Xây dựng quy trình nhân giống in vitro cây sùng thảo (stachys affinis)​

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY SÙNG THẢO (STACHYS AFFINIS) Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn : ThS Nguyễn Hoàng Quân Sinh viên thực MSSV: 1311100026 : Nguyễn Thị Thanh Hằng Lớp: 13DSH01 TP Hồ Chí Minh, năm 2017 Đồán tốt nghiêpp LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan nôịdung đồán tốt nghiêpp làcông trình nghiên cứu thưcp sư pcủa sư phướng dẫn của ThS Nguyễn Hoàng Quân – cán kỹ thuật Trung tâm Công nghệ Sinh học Tp HCM Đềtài đươcp tiến hành nghiên cứu thưcp nghiêṃ taịphòng Thực nghiêṃ Cây trồng thuộc Trung tâm Công nghệ Sinh Hocp Tp HCM Các sớliêụ vàkết quảcótrong nghiên cứu làhồn tồn trung thưcp.Tơi xin hoàn toàn chiụ trách nhiêṃ vềlời cam đoan Tp HCM, ngày 20 tháng 07 năm 2017 Sinh viên thưcp hiên Nguyễn Thị Thanh Hằng Đồán tốt nghiêpp LỜI CẢM ƠN Qua thời gian làm đề tài tốt nghiệp Trung tâm, em xin gửi lời cám ơn đến Trung Tâm Cơng nghệ Sinh Thành Phớ Hồ Chí Minh tạo điều kiện hỗ trợ trang thiết bị giúp em hoàn thành đề tài Em xin gửi lời cám ơn chân thành đến Ban Giám Hiệu Trường Đại Học Cơng Nghệ Thành phớ Hồ Chí Minh, đặc biệt gửi lời cám ơn đến tất các thầy cô khoa Công nghệ Sinh học – Môi trường – Thực phẩm tạo điều kiện tốt dạy bảo truyền đạt nhiều kiến thức bổ ích giúp em hoàn thành khóa học cùa mình Em xin trân trọng gửi lời cảm ơn đến TS Hà Thị Loan – Phó Giám đốc Trung tâm Công nghệ Sinh học TP HCM ThS Nguyễn Hoàng Quân tận tình hướng dẫn bảo kiến thức cho em suốt thời gian làm đồ án tốt nghiệp Em xin cảm ơn toàn thể anh chị làm việc Trung tâm các bạn sinh viên làm đề tài Trung tâm giúp đỡ em suốt quá trình làm đề tài Con xin cám ơn ba mẹ có công sinh thành nuôi dưỡng khôn lớn Cám ơn anh chị em người thân gia đình bạn bè bên cạnh giúp đỡ cổ vũ tinh thần cho em Em xin chân thành cảm ơn Thành phố Hồ Chí Minh, ngày 20 tháng năm 2017 Sinh viện thực Nguyễn Thị Thanh Hằng Đồán tốt nghiêpp MỤC LỤC DANH MỤC HÌNH i DANH MỤC BẢNG ii DANH MỤC BIỂU ĐỒ .iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT iv MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết của đề tài Ý nghĩa của đề tài Đối tươngp vàphaṃ vi nghiên cứu Mục đích nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu Kết đạt Bố cục đồ án CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Sơ lược về nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.1.1 Lịch sử phát triển công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật .4 1.1.2 Các phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.1.3 Các giai đoạn quy trình nhân giống in vitro 1.1.4 Những yếu tố ảnh hưởng đến quá trình nuôi cấy mô thực vật 1.2 Giới thiệu về chi Stachys 17 1.3 Giới thiệu về sùng thảo (Stachys affinis) 19 1.3.1 Phân loại 19 Đồán tốt nghiêpp 1.3.2 Đặc điểm sinh học công dụng 19 1.3.4 Thành phần hóa học 21 1.3.5 Giá trị dinh dưỡng 22 1.4 Một số nghiên cứu về chi Stachys 23 1.4.1 Kháng viêm giảm đau 24 1.4.2 Chống oxy hóa 24 1.4.3 Chống lo âu 25 1.4.4 Kháng khuẩn 26 1.5 Các nghiên cứu nhân giống in vitro chi Stachys 27 CHƯƠNG 2: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29 2.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 29 2.2 Vật liệu phương pháp 29 2.2.1 Vật liệu nghiên cứu 29 2.2.2 Trang thiết bị, dụng cụ hóa chất 29 2.2.3 Môi trường nghiên cứu 30 2.2.4 Điều kiện phòng nuôi cấy 30 2.2.5 Phương pháp xử lý số liệu 30 2.3 Nội dung nghiên cứu 30 2.4 Phương pháp nghiên cứu 31 2.4.1 Pha môi trường nuôi cấy 31 2.4.2 Các thao tác phòng cấy 32 2.4.3 Bố trí thí nghiệm 32 Đồán tớt nghiêpp 2.4.3.