mult, J=Hz)

δHGa,c (ppm)

(mult, J=Hz)

2 C 156,6 156,30

3 C 133,3 133,40

4 C 177,5 177,40

5 C-OH 161,2 161,20 12,58 (s) 12,70 ( s)

(38)

7 C-OH 164,4 164,10

8 CH 93,8 93,50 6,39 (d; 2,2) 6,20 (d; 1,98)

9 C 156,8 156,30

10 C 104,1 104,00

1' C 121,4 121,20

2' CH 115,5 115,20 7,54 (d; 1,8) 7,30 (dd; 2,26;

10,00)

3' C-OH 144,9 144,80

4' C-OH 148,6 148,40

5' CH 116,5 115,20 6,87 (d; 8,0) 6,80 (d; 8,59) 6' CH 121,7 121,50 7,54 (dd; 8,0;1,8) 7,30 (dd; 2,26;

10,00)

1'' CH 101,4 100,58 5,31 (d; 7,8) 5,32 (d; 7,60) 2'' CH 74,4 73,92 3,25 ÷ 3,48 (m) 3,39 ÷ 3,04 (m) 3'' CH 76,6 75,74 3,25 ÷ 3,48 (m) 3,39 ÷ 3,04 (m) 4'' CH 70,2 70,44 3,25 ÷3,48 (m) 3,39 ÷ 3,04 (m) 5'' CH 76,1 76,32 3,25 ÷3,48 ( m) 3,39 ÷ 3,04 (m)

6'' CH2 67,2 66,84 3,83 (m) 3,70 (br; d; 9,17)

1''' CH 100,7 101,02 4,49 ( d; 1,8) 4,43 (d; 1,26)

2''' CH 70,6 70,21 3,63 (dd;1,5;

3,5)

3,39 ÷ 3,04 (m)

3''' CH 70,8 69,86 3,53 (dd; 3,5;

9,5)

3,39 ÷ 3,04 (m)

4''' CH 71,8 71,74 3,28 (m) 3,39 ÷ 3,04 (m)

5''' CH 68,4 68,14 3,45 (m) 3,39 ÷ 3,04 (m)

6''' CH3 17,9 17,61 1,03 (d; 6,0) 0,98 (d; 6,2)

a ) đo DMSO-d

(39)

Phổ 1H-NMR cho tín hiệu singlet δH 12,58 ppm nhóm OH

C-5 liên hợp với nhóm carbonyl Có năm tín hiệu proton thơm, hai proton ghép cặp kiểu ortho H-5' δH 6,87 (1H, d, J=8,0Hz) với H-6' δH 7,54

(1H, dd, J=8,0; 2,0Hz), hai proton ghép cặp kiểu meta H-6 δH 6,19

(1H, d, J=2,0Hz) với H-8 δH 6,39 (1H, d, J=2,0 Hz), tín hiệu proton

thơm singlet H-2' δH 7,56 (1H, s) Tín hiệu proton anomeric gốc

rhamnose δH 4,49 (1H, d, J=1,8Hz), tín hiệu proton anomeric gốc

glucose δH 5,31 (1H, d, J=7,8Hz) Các proton lại nằm vùng δH

3,83 đến δH 3,25ppm Tín hiệu nhóm methyl gốc rhamnose δH 1,03

(3H, d, J=6,0Hz) Phổ 1H-NMR hợp chất cho thấy tín hiệu vịng nhân thơm vị trí 7,54 (2H, m, 2',6'), 6,87 (1H, d, J=8,0Hz; H-5') proton anomeric 5,31 (1H, d, J=7,8Hz; glcH-1'') 4,49 (1H, d,

J=1,8Hz; rhamH-1''') Tuy nhiên, phổ 1H-NMR hợp chất X6 cho thấy tín hiệu proton nhóm methyl 1,03 (3H, d, J=6,0Hz; rham-CH3) Phổ 13

