Khảo sát ảnh hưởng của nguồn carbon lên sự sinh trưởng, phát triển của lan vũ nữ oncidium kozumit delight in vitro​

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HCM KHOA CNSH – TP – MT ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA NGUỒN CARBON LÊN SỰ SINH TRƯỞNG, PHÁT TRIỂN CỦA LAN VŨ NỮ ONCIDIUM KOZUMIT DELIGHT IN VITRO Ngành : Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Công nghệ sinh học GVHD : Th.S Trịnh Thị Lan Anh SVTH : Phan Hồng Nhung Lớp 15HSH01 : TP HCM, 08/2016 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan nội dung đồ án tốt nghiệp cơng trình nghiên cứu thực tơi hướng dẫn ThS Trịnh Thị Lan Anh – giảng viên Trường Đại Học Công Nghệ Thành Phố Hồ Chí Minh Đề tài thực sở nghiên cứu lý thuyết tiến hành nghiên cứu thực nghiệm phịng thí nghiệm Cơng Nghệ Sinh Học Thực Vật, khoa Công Nghệ Sinh Học – Thực Phẩm – Môi Trường, thuộc Trường Đại Học Công Nghệ Thành Phố Hồ Chí Minh Các số liệu bảng hồn tồn trung thực Đồ án khơng chép hình thức nào, phát có gian lận tơi xin chịu hồn tồn trách nhiệm TP.HCM, ngày tháng năm 2016 Sinh viên thực Phan Hồng Nhung i LỜI CẢM ƠN Với lòng biết ơn sâu sắc nhất, em xin gửi đến Quý Thầy Cô Khoa Công Nghệ Sinh Học – Thực Phẩm – Môi Trường trường Đại học Công nghệ Thành Phố Hồ Chí Minh với tri thức tâm huyết truyền đạt vốn kiến thức quý báu cho em suốt thời gian học tập trường Với vốn kiến thức tiếp thu q trình học khơng tảng cho q trình nghiên cứu đồ án mà cịn hành trang quí báu để em bước vào đời cách vững tự tin Đặc biệt cho phép em bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến ThS Trịnh Thị Lan Anh – người tận tình hướng dẫn, truyền đạt nhiều kinh nghiệm quý báu cung cấp tư liệu quý giá cho em thực tốt đồ án tốt nghiệp Cảm ơn cô tiếp thêm cho em niềm tin nghị lực để định hướng cho tương lai Qua đồ án này, em xin chân thành cảm ơn ban giám hiệu trường Đại học Cơng nghệ Thành Phố Hồ Chí Minh tạo điều kiện cho em tiếp cận học hỏi nhiều kinh nghiệm trình làm đồ án giúp em nắm vững kiến thức học Bên cạnh đó, em xin cảm ơn thầy Huỳnh Văn Thành thầy Nguyễn Trung Dũng cán phịng thí nghiệm giúp đỡ em suốt thời gian làm đồ án Cảm ơn bạn phịng thí nghiệm ni cấy mơ thực vật giúp đỡ, hỗ trợ suốt q trình làm đồ án Cuối em kính chúc Quý Thầy, Cô dồi sức khỏe thành cơng nghiệp trồng người TP.Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2016 Sinh viên thực đồ án Phan Hồng Nhung ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN……………………………………………………………… i LỜI CÁM ƠN……………………………………………………………………ii MỤC LỤC……………………………………………………………………….iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT……………………………………………… vi DANH MỤC BẢNG……………………………………………………………vii DANH MỤC HÌNH………………………………………………………… ix DANH MỤC BIỂU ĐỒ……………………………………………………… xi MỞ ĐẦU…………………………………………………………………………1 Đặt vấn đề…………………………………………………………………… Mục đích nghiên cứu………………………………………………………….3 Đối tượng phạm vi nghiên cứu……………………………………… … Phương pháp nghiên cứu…………………………………………………… Kết đạt được…………………………………………………………… Kết cấu đề tài…………………………………………………………… CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU……………………………………… 1.1 Khái niệm nhân giống in vitro……………………………………………… 1.2 Nguồn carbon…………………………………………………………… .5 1.3 Giới thiệu vài nguồn carbon…………………………………………….6 1.3.1 Glucose…………………………………………………………………….6 1.3.2 Fructose……………………………………………………………………8 1.3.3 Lactose……………………………………………………………………9 1.3.4 Manitol………………………………………………………………… 11 1.3.5 Sorbitol………………………………………………………………… 12 1.4 Vai trò nguồn carbon cho tăng trưởng phát triển nuôi cấy in vitro………………………………………………………… 14 iii 1.4.1 Giới thiệu vai trò nguồn carbon ni cấy in vitro………………13 1.4.2 Vai trị nguồn carbon cho tăng trưởng phát triển nuôi cấy in vitro…………………………………………………… 16 1.5 Ảnh hưởng nguồn carbon ni cấy in vitro………………………18 1.6 Tình hình sản xuất, giá trị kinh tế hoa lan giới Việt Nam………20 1.6.1 Tình hình sản xuất lan giới……………………………………….20 6.2 Tình hình sản xuất lan Việt Nam………………………………………21 1.6.3 Tình hình sản xuất lan Vũ nữ…………………………………………… 23 1.7 Giới thiệu lan Vũ nữ…………………………………………………… 23 1.7.1 Phân loại khoa học……………………………………………………… 23 1.7.2 Nguồn gốc phân bố…………………………………………………24 1.7.3 Đặc điểm hình thái sinh học………………………………………………25 1.7.4 Điều kiện sinh thái lan Vũ nữ……………………………………… 27 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP…………………………… 30 2.1 Địa điểm tiến hành đề tài……………………………………………………30 2.2 Vật liệu nghiên cứu…………………………………………………………30 2.2.1 Vật liệu……………………………………………………………………30 2.2.2 Môi trường nuôi cấy………………………………………………………30 2.2.3 Điều kiện thí nghiệm…………………………………………………… 30 2.3 Phương pháp……………………………………………………………… 31 2.3.1 Cách pha môi trường…………………………………………………… 31 2.3.2 Hấp khử trùng…………………………………………………………… 31 2.4 Bố trí thí nghiệm…………………………………………………………….32 2.4.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng glucose lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight)….32 2.4.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng fructose lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight… 33 2.4.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng lactose lên khả sinh trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight)….33 iv 2.4.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng manitol lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight)…34 2.4.5 Thí nghiệm 5: Khảo sát ảnh hưởng sorbitol lên khả sinh trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight)….35 2.5 Chỉ tiêu theo dõi…………………………………………………………….36 2.6 Thống kê xử lý số liệu………………………………………………… 36 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN………………………………….37 3.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng glucose lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight)………….37 3.2 Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng fructose lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight)………….44 3.3 Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng lactose lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight)………… 51 3.4 Thí nghiệm 4: Ảnh hưởng manitol lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight)………….58 3.5 Thí nghiệm 5: Ảnh hưởng sorbitol lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight)………….64 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ………………………………….73 4.1 Kết luận…………………………………………………………………… 73 4.2 Kiến nghị……………………………………………………………………73 TÀI LIỆU THAM KHẢO 75 v EU Tp HCM DNA P Q MS NAA BA 2,4-D vi DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Khảo sát ảnh hưởng glucose lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight)…… 32 Bảng 2.2 Khảo sát ảnh hưởng fructose lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight)…… 33 Bảng 2.3 Khảo sát ảnh hưởng lactose lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight)…….34 Bảng 2.4 Khảo sát ảnh hưởng manitol lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight)…… 35 Bảng 2.5 Khảo sát ảnh hưởng sorbitol lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight)…….35 Bảng 3.1 Ảnh hưởng đường glucose lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ Oncidium Kozumit Delight sau 12 tuần nuôi cấy………………………………………………… 38 Bảng 3.2 Ảnh hưởng đường fructose lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ Oncidium Kozumit Delight sau 12 tuần nuôi………………………………………………………45 Bảng 3.3 Ảnh hưởng đường lactose lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ Oncidium Kozumit Delight sau 12 tuần nuôi cấy…………………………………………………53 Bảng 3.4 Ảnh hưởng đường manitol lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ Oncidium Kozumit Delight sau 12 tuần nuôi cấy…………………………………………………59 vii Bảng 3.5 Ảnh hưởng đường sorbitol lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ Oncidium Kozumit Delight sau 12 tuần nuôi cấy………………………………………………… 66 viii Thí nghiệm 5: Khảo sát ảnh hưởng sorbitol lên khả sinh trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight) ❖ Trong lượng tuoi The SAS System 10:28 Thursday, July 26, 2016 The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels Values Trongluongtuoisor E0E1E2E3E4E5 Number of Observations