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng của BA NAA đến khả nhân chồi từ đoạn thân sùng thảo 32 2.4.3.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng của IBA đến quá trình tạo rễ của sùng thảo 33 2.4.3.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng của gía thể đến sinh trưởng của sùng thảo vườn ươm 35 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 37 3.1 Ảnh hưởng của BA kết hợp NAA đến khả nhân chồi từ đoạn thân sùng thảo 37 3.2 Ảnh hưởng của IBA đến quá trình tạo rễ của sùng thảo .42 3.3 Ảnh hưởng của giá thể đến sinh trưởng của sùng thảo giai đoạn vườn ươm 47 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 52 4.1 Kết luận 52 4.2 Kiến nghị 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO 53 Tài liệu Tiếng Việt 53 Tài liệu Tiếng Anh 53 PHỤ LỤC Phu lp ucp A: Thành phần môi trường MS Phụ lục B: Quy trình nhân giống sùng thảo (Stachys affinis) Phụ lục C: Bảng sớ liệu xử lí thớng kệ phần mềm SAS 9.4 .3 Đồán tớt nghiêpp DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cây sùng thảo 19 Hình 1.2 Củ sùng thảo 20 Hình 3.1 Ảnh hưởng của BA kết hợp NAA đến khả nhân chồi từ đoạn thân sùng thảo sau tuần nuôi cấy 39 Hình 3.2 Ảnh hưởng của IBA đến quá trình rễ của sùng thảo sau tuần nuôi cấy 46 Hình 3.3 Ảnh hưởng của giá thể đến sinh trưởng của sùng thảo giai đoạn vườn ươm sau tuần trồng 51 i Đồán tốt nghiêpp DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Nồng độ thời gian sử dụng của số chất khử trùng .10 Bảng 2.1 Khảo sát ảnh hưởng của BA kết hợp NAA đến khả nhân chồi .33 Bảng 2.2 Khảo sát ảnh hưởng của IBA đến quá trình tạo rễ 34 Bảng 2.3 Khảo sát ảnh hưởng của giá thể đến sinh trưởng của sùng thảo giai đoạn vườn ươm 35 Bảng 3.1 Ảnh hưởng của BA kết hợp NAA đến khả nhân chồi từ đoạn thân sùng thảo sau tuần nuôi cấy 38 Bảng 3.2 Ảnh hưởng của nồng độ IBA đến quá trình tạo rễ của sùng thảo sau tuần nuôi cấy 43 Bảng 3.3 Ảnh hưởng của giá thể đến sinh trưởng của sùng thảo giai đoạn vườn ươm sau tuần trồng 48 ii Đồán tốt nghiêpp DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Ảnh hưởng của BA kết hợp NAA đến tỷ lệ tạo mẫu tạo chồi sau tuần nuôi cấy 39 Biểu đồ 3.2 Ảnh hưởng của BA kết hợp NAA đến khả nhân chồi từ đoạn thân sùng thảo sau tuần nuôi cấy 39 Biểu đồ 3.3 Ảnh hưởng của IBA đến quá trình tạo rễ của sùng thảo sau tuần nuôi cấy 44 Biểu đồ 3.4 Ảnh hưởng của giá thể đến tỷ lệ sống của sùng thảo giai đoạn vườn ươm sau tuần trồng 48 Biểu đồ 3.5 Ảnh hưởng của giá thể đến sinh trưởng của sùng thảo giai đoạn vườn ươm sau tuần trồng 49 iii Đồán tốt nghiêpp DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT 2,4-D 2,4 - Dichlorophenoxyacetic acid 2,4,5-T Trichlorophenoxyacetic acid ABA Abscisic acid BA Benzyl Adenine CNSH Công Nghệ Sinh Học ĐC Đối chứng GA Gibberellin IAA 3-Indole acetic acid IBA 3-Indole butyric acid MS Murashige – Skoog NAA Napthalene Acetic Acid PhG Phenylpropanoid Glycosides TP.HCM Thành phớ Hồ Chí Minh iv Đồán tốt nghiêpp Means with the same letter are not significantly different d Chiều cao chồi S Corr R Source NTHUC Me t Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng IBA đến trình tạo rễ sùng thảo a Số rễ SO RE THE ANOVA Procedure Class