C-NMR DEPT hợp chất X6 cho thấy tín hiệu 27 cacbon, bao gồm 15 cacbon khung flavonoid 12 cacbon tín hiệu carbon thuộc gốc đường glucose, tín hiệu carbon thuộc gốc đường rhamnose, gốc đường rutin (β-D-glucose: δ101,4; 74,4; 76,6; 70,2; 76,1; 67,2 α-L-rhamnose:δ 100,7; 70,6; 70,8; 71,8; 68,4; 17,9) Kết hợp so sánh liệu phổ của hợp chất X6 tài liệu ta khẳng định hợp chất X6 rutin (quercetin-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(1-6)-β-D-glucopyranoside)

(40)

3.1.2 Hợp chất X9: Epicatechin Dạng kết tinh màu vàng

Nhiệt độ nóng chảy tnc = 217-219oC

Phổ ESI-MS m/z 291,1[M+H]+

Công thức phân tử: C15H14O6 (M=290)

Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT chất X9 chất tham khảo

trình bày bảng 3.2

Bảng 3.2: Dữ liệu phổ DEPT, 1H- 13C-NMR X9 hợp chất tham khảo [36]

Vị trí C DEPT δCX9

ppm

δCKa,b

ppm

δHX9 (ppm)

(Mult, J=Hz)

δHKa,c (ppm) (Mult, J=Hz)

2 CH 79,7 79,9 4,84 (d; 7,5) 4,83(br,s)

3 CH 67,3 67,5 4,21 ( m) 4,19(m)

4 CH2 29,1 29,3 2,87(dd;12,0;2,5) 2,74(dd;12,0;4,5)

2,73(dd; 16,8;2,7) 2,86(dd; 16,8;4,8)

5 C 157,8 157,4

6 CH 96,5 96,4 5,94 (d; 1,5) 5,93(d; 2,3)

7 C 157,6 157,9

8 CH 95,8 95,9

9 C 157,4 157,7

10 C 100,0 100,1

1' C 132,1 132,3

2' CH 115,2 115,3 6,98 (d;1,5) 6,99(d; 1,7)

3' C 145,6 145,9

4' C 145,8 145,8

5' CH 115,8 115,9 6,76 (d; 8,5) 6,77(d; 8,2) 6' CH 119,5 119,4 6,80 (dd; 8,0; 1,5) 6,81(dd; 8,2;1,7)

a ) đo CDCl

(41)

Phổ khối lượng ESI-MS xuất pic ion phân tử m/z 291,1[M+H]+ cho phép xác định công thức phân tử C15H14O6 (M=290)

Phổ 3C-NMR X9 xuất tín hiệu 15 carbon hợp

chất flavonoid Tuy nhiên khơng có tín hiệu nhóm carbonyl vùng trường thấp, đồng thời lại xuất tín hiệu CH2 δC 29,1 hai tín hiệu carbon nối

với nguyên tử oxy δC79,7 δC 67,3

Dữ liệu phổ nêu cho thấy hợp chất flavan có nhóm hydroxy C-3 khơng có nhóm C=O C-4 Điều làm sáng tỏ tương tác spin-spin proton H-2/H-3 H-3/H-4 phổ H-NMR Trên phổ 1H-NMR proton H-2 xuất doublet (ppm) 4,84

(J=7,5Hz), proton H-3 xuất multiplet δ4,21 hai proton H-4 xuất dạng hai tín hiệu doublet doublet δ2,74 (dd, J=16,0;

2,0Hz) 2,87 (dd, J=16,0; 4,5Hz) chứng tỏ nhóm OH C-3 có cấu hình

α-OH Ba tín hiệu δH (ppm) 6,98 (d, J=1,5Hz); 6,76 (d, J=8,5Hz) 6,80

(dd, J=8,0; 1,5Hz) chứng tỏ vòng B bị vị trí 1',3',4' Ngồi ra, tín hiệu doublet δH (ppm) 5,94 (2H, d, J=1,5Hz) chứng tỏ hai proton

nằm vị trí meta với phù hợp với H-6 H-8 vòng A

Những liệu phổ với phân tích so sánh giá trị số tương tác J với giá trị tương ứng epicatechin cho thấy hợp chất X9 3,3',4',5,7-pentahydroxyflavan (epicatechin) với công thức phân tử C15H14O6

