Nghiên cứu xác định đột biến kháng artemisinin trên gen k13 của plasmodium falciparum tại vùng sốt rét lưu hành nặng tỉnh bình phƣớc, năm 2014 2015​

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT NGUYỄN THỊ TRÀ NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH ĐỘT BIẾN KHÁNG ARTEMISININ TRÊN GEN K13 CỦA Plasmodium falciparum TẠI VÙNG SỐT RÉT LƢU HÀNH NẶNG TỈNH BÌNH PHƢỚC, NĂM 2014 – 2015 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC HÀ NỘI – 2015 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT NGUYỄN THỊ TRÀ NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH ĐỘT BIẾN KHÁNG ARTEMISININ TRÊN GEN K13 CỦA Plasmodium falciparum TẠI VÙNG SỐT RÉT LƢU HÀNH NẶNG TỈNH BÌNH PHƢỚC, NĂM 2014 – 2015 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Chuyên ngành: Độc vật học Mã số: 60 42 01 03 Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS Trƣơng Văn Hạnh HÀ NỘI – 2015 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu thân Các số liệu, kết luận văn trung thực chƣa đƣợc cơng bố cơng trình tài liệu Tác giả Nguyễn Thị Trà Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN i http://www.lrc.tnu.edu.vn LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới TS Trƣơng Văn Hạnh, Thầy tận tình hƣớng dẫn, giúp đỡ tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Tôi xin trân trọng cảm ơn Lãnh đạo Viện Sốt rét-KST-CTTƢ tạo điều kiện thuận lợi, ủng hộ thời gian, vật chất tinh thần q trình thực Luận văn Tơi xin trân trọng cảm ơn Thầy, Cô, cán Phòng Đào tạo Sau đại học, Ban lãnh đạo Viện Sinh thái Tài nguyên Sinh vật, Trƣờng Đại học Thái Ngun tận tình giúp đỡ tơi q trình học tập Trƣờng Tơi xin chân thành cảm ơn tập thể cán nghiên cứu Khoa Sinh học phân tử cán Khoa/Phòng Viện Sốt rét-KST-CTTƢ, giúp đỡ, ủng hộ động viên trình học tập thực đề tài Với lịng biết ơn sâu nặng, cảm ơn gia đình bạn bè bên Nguyễn Thị Trà Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ii http://www.lrc.tnu.edu.vn MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình sốt rét giới Việt Nam 1.2 Tình hình ký sinh trùng sốt rét giới Việt Nam 1.2.1 Tình hình kháng thuốc sốt rét P falciparum giới 1.2.2 Tình hình kháng thuốc sốt rét P falciparum Việt Nam 1.3 Đặc điểm gen K13 P artemisinin 1.3.1 Cơ sở khoa học chọn gen K13 thị phân tử kháng artemisinin 1.3.2 Cấu trúc gen K13 P falciparum 1.4 Các nghiên cứu đa hình đột biến gen K13 Nam 1.5 Các phƣơng pháp nghiên cứu ký sinh trùng sốt rét kh 1.5.1 Phƣơng pháp in vivo 1.5.2 Phƣơng pháp in vitro 1.5.3 Phƣơng pháp phân tử 1.6 Kỹ thuật giải trình tự gen theo phƣơng pháp Sanger CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tƣợng, địa điểm, thời gian nghiên cứu 2.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu 2.1.2 Địa điểm nghiên cứu 2.1.3 Thời gian nghiên cứu 2.2 Thiết bị, dụng cụ, hóa chất Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN iii http://www.lrc.tnu.edu.vn 2.2.1 Thiết bị 2.2.2 Dụng cụ 2.2.3 Hóa chất 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 2.3.1 Thiết kế nghiên cứu 2.3.2 Phƣơng pháp chọn mẫu cỡ mẫu 2.4 Các kỹ thuật sử dụng nghiên cứu 2.4.1 Thu thập mẫu 2.4.2 Tách chiết ADN sinh phẩm DNA micro test hãng Qiagen 2.4.3 Kỹ thuật PCR xác định loài ký sinh trùng sốt rét ngƣời 2.4.4 Kỹ thuật PCR xác định kiểu gen P falciparum 2.4.5 Kỹ thuật giải trình tự ADN phát đột biến gen K13 2.5 Xử lý số liệu nghiên cứu CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Kết xác định đột biến gen K13 P falciparum phân lập từ bệnh nhân sốt rét Bình Phƣớc 3.1.1 Kết xác định loài ký sinh trùng sốt rét kỹ thuật PCR lồng 3.1.2 Kết xác định kiểu gen P falciparum kỹ thuật PCR lồng 3.1.3 Kết phân tích đột biến gen K13 kỹ thuật giải trình tự ADN 3.2 Đánh giá mối tƣơng quan đột biến gen K13 với kết theo dõi ký sinh trùng sốt rét bệnh nhân ngày D3 CHƢƠNG BÀN LUẬN KẾT LUẬN KIẾN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN iv http://www.lrc.tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt ACTs ADN Bp DHA-PPQ dNTPs EDTA KST KSTSR L Msp2 NCBI SR WHO Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN v http://www.lrc.tnu.edu.vn DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 1.1 Mƣời tỉnh có tỷ lệ ký sinh trùng sốt rét lƣu hành cao năm 2014 .4 Bảng 1.2 Thời gian KSTSR P falciparum kháng với loại thuốc sốt rét Bảng 1.3 Danh sách vị trí đột biến gen K13 xác định kháng liên quan kháng artemisinin theo WHO 2015 20 Bảng 3.1 Kết xác định tỷ lệ nhiễm đơn nhiễm phối hợp kiểu gen mẫu nhiễm P falciparum ngày D0 D3 theo locus gen msp2 36 Bảng 3.2 So sánh tỷ lệ đột biến gen K13 nhóm mẫu bệnh nhân ngày D0 ngày D3 44 Bảng 3.3 Tần suất vị trí đột biến gen K13 nhóm mẫu có đột biến .46 Bảng 3.4 Kết xác định đột biến gen K13 nhóm ký sinh trùng sốt rét ngày D3 D0 48 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN vi http://www.lrc.tnu.edu.vn DANH MỤC HÌNH Trang Hình 1.1 Bản đồ quốc gia vùng lãnh thổ có lan truyền sốt rét Hình 1.2 Cấu trúc protein K13 P falciparum 12 Hình 1.3 Mơ hình cấu trúc 3D protein K13 P falciparum 13 Hình 1.4 Đọc trình tự nucleotit theo phƣơng pháp Sanger 24 Hình 3.1 Ảnh điện di sản phẩm PCR mẫu nhiễm đơn P falciparum 35 Hình 3.2 Ảnh điện di sản phẩm PCR số mẫu nhiễm kiểu gen FC 36 Hình 3.3 Ảnh điện di sản phẩm PCR số mẫu nhiễm kiểu gen IC 37 Hình 3.4 Ảnh điện di sản phảm PCR nhân bội gen K13 38 Hình 3.5 Giản đồ giải trình tự nucleotit đoạn gen K13 P falciparum nhiễm mẫu bệnh nhân ngày D3 39 Hình 3.6 Kết so sánh trình tự nucleotit gen K13 mẫu 3D7 phịng thí nghiệm với trình tự đơn dịng 3D7 công bố ngân hàng gen 40 Hình 3.7 So sánh trình tự nucleotit đoạn gen K13 mẫu P falciparum ngày D0 phát hiệnđiểm đột biến 42 Hình 3.8 So sánh trình tự nucleotit đoạn gen K13của mẫu P falciparum ngày D3 phát đột biến điểm 43 Hình 3.9 Kết so sánh trình tự axit amin để xác định đột biến gen K13 P falciparum mẫu ngày D0 45 Hình 3.10 Kết so sánh trình tự axit amin để xác định đột biến gen K13 P falciparum mẫu ngày D3 46 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn vii Phát ký sinh trùng kháng artemisinin kỹ thuật sinh học phân tử, giải trình tự gen bƣớc đầu đƣợc ứng dụng nhiều quốc gia năm trở lại đây, chƣa có nhiều cơng bố đột biến gen K13 Việt Nam Do vậy, kết nghiên cứu cung cấp số liệu đột biến gen K13 P falciparum Bình Phƣớc Đây số liệu đột biến gen K13 đƣợc thực giải trình tự Việt Nam Kết nghiên cứu cho thấy đột biến gen K13 sử dụng đƣợc nhƣ thị phân tử để giám sát ký sinh trùng sốt rét kháng thuốc Việt Nam bên cạnh kỹ thuật truyền thống khác Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN 53 http://www.lrc.tnu.edu.vn KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Ký sinh trùng sốt rétP falciparrumphân lập ngày D0 D3 từ bệnh nhân nhiễm đơn P falciparum chƣa biến chứngtại tỉnh Bình Phƣớc năm 2014 có tỷ lệ đột biến gen K13 58,46%, phát đƣợc điểm đột biến với tần suất C580Y 81,58%, P553L 10,53%, I543T 5,26% Y493H 2,63% Trong có 03 đột biến đƣợc khẳng định tính kháng với artemisinin Y493H, I543T C580Y Đột biến gen K13 kháng artemisinin có mối tƣơng quan thuận với tỷ lệbệnh nhân ký sinh trùng ngày D3, với tỷ lệ nguy cao 3,64 lần so với bệnh nhân nhiễm ký sinh trùng khơng có đột biến KIẾN NGHỊ Cần mở rộng nghiên cứu đánh giá đột biến gen K13 P falciparum nhiềuđịa phƣơng có sốt rét lƣu hànhđể có đƣợc sở liệu đa hình đột biến kháng thuốc artemisinin Việt Nam Sử dụng đột biến gen K13 kháng artemisinin giám sát phát triển lan rộng ký sinh trùng sốt rét kháng thuốc ATCs Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN 54 http://www.lrc.tnu.edu.vn TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Bộ Y tế (2015), Báo cáo tổng kết cơng tác phịng chống Sốt rét, Ký sinh trùng, Côn trùng năm 2014 triển khai kế hoạch năm 2015, trang Bộ Y tế (2013) Hướng dẫn chẩn đốn điều trị sốt rét Lê Đình Cơng (1997), “Đánh giá sơ kết phịng chống sốt rét Việt Nam giai đoạn 1992-1995”, Kỷ yếu cơng trình nghiên cứu khoa học 1991-1996, Viện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng Trung ƣơng, NXB Y học, tr 7-28 Lê Đình Cơng (2000), “Những kinh nghiệm phòng chống sốt rét kháng thuốc Việt Nam 1991-2000”, Kỷ yếu cơng trình nghiên cứu khoa học 1996-2000, Viện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng Trung ƣơng, NXB Y học, tr 273-277 Hồ Huỳnh Thùy Dƣơng (2002), Sinh học phân tử, NXB giáo dục, tr 200-206 Nguyễn Văn Kim (1993), “Dịch tễ học sốt rét kháng thuốc Việt Nam”, Thông tin Phòng chống sốt rét bệnh ký sinh trùng,Viện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng Trung ƣơng (3), tr 19-21 Đoàn Hạnh Nhân, Nguyễn Duy Sỹ, Bùi Đại (2000), “Ký sinh trùng sốt rét kháng thuốc”, Bệnh sốt rét, Bệnh học-Lâm sàng Điều trị, NXB Y học, tr 45-84 Bùi Quang Phúc (2015), “Khánh Hịa- tỉnh thứ năm có nghi ngờ sốt rét kháng thuốc Việt Nam, năm 2014”, Tạp chí Phịng chống bệnh sốt rét bệnh ký sinh trùng, Viện Sốt rét- Ký sinh trùng - Côn trùng Trung ƣơng (1), tr 3-8 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN 55 http://www.lrc.tnu.edu.vn Nguyễn Duy Sỹ (1997), “Giám sát nhạy cảm P falciparum với artemisinin dẫn chất artesunat”, Thơng tinPhịng chống bệnh sốt rét bệnh ký sinh trùng, Viện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng Trung ƣơng (1), tr 9-13 10 Tạ Thị Tĩnh, Nguyễn Mạnh Hùng (2010), “Hiệu lực điều trị Artesunate số vùng sốt rét Việt Nam năm 20082009”,Tạp chí Phịng chống bệnh sốt rét bệnh ký sinh trùng, Viện Sốt rét Ký sinh trùng - Côn trùng Trung ƣơng (3), tr 11-18 11 Tạ Thị Tĩnh, Nguyễn Văn Hƣờng, Bùi Quang Phúc, Ngô Việt Thành, Huỳnh Hồng Quang, Dƣơng Công Thịnh, Nguyễn Mạnh Hùng (2011) Hiệu lực điều trị số thuốc sốt rét P falciparum từ 2005 đến 2010 Cơng trình nghiên cứu khoa học báo cáo Hội nghị ký sinh trùng lần thứ 38, Viện Sốt rét-Ký sinh trùng-Côn trùng Trung Ƣơng, NXB Y học, tr 95-103 12 Triệu Nguyên Trung, Lê Khánh Thuận, Nguyễn Ngọc San (2000), “Diễn biến KSTSR kháng thuốc hiệu lực phác đồ điều trị khu vực Miền Trung-Tây ngun (1996-2000)”, Kỷ yếu cơng trình nghiên cứu khoa học 1996-2000, Viện Sốt rét - Ký sinh trùng Côn trùng Trung ƣơng, NXB Y học, tr 256-263 13 Phạm Hùng Vân (2009), PCR realtime PCR vấn đề áp dụng thường gặp, NXB Y học, tr 81-111 14 Viện Sốt rét - Ký sinh trùng- Côn trùng Trung ƣơng (2011), Cẩm nang kỹ thuật phòng chống bệnh sốt rét, NXB Y học, 319 trang Tiếng Anh 15 Abu Naser Mohon, Mohammad Shafiul Alam, Abebe Genetu Bayih, Asongna Folefoc, Dea Shahinas, Rashidul Haque and Dylan R Pillai (2014),“Mutations in Plasmodium falciparum K13 propeller gene from Bangladesh (2009–2013)”,Malaria Journal, pp.13-431 16 Amed Ouattara, Aminatou Kone, Matthew Adams, Bakary Fofana, Amelia Walling Maiga, Shay Hampton, Drissa Coulibaly, Mahamadou A Thera, Nouhoum Diallo, Antoine Dara, Issaka Sagara, Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 56 Jose Pedro Gil, Anders Bjorkman, Shannon Takala-Harrison, Ogobara K Doumbo, Christopher V Plowe, and Abdoulaye A Djimde (2015),“Polymorphisms in the K13-Propeller Gene in ArtemisininSusceptible Plasmodium falciparum Parasites from Bougoula-Hameau and Bandiagara, Mali”, Am J Trop Med Hyg.,92(6), pp.1202–1206 17 Amy Barrete., Pascal Ringwald., Rick Fairhurst et al (2010), “Containment of Artemisinin – resistant malaria parasites, Global report on antimalarial Drug efficacy and Drug resistance 2000-2010”, WHO library Cartloguing-Publication Data, pp 65-68 18 Ashley E , and et al (2014), “Spread of Artemisinin Resistance in Plasmodium falciparumMalaria,” N Engl J Med., 371 (5), pp 411-423 19 Ariey F., Witkowski B., Amaratunga C., Beghain J., Langlois A.C., Khim N., Kim S., Duru V., Bouchier C., Ma L., Lim L., Leang R., Duong R., Sreng S., Suon S., Chuor C.M., Bout D.M., Mesnard S., Rogers W.O., Genton B., Fandeur T., Miotto O., Ringwald P., Le Bras J., Berry A., Barale J.C., Fairhurst R., Benoit-Vical F., MercereauPuijalon O., Mesnard D (2014), “A molecular marker of artemisinin – resistant Plasmodium falciparum malaria”,Nature, 505 (7481), pp 5055 20 David C., Warhurst D.S, Path F.R.C (2001), “A molecular marker for chloroquine resistant P falciparum malaria” New Eng J Med., 4,pp 299- 301 21 Duraisingh M.T, Roper C, et al (2000), “Increased sensitivity to the antimalarials mefloquine and artemisinin is conferred by mutations in the P.fmdr1 gene of P falciparum”, Mol Microbiol.,36, pp.955-961 22 Eckstein-Ludwig U, Webb RJ, Van, et al (2003), “Artemisinins target the SERCA of P falciparum”, Nature,424, pp.957 – 961 23 Fang Huang, Shannon Takala-Harrison, Christopher G Jacob, Hui Liu, Xiaodong Sun, Henglin Yang, Myaing M Nyunt, Matthew Adams, Shuisen Zhou1, Zhigui Xia, Pascal Ringwald, Maria Dorina Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN 57 http://www.lrc.tnu.edu.vn Bustos, Linhua Tang, and Christopher V Plowe (2015),“A singlemutation in K13 predominatesin Southern China and is associated with delayed clearance of Plasmodium falciparum following artemisinin treatment”,Jounal of infectious Diseases Advance Access published 24 Farooq U and Mahajan R.C (2004), “Drug resistance in malaria”, J Vect Borne Dis 41, pp 45-53 25 Foote SJ, Kyle DE, Martin RK, Oduola AM, Forsyth K, Kemp DJ, Cowman AF (1990),“Several alleles of the multidrugresistance gene are closely linked to chloroquine resistance in Plasmodium falciparum”, Nature,345(6272), pp 255–258 26 Kamala Thriemer,Nguyen Van Hong,Anna RosanasUrgell,Bui Quang Phuc,Do Manh Ha,Evi Pockele,Pieter Guetens,Nguyen Van Van,Tran Thanh Duong,Alfred Amambua-Ngwa,Umberto D‟Alessandro,Annette Erhart (2014) “Delayed Parasite Clearance after Treatment with Dihydroartemisinin- Piperaquine