Nghiên cứu tác dụng của một số chất thứ cấp từ thực vật lên vi khuẩn gây sâu răng streptococcus mutans luận án TS sinh học 62 42 30 15

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN NGUYỄN QUANG HUY NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CỦA MỘT SỐ CHẤT THỨ CẤP TỪ THỰC VẬT LÊN VI KHUẨN GÂY SÂU RĂNG STREPTOCOCCUS MUTANS LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC HÀ NỘI - 2009 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN NGUYỄN QUANG HUY NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CỦA MỘT SỐ CHẤT THỨ CẤP TỪ THỰC VẬT LÊN VI KHUẨN GÂY SÂU RĂNG STREPTOCOCCUS MUTANS Mã số LUẬN VĂN TIẾN SĨ SINH HỌC HÀ NỘI - 2009 MỤ MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Bệnh sâu yếu tố l 1.1.1 Bệnh sâu 1.1.2 Tình hình bệnh sâu th 1.1.3 Cơ chế gây bệnh sâu 1.1.4 Mảng bám hình thàn 1.2 Vi khuẩn Streptococcus muta 1.2.1 Một số đặc trưng hình thái p 1.2.2 Một số đặc trưng sinh lý sinh h 1.2.3 Cơ sở phân tử đáp ứng stre 1.2.3.1 Đáp ứng stress axit vi khuẩn 1.2.3.2 Đáp ứng stress oxy hóa vi kh 1.2.4 Các đặc trưng hệ gen nhận dạng 1.3 Các biện pháp chống sâu răn 1.3.1 Sử dụng chất kháng khuẩn 1.3.2 Sử dụng chất tổng hợp 1.3.3 Sử dụng hợp chất tự nhiên 1.3.4 Sử dụng biện pháp khác 1.3.4.1 Liệu pháp thay 1.3.4.2 Vaccine phịng chống sâu 1.3.5 Tình trạng nhiễm fluo 1.4 Các chất thứ cấp từ thực vật 1.4.1 Phân loại, cấu tạo hố học tí 1.4.1.1 Nhóm hợp chất terpene 1.4.1.2 Nhóm hợp chất phenolic 1.4.1.3 Nhóm hợp chất chứa nitơ 1.4.2 Hoạt tính sinh học hợp 1.4.2.1 Tác dụng chống oxy hoá c 1.4.2.2 Tác dụng kháng sinh, kháng kh thực vật 1.4.2.3 Một số tác dụng khác chất thứ cấp từ thực vật CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu 2.1.1 Chủng vi sinh vật 2.1.2 Mẫu thực vật 2.1.3 Hoá chất 2.1.4 Thiết bị thí nghiệm 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Nuôi cấy vi khuẩn bảo quản 2.2.2 Phương pháp nghiên cứu phân mutans từ bệnh phẩm mắc 2.2.2.1 Phân lập môi trường Mitis 2.2.2.2 Phân lập môi trường TSA 2.2.3 Phương pháp nhận dạng Strept Việt Nam 2.2.3.1 Kiểm tra hình thái tế bào vi kh 2.2.3.2 Phương pháp nhuộm Gram cải 2.2.3.3 Kiểm tra hoạt tính catalase 2.2.3.4 Kiểm tra đặc tính hố sinh 2.2.3.5 Phương pháp PCR nhân đ 16S kỹ thuật đa hình độ dài 2.2.3.6 Phương pháp PCR mồi đặc hiệ dextranase Streptococcus m 2.2.3.7 Phương pháp đọc trình tự đoạn 2.2.4 Phương pháp ni cấy biofilm 2.2.5 Phương pháp xác định mức độ 2.2.6 Phương pháp xác định mức độ 2.2.7 Phương pháp xác định khả năn 2.2.8 Phương pháp đo mức độ tiêu th 2.2.9 Xác định hoạt độ số enzym 2.2.9.1 Chuẩn bị tế bào thấm 2.2.9.2 Phân tích hoạt độ ATPase 2.2.9.3 Phân tích hoạt độ phosphotran 2.2.9.4 Phân tích hoạt độ NADH oxid 2.2.9.5 Phân tích hoạt độ lactate dehy 2.2.9.6 Phân tích hoạt độ pyruvate kin 2.2.10 Phương pháp nghiên cứu định thực