(42)

Hình 3.3: Cấu trúc hóa học hợp chất X9

3.2 Bàn luận

3.2.1 Về phương pháp chiết xuất phân lập

Phương pháp chiết xuất EtOH phân lập chất sắc ký cột tham khảo từ nghiên cứu trước Đề tài chiết xuất cao tồn phần từ Khôi đốm phương pháp ngâm nhiệt độ phịng với dung mơi cồn 80% Phương pháp có ưu điểm đơn giản, dễ thực hiện, thiết bị đơn giản, chi phí thấp thu khối lượng cắn toàn phần đạt 6% so với lượng dược liệu ban đầu Cắn tồn phần sau chiết lỏng – lỏng với dung mơi có độ phân cực tăng dần n-hexan, ethyl acetat chạy qua cột sắc ký Diaion, thu cắn phân đoạn với khối lượng đạt 0,368% (phân đoạn n-hexan); 1,152% (phân đoạn ethyl acetat); 1,064% (phân đoạn nước) so với nguyên liệu khô ban đầu

(43)

3.2.2 Về hai hợp chất phân lập

3.2.2.1 Hợp chất X6

Hợp chất X6 xác định Rutin (quercetin-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(1-6)-β-D-glucopyranoside) Chất phân lập từ Salvia leucantha, Fagopyrum esculentum, Carpobrotus edulis,…[16, 25,

32] Rutin tìm thấy nhiều loại thực phẩm thơng thường như:

olive đen, mận, cà chua bi, nho khô, mơ, trà xanh, táo,…[39]

Trong nghiên cứu “Tinh chế xác định thành phần kháng khuẩn hoạt động Carpobrotus edulis L.” Elmarie van der Watt Johan C Pretorius, ban đầu chiết xuất methanolic thô thử nghiệm cho kết có tác dụng chống vi khuẩn mạnh Sau đó, dịch chiết thô phân đoạn phương pháp sắc ký lỏng-lỏng, tannin loại bỏ phương pháp sắc ký cột LH20 phân đoạn có hoạt tính sinh học với đặc tính kháng khuẩn phân lập phương pháp sắc ký lớp mỏng Năm hợp chất có hoạt tính sinh học, có hoạt tính đơn lẻ kết hợp đặc tính kháng khuẩn C edulis, tinh chế từ phân đoạn ethyl acetate hoạt động Các hợp chất ban đầu xác định flavanoids phương pháp standard fingerprinting cuối xác định rutin, neohesperidin, hyperoside, cactichin axit ferulic [16]

Rutin có hoạt tính chữa lành vết thương đáng kể loại thuốc tìm thấy có hoạt tính kháng khuẩn cho vi khuẩn gram dương gram âm[16, 25]

(44)

gram dương Staphylococcus aureus, Bacillus subtillis, Sarcina lutea vi khuẩn gram âm Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Candida

albicans so sánh với số kháng sinh thương mại Kết cho thấy:

vùng ức chế tối đa, quercetin glycosides chống lại tất vi sinh vật thử nghiệm quercetin glycosides ức chế Staphylococcus aureus Escherichia

coli tốt so với loại vi sinh vật lại[25] 3.2.2.2 Hợp chất X9

Trước phân lập từ Sanchezia nobilis, hợp chất X9 (Epicatechin) phân lập từ nhiều nguồn khác như: cây Amaranthus cruentus L (Amaranthaceae), trà hoa vàng Camellia

chrysantha, Azadirachta indica, Bulnesia sarmienti, loquat Eriobotrya japonica, ca cao, [13, 15, 19, 36, 37] Cùng với đó, epicatechin

nghiên cứu phát nhiều tác dụng dược lý khác như: chống oxi hóa, kháng khuẩn, giúp cải thiện chức mạch máu, chống ung thư, giúp làm giảm hội chứng tắc nghẽn xoang gan,…[13, 15, 20, 22, 24, 38]

(45)