in Plasmodium falciparumMalaria Patients in Central Vietnam”,N Engl J Med 359, pp 2629-2620 27 Kyaw M Tun, Mallika Imwong, Khin M Lwin, Aye A Win, Tin M Hlaing, Thaung Hlaing, Khin Lin, Myat P Kyaw, Katherine Plewes, M Abul Faiz, Mehul Dhorda, Phaik Yeong Cheah, Sasithon Pukrittayakamee, Elizabeth A Ashley, Tim J C Anderson, Shalini Nair, Marina McDew-White, Jennifer A Flegg, Eric P M Grist, Philippe Guerin, Richard J Maude, Frank Smithuis, Arjen M Dondorp, Nicholas P J Day, Franỗois Nosten, Nicholas J White, Charles J Woodrow, (2015), “Spread of artemisinin -resistant Plasmodium falciparumin Mi-an-ma: a cross-sectional survey of the K13 molecular marker”,Lancet Infect Dis 15(4), pp 415–421 28 Mallica Imwong, Arjen M Dondorp, Francois Nosten, et al (2010), “Exploring the Contribution of Candidate Genes to Artemisinin Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 58 Resistance in P falciparum”, Antimicrobial Agents and Chemotherapy, pp.2886 – 2892 29 Melissa D Conrad, Victor Bigira, James Kapisi, Mary Muhindo, Moses R Kamya, Diane V Havlir, Grant Dorsey, Philip J Rosenthal (2014), “Polymorphisms in K13 and Falcipain-2 Associated with Artemisinin Resistance Are Not Prevalent in Plasmodium falciparum Isolated from Ugandan Children”, Plos One 12(3): 210217 30 Nagesha HS, Din-Syafruddin, Casey GJ, Susanti AI, Fryauff DJ, Reeder JC, Cowman AF, “Mutations in the pfmdr1, dhfr and dhps genes of Plasmodium falciparum are associated with in-vivo drug resistance in West Papua, Indonesia”, Trans R Soc Trop Med Hyg.,95, pp.43 - 49 31 Noedle et al (2008),“Evidence of artemisinin–resistant malaria in western Cambodia”N Engl J Med., 359, pp 2629-2620 32 Rie Isozumi, Haruki Uemura, Isao Kimata, Yoshio Ichinose, John Logedi, Ahmeddin H Omar, Akira Kaneko (2015), “Novel Mutations in K13 Propeller Gene of Artemisinin-Resistant Plasmodium falciparum”,Emerg Infect Dis 21(3), pp 490–492 33 Petersen I., Eastman R., Lanzer M (2011), “Drug-resistant malaria: Molecular mechanisms and implications for public health”, FEBS Letters, 585, pp 1551-1562 34 Pharath Lim, Dalin Dek, Vorleak Try, Richard T Eastman, Sophy Chy, Sokunthea Sopha, Baramey Sam, Elizabeth A Ashley, Olivo Miotto, Arjen M Dondorp, Nicholas Char, Jennifer Menard, and Rick of Plasmodium falciparum to Northern, and Eastern Cambodia, 2011-2012: Association with Molecular Markers”, Antimicrob Agents Chemothe 57(11), pp 52775283 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 59 35 Philippe Bosman, Jorgen Stassijns, Fabienne Nackers, Lydie Canier, Nimol Kim, Saorin Khim, Sweet C Alipon, Meng Chuor Char, Nguon Chea, Lek Dysoley, Rafael Van den Bergh, William Etienne, Martin De Smet, Didier Mesnard and Jean-Marie Kindermans (2014), “Plasmodium prevalence and artemisinin –resistant falciparum malaria in Preah Vihear Province, Cambodia: a cross-sectional population-based study”,Malaria Journal, pp.13-394 36 Powell R.D., Brewer G.J., Alving A (1963), “Chloroquine resistance of Plasmodium falciparum from Vietnam”, WHO-Mal 402, pp 379-392 37 Rieckmamn K.H., Cambell G H., Sax L.J., et al (1978), “Drug sensitivity of Plasmodium falciparum: An in vitro microtechnique”, Lancet 1, pp 211-216 38 Sanger F., Nicklen S., and Coulson A R., (1977), “DNA sequencing with chain-terminating inhibitors”, Proc Natl Acad Sci., 74(12), pp 5463-5467 39 Snounou G., Viryakosol S., Jarra