Nghiên cứu trích ly tinh dầu một số loại vỏ bưởi ở miền nam việt nam và thử hoạt tính kháng khuẩn, bước đầu ứng dụng để sản xuất kem trị mụn từ tinh dầu bưởi​

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Nghiên cứu trích ly tinh dầu số loại vỏ bưởi miền Nam Việt Nam thử hoạt tính kháng khuẩn, bước đầu ứng dụng để sản xuất kem trị mụn từ tinh dầu bưởi Ngành: Công nghệ sinh học Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Giảng viên hướng dẫn : T.S Nguyễn Ngọc Hồng Th.S Nguyễn Thị Thu Hương Sinh viên thực MSSV: 1151110307 : Phạm Quang Thắng Lớp: 11DSH04 TP Hồ Chí Minh, 2015 LỜI CẢM ƠN Trong q trình học tập nghiên cứu để hồn thành tốt đề tài này, cố gắng phấn đấu khơng ngừng thân, em cịn nhận nhiều giúp đỡ, hỗ trợ thầy cô bạn bè,…Em xin chân thành cảm ơn Đặc biệt cô Nguyễn Ngọc Hồng Cô Nguyễn Thị Thu Hương tận tình hướng dẫn, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm quý báu, bổ ích suốt thời gian thực đề tài Cùng với quý thầy mơn cơng nghệ sinh học, cán phịng thí nghiệm ban lãnh đạo trường Đại học Cơng Nghệ nhiệt tình giúp đỡ em thời gian qua Cùng với tất bạn lớp 11dsh04 ngành cơng sinh học đóng góp ý kiến bổ ích thời gian học tập thực đề tài Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn đến ba mẹ người tạo điều kiện để em có thành Vì thời gian thực đề tài có hạn, q trình thực đề tài cịn gặp nhiều khó khăn nên khơng thể tránh khỏi thiếu sót Em xin chân thành đón nhận ý kiến đóng góp thầy bạn Tp.HCM, ngày tháng Phạm Quang Thắng năm LỜI CAM ĐOAN -  - Em xin cam đoan khóa luận tốt nghiệp cơng trình nghiên cứu thực cá nhân, thực dựa sở nghiên cứu lý thuyết thực nghiệm Các số liệu, kết thí nghiệm báo cáo khoá luận trung thực Sinh Viên Thực Hiện Phạm Quang Thắng MỤC LỤC LỜI MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan Bưởi 1.1.1 Vị trí phân loại 1.1.2 Nguồn gốc 1.1.3 Đặc điểm thực vậ 1.1.4 Thành phần hóa h 1.1.5 Một số giống bưở 1.2 1.2.1 Tổng quan tinh dầu Khái niệm tinh 1.2.2 Các thành phần h 1.2.3 Ảnh hưởng n chất tinh dầu bưởi 1.2.4 Ứng dụng tin 1.2.5 Các phương pháp 1.3 Tổng quan chủng vi khuẩn thử nghiệm 1.3.1 Staphyllococcus 1.3.2 Pseudomonas aer 1.3.3 Escherichia coli ( 1.4 1.4.1 Bệnh lý mụn trứng cá Định nghĩa 1.4.2 Sinh bệnh học củ 1.4.3 Các yếu tố liên q 1.4.4 Điều trị 1.5 Giới thiệu kem bôi trị mụn CHƯƠNG 2: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Địa điểm 2.2 Thời gian nghiên cứu 2.3 Vật liệu 2.3.1 Nguyên liệu i 2.3.2 Dụng cụ, thiết bị 2.3.3 Hóa chất 2.4Phương pháp nghiên cứu 2.4.1 Tiến hành trích ly tinh dầu khảo sát yếu tố ảnh hưởng 2.4.2 Phương pháp đán 2.5Phối chế kem bơi trị mụn 2.6Các thí nghiệm khảo sát CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1Kết khảo sát thời gian chưng cất tinh dầu c 3.2Thử hoạt tính kháng khuẩn tinh dầu loạ 3.2.1 Hoạt tính kháng P 3.2.2 Hoạt tính kháng S 3.2.3 Hoạt tính kháng E 3.3Kết