Năm 2011, nghiên cứu “Chế độ ăn uống Epicatechin thúc đẩy sống sót chuột bị tiểu đường béo phì Drosophila melanogaster” Hongwei Si cộng nhiều tác dụng Epicatechin:

- Bổ sung epicatechin vào chế độ ăn uống thúc đẩy sống sót chuột mắc bệnh tiểu đường

- Epicatechin cải thiện thay đổi bệnh lý động mạch chủ gan - Epicatechin cải thiện dấu ấn sinh học liên quan đến tuổi chuột mắc

bệnh tiểu đường

- Epicatechin cải thiện chức xương chuột mắc bệnh tiểu đường

- Epicatechin cải thiện hoạt động AMPKα gan xương chuột mắc bệnh tiểu đường

(46)

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận

Sau trình nghiên cứu thực nghiệm, đề tài khóa luận thu số kết sau :

+ Chiết xuất, phân lập: Đã sử dụng phương pháp chiết ngâm với dung môi EtOH 80% phương pháp sắc ký cột để chiết xuất phân lập hợp chất từ Khôi đốm

+ Xác định cấu trúc hợp chất phân lập được: Thông qua kết đo nhiệt độ nóng chảy, góc quay cực riêng, phổ tử ngoại- khả kiến, phổ khối, phổ cộng hưởng hạt nhân, xác định cấu trúc hợp chất là: Rutin (quercetin-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(1-6)-β-D-glucopyranoside(X6), epicatechin(X9) Đây lần hợp chất phân lập từ dịch chiết phân đoạn ethylacetat Khôi đốm

Kiến nghị

+ Tiếp tục triển khai phân lập hợp chất khác từ loài Sanchezia

nobilis Hook.f

(47)

TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt

1 Nguyễn Tiến Bân (2005), Danh mục loài thực vật Việt Nam, Tập III, Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội

2 Bộ Môn Dược Liệu Đại Học Dược Hà Nội (2009), Thực tập dược liệu Bộ Y Tế (2011), Dược liệu học I, Nhà xuất Y học

4 Phan Văn Chiêu (2011), Đông nam dược nghiệm phương, Nhà xuất Thuận Hóa

5 Phạm Hồng Hộ (2000), Cây cỏ Việt Nam, Quyển 3, Nhà xuất Trẻ Nguyễn Thị Mai (2017), Nghiên cứu đặc điểm thực vật thành phần

hóa học Xăng sê, Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ Đại học, Khoa Y

Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội

7 Vũ Thị Mây (2018), Nghiên cứu thành phần hóa học phân đoạn dịch

chiết ethylacetat Khôi đốm (Sanchezia nobilis Hook.f), Khóa

luận tốt nghiệp dược sĩ Đại học, Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội

Tiếng Anh

8 Abu Shuaib Rafshanjani, Shumaia Parvin, Abdul Kader, Monika Rani Saha, and Most.Afia Akhtar (2014), "In vitro antibacterial, antifungal and insecticidal activities of ethanolic extract and its fractionates of Sanchezia speciosa Hook f", International Research Journal of

Pharmacy, 5(9), 717-720

9 Ahmed E Abd-Ellah, Khaled M Mohamed, Enaam Y Backheet, and Mahmoud H Mohamed (2006), "Macro-and micromorphology of

(48)

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU 10 Ahmed E Abd Ellah, Khaled M Mohamed, Enaam Y Backheet, and

Mahmoud H Mohamed (2013), "Matsutake alcohol glycosides from

Sanchezia nobilis", Chemistry of Natural Compounds, 48(6), 930-933

11 Ahmed E Abd Ellah, Khaled M Mohamed, Enaam Y Backheet, and Mahmoud H Mohamed (2014), "Cinnamyl Alcohol, Benzyl Alcohol, and Flavonoid Glycosides from Sanchezia nobilis", Chemistry of

Natural Compounds, 50(5), 715-717

12 Armen Leonovich Takhtadzhi͡An (1997), Diversity and classification

of flowering plants, Columbia University Press, New York, USA

13 Young-Il Jeong Bae, Chang-Ho Shim, Ki-Hwan, (2005), "Antioxidative and Antimicrobial Activity of Epicatechin Isolated from Leaves of Loquat (Eriobotrya japonica)", Preventive Nutrition and