vật thứ sinh dịch ch 2.2.11 Phương pháp phân tách hợ 2.2.12 Phương pháp xác định cấu trúc 2.2.13 Phương pháp xử lý số liệu Ch¬ng Kết nghiên cứu 3.1 Nghiờn cu sng lc số th sâu 3.1.1 Khả ức chế sinh axit c 3.1.2 Khả diệt S mutans GS-5 3.1.2.1 Khả diệt vi khuẩn S muta 3.1.2.2 Khả diệt vi khuẩn S muta 3.1.3 Khả ức chế hình thành dịch chiết thực vật 3.1.4 Tác dụng dịch chiết số thực vật phối hợp với fluo 62 3.1.5 Tác dụng dịch chiết số thực vật phối hợp với H2O2 64 3.1.6 Tác dụng dịch chiết Sao đen Sắn thuyền lên số vi khuẩn đường miệng 65 Tác ngh cứu hoạ khu số chất thứ cấp vỏ Sao đen 3.2.1 3.2.2 3.2.3 3.2.3.1 3.2.3.2 3.2.3.3 3.2.3.4 3.2.3.5 3.2.3.6 3.2.3.7 3.3 3.3.1 3.3.2 3.3.3 3.3.3.1 3.3.3.2 Tác dụng axit asiatic lên s 3.3.3.3 Tác dụng axit asiatic lên h 3.3.3.4 ảnh hưởng axit asiatic lên mutans GS-5 3.3.3.5 Tác dụng axit asiatic lên h mutans GS-5 3.3.3.6 Tác dụng axit asiatic lê mutans GS-5 3.3.3.7 Tác dụng axit asiatic lên N 3.4 Phân lập số chủng vi khu Việt Nam 3.4.1 Phân lập S mutans môi trư TSA pH 3.4.2 Xác định số đặc điểm hình khuẩn phân lập từ người Việt N 3.4.2.1 Xác định hình thái tế bào vi kh 3.4.2.2 Nhận dạng sơ Streptococcu 3.4.3 Nhận dạng vi khuẩn Streptococ đoạn phân cắt giới hạn (RF 3.4.3.1 Tách ADN tổng số 3.4.3.2 Nhận dạng vi khuẩn kỹ th ARNr 16S 3.4.3.3 Nhận dạng vi khuẩn kỹ th gen dextranse Streptococcu 3.4.4 Một số đặc điểm sinh lý mutans H1, H2 H3 3.4.4.1 Khả sinh axit S muta H3 3.4.4.2 Khả chịu axit chủ Nam 3.4.4.3 Giải trình tự gen mã hóa ARNr người Việt Nam 3.4.5 Nghiên cứu tác dụng dịch c mutans H2 phân lập từ người V 3.4.5.1 Tác dụng dịch chiết Sao đe axit S mutans H2 3.4.5.2 Tác dụng dịch chiết Sao đe bào S mutans H2 3.4.5.3 Nghiên cứu tác dụng axit asiatic, hopea phenol malibatol A lên hoạt độ số enzyme THẢO LUẬN KẾT LUẬN ĐỀ NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC MỞ ĐẦU Sâu số bệnh miệng phổ biến có xu hướng tăng lên đặc biệt nước phát triển Sự gia tăng bệnh thay đổi lối sống, thói quen sinh hoạt, chế độ ăn uống hàng ngày tuổi thọ trung bình Theo số liệu điều tra gần Viện Răng Hàm Mặt Trung ương, khoảng 90% dân số Việt Nam mắc bệnh răng, miệng, phổ biến sâu viêm quanh Bệnh sâu khơng gây ảnh hưởng tới tình trạng sức khoẻ người bệnh mà cịn gây nhiều chi phí tốn chữa trị.Tổ chức Sức khỏe giới (WHO) xếp sâu số bệnh nguy hiểm lồi người Nhiều chương trình nghiên cứu khuyến cáo nhằm mục đích ngăn ngừa phòng chống bệnh WHO thực năm qua Mặc dù tỷ lệ sâu cộng đồng dân cư giảm đáng kể cịn trì mức cao địi hỏi phải có biện pháp dự phịng tốt để đạt mục tiêu mà WHO đưa Cách tốt để hạn chế bệnh sâu vệ sinh răng, miệng thường xuyên cách với việc hạn chế dùng thức ăn, đồ uống có nhiều đường Tuy vậy, phương pháp vệ sinh miệng, thói quen ăn uống khơng phải lúc thực được, việc sử dụng chất có khả kháng khuẩn fluo, axit