Level Information Sou Mo Err Correcte R-Square Sour NTH Means with the sa t Grouping B B B Đồán tốt nghiêpp Means with the same letter are not significantly different t Grouping D D D b Chiều dài rễ Source Model Error Corrected To Source NTHUC 10 Đồán tốt nghiêpp CHIEU DAI RE The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for CHIEUDAIRE c Số lá 11 Đồán tốt nghiêpp SO LA The ANOVA Procedure Dependent Variable: SOLA Source Model Error Corrected Total R-Square 0.965080 Source NTHUC Means with the same letter are not significantly different Đồán tốt nghiêpp d Chiều cao CHIEU CAO CAY The ANOVA Procedure Class Level Information Class NTHUC Number of Observations Read Number of Observations Used CHIEU CAO CAY The ANOVA Procedure Dependent Variable: CHIEUCAOCAY Source Model Error Corrected Total R-Square 0.882742 Source NTHUC CHIEU CAO CAY The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for CHIEUCAOCAY Alpha Error Degrees of Freedom Error Mean Square Critical Value of t Least Significant Difference 13 Đồán tốt nghiêpp Means with the same letter are not significantly different t Grouping B B B D D D Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng giá thể đến sinh trưởng sùng thảo giai đoạn vườn ươm a Tỷ lệ sống TY LE SONG The ANOVA Procedure Source Model Error Corrected Total 14 R-Square 0.986992 TY LE SONG The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for TYLESONG Alpha Error Degrees of Freedom Error Mean Square Critical Value of t Least Significant Difference Means with the same letter are not significantly different t Grouping A B C b Tỷ lệ chết TY LE CHET The ANOVA Procedure Class Level Information Class NTHUC Number of Observations Read Number of Observations Used 15 TY LE CHET The ANOVA Procedure Dependent Variable: TYLECHET R-Square 0.987273 Source NTHUC TY LE CHET The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for TYLECHET Alpha Error Degrees of Freedom Error Mean Square Critical Value of t Least Significant Difference Means with the same letter are not significantly different t Groupin A B C c Số lá 16 R-Square 0.950707 17 Đồán tốt nghiêpp Means with the same letter are not significantly different t Grouping A B C d Chiều cao CHIEU CAO CAY The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels Values NTHUC Number of Observations Read Number of Observations Used CHIEU CAO CAY The ANOVA Procedure Dependent Variable: CHIEUCAOCAY Source Model Error Corrected Total R-Square 0.924164 Source NTHUC 18 Đồán tốt nghiêpp CHIEU CAO CAY The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for CHIEUCAOCAY Alpha Error Degrees of Freedom Error Mean Square Critical Value of t Least Significant Difference Means with the same letter are not significantly different 19 Đồán tốt nghiêpp 20 Đồán tốt nghiêpp 21 ... nghiên cứu tiến hành thực đề tài: Xây dựng quy trình nhân giống in vitro sùng thảo (Stachys affinnis) Ý nghĩa đề tài Đồán tốt nghiêpp • Ý nghĩa khoa học - Giúp sinh viên củng cố lại kiến thức... đoạn quy trình nhân giống in vitro Cho tới việc sử dụng phương pháp nhân giống in vitro áp dụng cho nhiều loại trồng (trên 400 loài) Giáo sư Murashige (1974) chia quy trình nhân giống in. .. khả nhân chồi từ đoạn thân sùng thảo Mục đích: Xác định nồng độ BA thích hợp kết hợp với NAA cho qúa trình nhân chồi sùng thảo Mẫu cấy: Đoạn thân sùng thảo in vitro Tiến hành: Chọn sùng thảo