Food Science, 10(2), 118-121

14 Cristiane Pereira, Cleber Bomfim Barreto Júnior, Ricardo Machado Kuster, Naomi Kato Simas, Cassia Mônica Sakuragui, Andrea Porzel, and Ludger Wessjohann (2012), "Flavonoids and a neolignan glucoside from Guarea macrophylla (Meliaceae)", Química Nova, 35(6), 1123-1126

15 Daeik Kim, Mohammad Lalmoddin Mollah, and Kilsoo Kim (2012), "Induction of Apoptosis of SW480 Human Colon Cancer Cells by (−)-Epicatechin Isolated from Bulnesia sarmienti", Anticancer Research, 32 (12 ), 5353-5361

16 Elmarie Van Der Watt and Johan C Pretorius (2001), "Purification and identification of active antibacterial components in Carpobrotusedulis L.", Journal of Ethnopharmacology, 76 (1), 87-91

(49)

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU 18 Erin A Tripp and Daniel M Koenemann (2015), "Nomenclatural

Synopsis of Sanchezia (Acanthaceae), Fifty Years Since Last Treated",

Novon: A Journal for Botanical Nomenclature, 24(2), 213-221

19 Francisco Cen-Pacheco, Araceli Ortiz-Celiseo, Alvaro Peniche-Cardeña, Omar Bravo-Ruiz, Fernando C López-Fentanes, Gerardo Valerio-Alfaro, and José J.Fernández (2019), "Studies on the bioactive flavonoids isolated from Azadirachta indica", Natural Product

Research, Published online

20 Hongwei Si, Zhuo Fu, Pon Velayutham Anandh Babu, Wei Zhen, Tanya Leroith, Mary Pat Meaney, Kevin A Voelker, Zhenquan Jia, Robert W Grange, and Dongmin Liu (2011), "Dietary Epicatechin Promotes Survival of Obese Diabetic Mice and Drosophila melanogaster ", The Journal of Nutrition, 141(6), 1095–1100

21 Jin Hye-Young, Ahn Tai-Hyeon, Song Jeong Hwa, Lee Junseok, and Choi Ha Yong (2012), "Biological Control Against Aphids Using Natural Enemies in Tropical Plants Resources Research Center of Korea National Arboretum", Journal of the Korea Society of

Environmental Restoration Technology, 15(1), 27-33

22 Junji Terao, Mariusz Piskula, and Qing Yao (1994), "Protective Effect of Epicatechin, Epicatechin Gallate, and Quercetin on Lipid Peroxidation in Phospholipid Bilayers", Archives of Biochemistry and

Biophysics, 308(1), 278-284

23 Loi Vu Duc, Tung Bui Thanh, Ha Vu Hoang, and Tuyen Nguyen Manh (2016), "Phytochemical and anti-inflammatory effect from the leaf of

Sanchezia speciosa Leonard growing in Vietnam", Journal of Chemical and Pharmaceutical Research, 8(7), 309-315

(50)

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU effects of (−)-epicatechin on vascular function in healthy male volunteers: A randomized controlled trial", Clinical Nutrition, Published online

25 Manivannan Rajamanickam, Prabakaran Kalaivanan, and Ilayaraja Sivagnanam (2013), "Antibacterial and Wound Healing Activities of Quercetin-3-O-Α-L-Rhamnopyranosyl-(1→6)-β-D-Glucopyranoside Isolated from Salvia leucantha", International Journal of Pharmaceutical Sciences Review and Research, 22(1), 264-268

26 Ming Xin Ren, Xiao Hui, Deng Fang Ai, Guo Yan Yuan, and Hai Yan Song (2015), "Effect of quercetin on the proliferation of the human ovarian cancer cell line SKOV-3 in vitro", Experimental and

therapeutic medicine, 10(2), 579-583

27 Mohammadjavad Paydar, Yi Li Wong, Bushra Abdulkarim Moharam, Won Fen Wong, and Chung Yeng Looi (2013), "In vitro anti-oxidant and anti-cancer activity of methanolic extract from Sanchezia speciosa leaves", Pakistan Journal of Biological Sciences, 16(20), 1212-1215 28 Monroe E Wall, C S Penske, H E:Kenney, J J Willaman, D S