thử nghiệm kem trị mụn CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1Kết luận 4.2Kiến nghị PHỤ LỤC………………………………………………………………………….1 ii DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Các thông số sử dụng để khảo sát thời gian chưng cất 43 Bảng 3.1 Kết khảo sát thời gian chưng cất tinh dầu loại bưởi 44 Bảng 3.2 Kết kháng Pseudomonas aeruginosa tinh dầu loại bưởi .46 Bảng 3.3 Kết kháng Staphylococcus aureus loại tinh dầu bưởi .48 Bảng 3.4 Kết kháng E.coli tinh dầu loại bưởi 50 Bảng 3.5 Kết tìm tỉ lệ kem trị mụn thích hợp 53 Bảng 3.6 Kết xét nghiệm viện Pasteur 54 Bảng 3.7 So sánh thời gian hết mụn việc thoa kem không thoa kem 55 Bảng 3.8 So sánh thời gian hết mụn việc thoa kem thoa kem khơng có tinh dầu 58 Bảng 4.1 Hàm lượng tinh dầu thu thời gian chưng cất 55 phút .61 iii DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hình ảnh trái bưởi Citrus maxima Hình 1.2 Bưởi Phúc Trạch Hình 1.3 Bưởi da xanh Hình 1.4 Bưởi Năm Roi 10 Hình 1.5 Bưởi lơng cổ cị 11 Hình 1.6 Bưởi đường cam 12 Hình 1.7 Hệ thống chưng cất nước 15 Hình 1.8 Máy ép tinh dầu 17 Hình 1.9 Hệ thống chưng cất nước hỗ trợ vi song 18 Hình 1.10 Staphyllococcus aureus 21 Hình 1.11 Pseudomonas aeruginosa 23 Hình 1.12 Escherichia coli 24 Hình 1.13 Cơ chế gây bệnh trứng cá 26 Hình 1.14 Các dạng mụn trứng cá 27 Hình 2.1 Sơ đồ nghiên cứu 33 Hình 2.2 Sơ đồ quy trình chưng cất tinh dầu 34 Hình 2.3 Hình dang vỏ loại bưởi thu mẫu 35 Hình 2.4 Vỏ bưởi sau xay 35 Hình 2.5 Bộ chưng cất lơi nước 37 Hình 2.6 Quy trình đánh giá hoạt lực kháng khuẩn loại tinh dầu 38 Hình 2.7 Sơ đồ quy trình sản xuất kem trị mụn 42 Hình 3.1 Kết kháng Pseudomonas aeruginosa tinh dầu bưởi lông cổ cị .47 Hình 3.2 Kết kháng Pseudomonas aeruginosa tinh dầu bưởi da xanh .47 Hình 3.3 Kết kháng Pseudomonas aeruginosa tinh dầu bưởi năm roi 47 Hình 3.4 Kết kháng Staphylococcus aureus tinh dầu bưởi da xanh 49 Hình 3.5 Kết kháng Staphylococcus aureus tinh dầu bưởi năm roi 49 Hình 3.6 Kết kháng Staphylococcus aureus tinh dầu bưởi lơng cổ cị 49 iv Hình 3.7 Kết kháng E.coli tinh dầu bưởi năm roi 51 Hình 3.8 Kết kháng E.coli tinh dầu bưởi lơng cổ cị 51 Hình 3.9 Kết kháng E.coli tinh dầu bưởi da xanh 51 Hình 3.10 Hình ảnh trước sau sử dụng kem bôi trị mụn 60 Hình 4.1 Sơ đồ quy trình chưng cất tinh dầu 62 Hình 4.2 Sơ đồ quy trình sản xuất kem trị mụn……………………………………64 v DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT - ĐC: Đối chứng - E.Coli: Escherichia coli - TSA: Trytone casein soy agar - TSB: Tryptic soy broth - TCVS: Tiêu chuẩn vi sinh vi Đồ án tốt nghiệp Z= = = =15,1 Quyết định: Vì Z = 15,1 > Zn = 2,58, ta bác bỏ H0 chấp nhận H1 Kết luận Vậy có khác biệt thời gian hết mụn thoa kem trị mụn không thoa kem trị mụn Nghĩa việc bơi kem trị mụn có hiệu Hơn chứng tỏ việc sử dụng kem trị mụn có hiệu việc không dùng kem trị mụn 58 Đồ án tốt nghiệp Bảng 3.8 So sánh thời gian hết mụn việc thoa kem thoa kem khơng có tinh dầu 59 Đồ án tốt nghiệp Qua kết thống kê cho thấy: chứng tỏ dùng kem trị có tinh dầu thời gian hết mụn nhanh dùng kem khơng có tinh dầu Kiểm nghiệm giả thiết kết luận Từ kiện thu nhập chọn lọc được, người nghiên cứu tiến hành kiểm nghiệm giả thuyết phương pháp so sánh trung bình (cỡ mẫu lớn, n1, n2 ≥ 30) Trị số người dùng: gọi µ1, µ2 thời gian trung bình hết mụn việc thoa kem khơng có tinh dầu thoa kem có tinh dầu Các giả thuyết: H0: µ1 = µ2, khơng có khác biệt thời gian hết mụn việc thoa kem có tinh dầu thoa kem khơng có tinh dầu Ha: µ1 # µ2, có khác biệt thời gian hết mụn việc thoa kem có tinh dầu thoa kem khơng có tinh dầu Mức ý nghĩa α=0.01 Trị số mẫu: hiệu hai trung bình mẫu Phân bố mẫu: phân bố bình thường mẫu lớn Biến số kiểm nghiệm Z = Vùng bác bỏ Với α =0,01, tra bảng Z ta Zα = 2,58 Nếu (-2,58≤ Zα ≤2,58) ta chấp nhận H0 Nếu (Z < - 2,58) (Z > 2,58)ta bác bỏ giả thuyết H0 chấp nhận giả thuyết H1 Áp dụng kiện Ta có kiện: - = 86,8 - 38,8 = 48 7,17 Thay giá trị vào công thức ta được: 60 Đồ án tốt nghiệp Z= = = =17,7 Quyết định: Vì Z = 17,7 > Zn = 2,58, ta bác bỏ H0 chấp nhận H1 Kết luận Vậy có khác biệt thời gian hết mụn thoa kem có tinh dầu thoa kem khơng có tinh dầu Nghĩa việc bơi kem có bổ sung tinh dầu có hiệu Hơn chứng tỏ việc sử dụng kem có tinh dầu có hiệu việc thoa kem khơng có tinh dầu Hình 3.10 Hình ảnh trước sau sử dụng kem bôi trị mụn (Xem thêm phụ lục E) 61 Đồ án tốt nghiệp CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Từ kết nghiên cứu thực nghiệm đối tượng loại vỏ bưởi bưởi năm roi, bưởi da xanh, bưởi lơng cổ cị rút số kết luận sau: - Đã xây dựng quy trình trích ly tinh dầu loại vỏ bưởi kết hợp với điều kiện thích hợp nhằm thu lượng tinh dầu cao mà tốn lượng - Bằng phương pháp chưng cất lôi nước tách tinh dầu loại vỏ bưởi Khối lượng vỏ bưởi thực nghiệm 50 g/lần thí nghiệm, khơng đổi suốt trình khảo sát Đã khảo sát thời gian chưng cất tinh dầu vỏ bưởi cho loại vỏ bưởi 55 phút tìm loại bưởi cho tinh dầu cao bưởi lơng cổ cị, sau bưởi da xanh, cuối bưởi năm roi Bảng 4.1 Hàm lượng tinh dầu thu thời gian chưng cất 55 phút 62 Đồ án tốt nghiệp Vỏ bưởi Rửa Gọt thu lớp vỏ chứa tinh dầu Xay nhuyễn Bổ sung nước muối có nồng độ 15% vào bình chưng cất tỷ lệ 6:1 Thời gian: t = 55 phút Thu hỗn hợp dầu nước Làm khan Na2SO4, tách phân ly tinh dầu Hình 4.1 Sơ đồ quy trình chưng cất tinh dầu 63 Đồ án tốt nghiệp - Kết khảo sát loại vi khuẩn Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, E.coli cho thấy tinh dầu bưởi có khả ức chế loại vi khuẩn gram (+), gram (-) Trong lọai vi khuẩn loại tinh dầu bưởi kháng khuẩn mạnh E.coli, kháng khuẩn yếu Pseudomonas aeruginosa Tinh dầu bưởi da xanh có hoạt lực kháng khuẩn mạnh chọn để điều chế kem trị mụn - Điều chế thành công kem trị mụn từ tinh dầu bưởi - Thử nghiệm kết kem trị mụn bổ sung tinh dầu bưởi cho kết tốt Kết thử nghiệm cho thấy trung bình sau 38,8 mụn chữa khỏi hồn tồn, vùng mụn khơng có dấu hiệu thâm, viêm nhiễm, mùi thơm nhẹ dịu tạo cảm giác dễ chịu cho người sử dụng 64 Tướng dầu: Trộn tướng dầu tướng nước cho giọt tướng nước vào tướng dầu, khuấy 45 phút, nhiệt độ 60 C Kiểm tra điều chỉnh pH 5.5 – 6.5 Bổ sung tinh dầu với nồng độ 0,5 % Khuấy kem với tinh dầu Rót kem để ổn định Sản phẩm Hình 4.2 Sơ đồ quy trình sản xuất kem trị mụn 65 Đồ án tốt nghiệp 4.2 Kiến nghị Vì điều kiện thời gian, chi phí khơng cho phép nên đề tài xây dựng quy trình trích ly tinh dầu loại vỏ bưởi khu vực miền Nam với điều kiện thích hợp thử hoạt tính kháng khuẩn, điều chế thử nghiệm kem trị mụn Trong thuộc chi Citrus phân bố rộng rãi vùng Vì vậy, có điều kiện cần tiếp tục nghiên cứu tinh dầu vỏ khác thuộc chi Citrus ứng dụng vào sản xuất để tang nguồn lợi cho người dân nước nhà Ý nghĩa khoa học đề tài: So sánh hàm lượng tinh dầu thu từ loại vỏ bưởi (bưởi năm roi, bưởi da xanh, bưởi lơng cổ cị) mà chưa tham khảo từ tài liệu công bố Thử hoạt tính sinh học trị mụn thơng qua việc tạo sản phẩm kem trị mụn tinh dầu bưởi người đạt tiêu chuẩn vi sinh Bộ Y Tế theo số 06:2011/TT-BYT chưa tham khảo từ tài liệu công bố Ý nghĩa thực tế: Tận dụng vỏ bưởi để tihu tinh dầu sản xuất kem trị mụn nâng cao giá trị kinh tế từ bưởi Tạo sản phẩm kem trị mụn có hiệu từ nguyên liệu rẻ tiền giúp cho giá thành sản phẩm giảm, có ý nghĩa mặt kinh tế tốt cho sức khỏe 66 Đồ án tốt nghiệp TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt [1] Đỗ Tất Lợi (2004) Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học, Hà Nội [2] Lã Đình Mỡi (2001) Tài ngun thực vật có tinh dầu Việt Nam, NXB Nông Nghiệp [3] Lê Ngọc Thạch (2003) Tinh Dầu, NXB Đại học Quốc gia, Thành phố Hồ [4] Lê Phạm Tân Quốc, Võ Ái Mỹ, Trịnh Thị Minh Nguyệt Nghiên cứu tách chiết tinh dầu vỏ cam sành, Trường Đại học Công nghiệp thành phố Hồ Chí Minh [5]Lương Đức Vỉnh (2014) Nghiên cứu trích ly tinh dầu vỏ bưởi năm roi, Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu [6] Lưu Thị Thủy (2009) Xác định thành phần tinh dầu vỏ bưởi thuộc họ cam (Rutaceae), Trường Đại học Vinh [7] Ngô Văn Tĩnh (2014), Nghiên cứu chiết tách tinh dầu cam, bưởi (Citrus) ứng dụng xử lý rác thải xốp, Đại học Thái Nguyên [8] Nguyễn Minh Hoàng (2006) Khảo sát tinh dầu vỏ giống trái Citrus họ Rutaceae, Đại học Mở TPHCM [9] Nguyễn Kim Phi Phụng, 2000-2001 Các phương pháp nhận danh; trích ly lập hợp chất hữu Trường Đại Học Khoa Học Tự Nhiên [10] Nguyễn Văn Thanh Vi sinh học Nhà Xuất Bản Y học [11]Th.s Nguyễn Ngọc Thanh (2010) Nghiên cứu chiết tách limonene số dẫn xuất từ nguồn gốc thực vật Việt Nam sử dụng lĩnh vực sát trùng gia dụng (phịng trừ trùng y tế) [12] PGS.TS Nguyễn Thượng Dong, 2006 Phương pháp nghiên cứu tác dụng lý từ thảo dược NXB Khoa học kỹ thuật, Hà Nội [13] Võ Văn Chi, Từ điển thuốc Việt Nam, NXB Y học 141, 171, 221(1997) 67 Đồ án tốt nghiệp [14] Vi sinh vật y học NXB Y học (2002) [15] Vũ Công Hậu (1999) Trồng ăn mjen nam Nhà xuất nông nghiệp [16] Vương Ngọc Chính, Giáo trình Hương liệu – mỹ phẩm, Đại Học Bách Khoa TPHCM, (2007) Tài liệu tiếng Anh [17] Nationnal Institute of Nutritive – Ministry of Health (1995) Food products in Viet Nam – Composition and Nutritive Medicine publisher [18] tale Nevo Foundation, Netherlands Nutrition Centre (1996) Nevo [19] (1949) E Guenther The Essential oils VanNostrand, 2, 22-259 [20] F GÜLAY KIRBAŞLAR, AYDIN TAVMAN, BAŞARAN DÜLGER, AND GÜLEN TÜRKER (2009) Pak J Bot., 41(6): 3207-3212, 2009 Tài liệu Internet [21]http://fuckyeahmedicine.tumblr.com/post/455450061/pseudomonasaeruginosa-infections [22] www.caythuocquy.info.vn [23] www.duoclieu.net/Dlieuhoc/chuong5.html [24] http://www.cesti.gov.vn/kh-cn-trong-nuoc/11.html [25] http://khoahoc.tv/doisong/yhoc/suc-khoe/31480_nhung-thuc- pham-tang-cuong-suc-khoe-vao-mua-dong.aspx [26] http://hatinhtrade.com.vn/sgd/portal/read/san-pham-dactrung/tintuc/buoi-phuc-trach-1.html [27] www.hoahocngaynay.com/vi/nghien-cuu-giang-day/bai-nghien-cuu/86- pectinva-ung-dung.html [28] www.shsu.edu/chm_tgc/sounds/flashfiles/GC-MS.swf [29] http://suckhoedoisong.vn/phong-benh/khi-tre-bi-roi-loan-tieu-hoa- 2012091710560440.htm 68 Đồ án tốt nghiệp [30] www.thvl.vn/ Buoi-Nam-Roi [31] www.tailieu.vn www.vienmy.vn/tt/Cuoc-Song/Cach-bao-quan-tinhdau_666.aspx [32] [33] www.wikipedia.org [34] www.ykhoa.net/duoc/sudungthuoc/27_101.htm [35] http://namvanlong.com/buoi-da-xanh-255.htm [36] http://ducthanhgreenfood.com/blog/2013/05/04/buoi-nam-roi/ [37]http://www.nongsanngon.com.vn/blog/blog/nuc-danh-buoi-long-co-cotien-giang [38] http://shophoaqua.vn/chi-tiet/50/buoi-duong-la-cam/ [39] http://hongngochospital.vn/mun-trung-ca/[23] [40] Chi cục thú y TP Hồ Chí Minh, Ngộ độc thực phẩm vi khuẩn E coli, 6/2012, http://chicucthuyhcm.org.vn/new/2005/09/23/Ngo-doc-thuc-pham-do-vikhuan-Ecoli.aspx [41] Đại Học Y Thái Bình, Các vi khuẩn gây bệnh thường gặp, 5/2012, http://thuvien.yhvn.vn/node/1030 http://thuvien.yhvn.vn/node/1029 http://thuvien.yhvn.vn/node/1012 [42] http://www.patient.co.uk/doctor/Pseudomonas.htm 69 ... tài: ? ?Nghiên cứu trích ly tinh dầu số loại vỏ bưởi miền Nam Việt Nam thử hoạt tính kháng khuẩn, bước đầu ứng dụng để sản xuất kem trị mụn từ tinh dầu bưởi? ?? 2) Mục tiêu nghiên cứu - Tìm loại bưởi. .. lượng tinh dầu nhiều lọai: bưởi năm roi, bưởi da xanh, bưởi lơng cổ cị - Thử nghiệm hoạt tính kháng khuẩn tinh dầu - Điều chế thử nghiệm kem bôi trị mụn 3) Nhiệm vụ nghiên cứu Nghiên cứu sở lí... nghiệm ly trích tinh dầu từ loại vỏ bưởi phương pháp chưng cất lôi nước - Thử hoạt tính sinh học khả kháng khuẩn tinh dầu loại bưởi từ phương pháp chưng cất lơi nước - Thử nghiệm hoạt tính kháng