Read Number of Observations Used Source Model Error Corrected Total Source Trongluongtuoisor NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate 56 Alpha Error Degrees of Freedom Error Mean Square Critical Value of t Least Significant Difference Means with the same letter are not significantly different t Grouping A B C C C C C C C ❖ Trọng lượng khô The SAS System 10:28 Thursday, July 26, 2016 The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels Trongluongkhosor Values E0 E1 E2 E3 E4 E5 Number of Observations Read Number of Observations Used The SAS System 10:28 Thursday, July 26, 2016 The ANOVA Procedure Dependent Variable: Y 57 Source Model Error Corrected Total R-Square 0.984671 Source Trongluongkhosor NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha Error Degrees of Freedom Error Mean Square Critical Value of t Least Significant Difference Means with the same letter are not significantly different D C D D ❖ Số chồi Source Model Error Corrected Total Source Sochoisor 59 NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha Error Degrees of Freedom Error Mean Square Critical Value of t Least Significant Difference Means with the same letter are not significantly different t Grouping B B B B B B B ❖ Số The SAS System 11:17 Thursday, July 26, 2016 The ANOVA Procedure Class Level Information Class solasor Levels Values E0 E1 E2 E3 E4 E5 Number of Observations Read Number of Observations Used The SAS System 11:17 Thursday, July 26, 2016 The ANOVA Procedure 60 Source Model Error Corrected Total Source solasor NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate 61 B C B C C C ❖ Số rễ Source Model Error Corrected Total Source soresor D t Tests (LSD) for Y NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha Error Degrees of Freedom Error Mean Square Critical Value of t Least Significant Difference Means with the same letter are not significantly different t Grouping A B B B B B B B B B ❖ Đường kính The SAS System 10:28 Thursday, July 26, 2016 The ANOVA Procedure Class Level Information Class Dklasor Levels Values E0 E1 E2 E3 E4 E5 Number of Observations Read Number of Observations Used 63 Source Model Error Corrected Total Source Dklasor NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate 64 B A B B B B B B ❖ Dài Source DF Model Error Corrected Total Source 12 17 DF Dailasor NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha Error Degrees of Freedom Error Mean Square Critical Value of t Least Significant Difference C C C C C ❖ Dài rễ The SAS System 11:17 Thursday, July 26, 2016 The ANOVA Procedure Class Level Information Class dairesor Levels Values E0E1E2E3E4E5 66 Source DF Model Error 12 Corrected Total 17 R-Square 0.918395 Source DF dairesor NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha Error Degrees of Freedom Error Mean Square Critical Value of t Least Significant Difference B B B B B B B B ❖ Chiều cao Source DF Model Error 12 Corrected Total 17 R-Square 0.694969 Source Chieu caoso r DF Anova SS 147.3333333 The SAS System Mean Square F Value Pr > F 29.4666667 5.47 0.0075 10:28 Thursday, July 26, 2016 The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for Y NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha Error Degrees of Freedom Error Mean Square Critical Value of t Least Significant Difference Means with the same letter are not significantly different 69 ... chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight) …… 33 Bảng 2.3 Khảo sát ảnh hưởng lactose lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight) …….34 Bảng 2.4 Khảo sát ảnh hưởng. .. chí tinh bột bổ sung vào mơi trường ni cấy mơ Vì tơi tiến hành thực đề tài: ? ?Khảo sát ảnh hưởng nguồn carbon lên sinh trưởng, phát triển lan Vũ nữ Oncidium Kozumit Delight in vitro” nhằm tìm nguồn. .. hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight? ?? 33 2.4.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng lactose lên khả sinh trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight) ….33 iv 2.4.4