W., Thai Thong S., and Brown K.N (1993b), “Identification of the four human malaria species in field samples by the polymerase chain reaction of the high prevalence of mixed infection”, Mol Biochem Parasitol., 58, pp 283-292 40 Snounou G., Beck H.P (1998), “The use of PCR genotyping in theassessment of recrudescence or reinfection after antimalarialtreatment”, Parasitology Today, 14, pp 462-467 41 Snounou G., Zhu X., Siripoon N., Jarra W., Thai Thong S., Brown N.K., and Viriyakosol S (1999), “Biased distribution of MSP1 and MSP2 allelic variants in Plasmodium falciparum population in Thailand”, Trans R Soc Trop Med Hyg.,93, pp 369-374 42 Takala-Harrion S, Clark TG, Jacob CG, et al (2013), “Genetic loci associated with delay clearance of Plasmodium falciparum following artemisinin treatment in Southeast Asia”, Proc Natl Acad Sci USA 110, pp 240-245 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 60 43 Taylor S.M., Parobek C.M., DeConti D.K., Kayentao K., Coulibaly S.O., Greenwood B.M., Tagbor H., Williams J., Bojang K., Njie F., Desai M., Kariuki S,Gutman J., Mathanga D.P., Mårtensson A., Ngasala B., Conrad M.D., Rosenthal P.J., Tshefu A.K., Moormann A.M., Vulule J.M., Doumbo O.K., Ter Kuile F.O., Meshnick S.R., Bailey J.A., Juliano J.J (2015), “Absence of putative artemisinin resistance mutations among Plasmodium falciparum in Sub-Saharan Africa: a molecular epidemiologic study”.J Infect Dis., 211(5), pp 680-688 44 Torrentino-Madamet M, Fall B, Benoit N, Camara C, Amalvict R, Fall M, Dionne P, Fall KB, Nakoulima A, Diatta B, Diemé Y, Ménard D, Wade B and Pradines B (2014), “Limited polymorphisms in k13 gene in Plasmodium falciparum isolates from Dakar, Senegal in 20122013”, Malaria Journal 13 45 Wang Z., Shrestha S., Li X., Miao J., Yuan L., Cabrera M., Grube C., Yang Z and Cui L., (2015),“Prevalence of K13-propeller polymorphisms in Plasmodium falciparum from China-Myanmar border in 2007–2012”, Malaria Journal., 14, pp 168 46 White N Qinghaosu (artemisinin ) (2008), “The price of success”,Science 320, pp 330-4 47 WHO (2009), “Methods for surveillance of antimalarial drug efficacy”,Geneva, World Health Organization 48 WHO (2001), “Guidelines for the treatment of malaria”, Geneva, World Health Organization 49 WHO (2010), “Global report on antimalarial drug efficacy and drug resistance: 2000-2010”, Geneva, World Health Organization 50 WHO (2011), “Update on artemisinin resistance – September 2011”, WHO Global Malaria Programe 51 WHO (2015), “Update on artemisinin resistance”, WHO Global Malaria Programe 52 WHO (2014), World Malaria Report Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN 61 http://www.lrc.tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 62 ... NGUYÊN SINH VẬT NGUYỄN THỊ TRÀ NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH ĐỘT BIẾN KHÁNG ARTEMISININ TRÊN GEN K13 CỦA Plasmodium falciparum TẠI VÙNG SỐT RÉT LƢU HÀNH NẶNG TỈNH BÌNH PHƢỚC, NĂM 2014 – 2015 LUẬN VĂN THẠC SĨ... tiễn.Chúng tiến hành? ?ề tài: ? ?Nghiên cứu xác định đột biến kháng artemisinin gen K13 Plasmodium falciparum vùng sốt rét lƣu hành nặng tỉnh Bình Phƣớc, năm 2014 - 2015” với mục tiêu sau: Xác địnhvị trí,... vitro phân tích đột biến gen. Năm 2013, gen PF3D7_1343700 (gọi gen K13) P falciparum đƣợc xác định gen đích có đột biến điểm liên quan đến xác định kháng artemisinin vùng sốt rét kháng thuốc Cam-puchia