Correll, B G Schubert, and H S Gentry (1954), "Steroidal sapogenins: XII Survey of plants for steroidal sapogenins and other constituents", Joournal of the American Pharmaceutical Association, 43(8), 503-505

29 Monroe E Wall, C S Penske, H E:Kenney, J J Willaman, D S Correll, B G Schubert, and H S Gentry (1954), "Steroidal sapogenins: VII Survey of plants for steroidal sapogenins and other constituents", Joournal of the American Pharmaceutical Association, 43(1), 1-7

(51)

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU XLIII Survey of plants for steroidal sapogenins and other constituents", Joournal of the American Pharmaceutical Association, 46(11), 653-684

31 Sciences W A O And Sciences W A O (1922), Journal of the

Washington Academy of Sciences

32 Samo Kreft, Mark Knapp, and Ivan Kreft (1999), "Extraction of rutin from buckwheat (Fagopyrum esculentumMoench) seeds and determination by capillary electrophoresis", Journal of Agricultural

and Food Chemistry, 47(11), 46-52

33 And Sciences W A O Sciences W A O (1926), Journal of the

Washington Academy of Sciences

34 Shumaia Parvin, Abu Shuaib Rafshanjani, Abdul Kader, and Tahmida Sharmin (2015), "Preliminary phytochemical screening and cytotoxic potentials from leaves of Sanchezia speciosa Hook f", International

Journal of Advances in Scientific Research, 1(3), 145-150

35 Steenis M Van and Joop Van Lenteren (1995), Evaluation and

application of parasitoids for biological control of Aphis gossypii in glasshouse cucumber crops, Agricultural University

36 Touré Abdoulaye, Kablan Ahmont Landry Claude, Kabran Aka Faustin, Adiko N’dri Marcelline, Kablan Richmond Jean-Franỗois, Akoubet Ouayogodộ Aminata, Konan Dibi Jacques, Gnaoré Dohouré Toussaint, Attioua Koffi Barthélémy, and Coulibaly Adama (2018), "Isolation of (+)-catechin and (-)-epicatechin from the leaves of Amaranthus cruentus L (Amaranthaceae)", International Journal of

Chemical Studies, 6(2), 3697-3700

(52)

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU "Flavonoids isolated from the flowers of Camellia Chrysantha",

Vietnam journal of science and technology, 57(3)

38 Zhenlin Huanga, Xiaoqi Jingab, Yuchen Shengb, Jiaqi Zhanga, Zhanxia Haoa, Zhengtao Wanga, and Lili Jia (2019), "(-)-Epicatechin attenuates hepatic sinusoidal obstruction syndrome by inhibiting liver oxidative and inflammatory injury", Redox Biology, 22

Website

39 Foods in which the polyphenol Quercetin 3-O-rutinoside is found,

accessed, from http://phenol-explorer.eu/contents/polyphenol/296 40 Nguyễn Thúy Oanh (2019), Tìm hiểu bệnh viêm loét dày tá tràng,

accessed, from

https://www.vinmec.com/en/tin-tuc/thong-tin-suc-khoe/tim-hieu-ve-benh-viem-loet-da-day-ta-trang/

41 Sanchezia, accessed, from http://www.stuartxchange.org/Sanchezia 42 Web Site Bộ Y Tế (2017), Khoảng 70 phần trăm người Việt Nam nhiễm

loại vi khuẩn gây ung thư dày, accessed, from

http://moh.gov.vn/web/urlTitle=khoang-70-nguoi-viet-nam-nhiem-loai-vi-khuan-co-the-gay-ung-thu-da-day

43 Xăng xê chữa đau dạ dày, accessed, from

(53)

(54)

Định dạng
Số trang	54
Dung lượng	1,83 MB