yếu, muối kim loại biện pháp để phòng chống sâu Trong số chất kháng khuẩn sử dụng fluo chất có hiệu cả.Tuy nhiên, việc sử dụng fluo lâu dài hay với nồng độ cao dẫn đến chứng nhiễm fluo (fluorosis) làm men ố vàng trở nên sần sùi (Hamilton, 1990; Aeba, 2002) Chính lý mà xu hướng tìm kiếm hợp chất mới, thay phần fluo mà có hiệu chống sâu cao Hiện nay, việc tìm kiếm hợp chất thiên nhiên có tác dụng bảo vệ miệng xu hướng quan tâm nghiên cứu có nhiều ứng dụng thực tiễn Djoukeng tập thể (2005) đề cập hợp chất nhóm terpene có tính kháng khuẩn từ loài Syzygium guineense Tuy nhiên nghiên cứu tinh hợp chất axit asiatic từ Syzygium resinosum Việt Nam 3.3.3 Nghiên cứu hoạt tính kháng khuẩn sâu axit asiatic 3.3.3.1 Tác dụng axit asiatic lên sinh axit S mutans GS-5 Giá trịpH Khi b sung axit asiatic nồng độ 15 mM vào huyền dịch Streptococcus mutans GS-5 (hình 3.26), chúng tơi thấy axit asiatic ức chế sản xuất axit S mutans GS-5, thể giá trị pH cuối (5,37) cao rõ rệt so với mẫu đối chứng (4,08) Hình 3.26 Tác dụng ức chế sinh axit từ S mutans GS-5 axit asiatic Đối  chứng ( ), axit asiatic () Ký hiệu (I) đồ thị giá trị SD với n = 3.3.3.2 Tác dụng axit asiatic lên diệt vi khuẩn S mutans GS-5 Kết cho thấy axit asiatic từ Sắn thuyền có tác dụng diệt vi khuẩn S mutans GS-5 rõ rệt Ở nồng độ 15 mM sau 15 phút pH có tới 90% số tế bào vi khuẩn S mutans GS-5 bị tiêu diệt (hình 3.27) 23 Hình 3.27 Tác dụng diệt S mutans -2  GS-5 axit asiatic Đối chứng ( ), Axit asiatic () Ký hiệu (I) đồ thị giá trị SD với n = -3 -4 -5 204060 thêi gian (phót) 3.3.3.3 Tác dụng axit asiatic lên hoạt độ ATPase S mutans GS-5 (%) Kết (hình 3.28) cho thấy axit asiatic ức chế hoạt độ ATPase S mutans GS-5 Ở nồng độ 1,5 mM axit asiatic c ch 50% hot ATPase Hoạt độ lại logN/No -1 Hình 3.28 Tác dụng axit asiatic lên hoạt độ ATPase S mutans GS-5 Ký hiệu (I) đồ thị giá trị SD với n = 3.3.3.4 Ảnh hưởng axit asiatic lên hoạt độ enzyme phosphotransferase (PTS) S mutans GS-5 Kết thu (hình 3.29) cho thấy axit asiatic với nồng độ 2,2 mM ức chế 50% hoạt độ photphotranspherase Hoạ t độ lạ i (%) 24 photphotranspherase S mutans GS-5 Ký hiệu thấy axit asiatic ức chế hoạt độ enzyme Nồng độ axit asiatic ức chế 50% hoạt độ pyruate kinase, lactate dehydrogenase NADH oxidase tương ứng 1,5 mM, 0,75 mM mM Tác dụng ức chế PTS, pyruvate kinase, lactate dehydrogenase axit asiatic nguyên nhân làm cho sinh axit vi khuẩn S mutans GS-5 bị ức chế hợp chất dịch chiết Sắn thuyền Tác dụng ức chế NADH oxidase axit asiatic góp phần làm rõ nguyên nhân ức chế tiêu thụ oxy dịch chiết từ Sắn thuyền (I) đồ thị 3.4 Phân lập số chủng vi khuẩn S mutanns từ người Việt Nam Hình 3.29 Tác dụng axit asiatic lên hoạt độ giá trị SD với n = 3.3.3.5 Tác dụng axit asiatic lên hoạt độ số enzyme S mutans GS-5 Chúng tìm hiểu tác dụng axit asiatic lên họat độ pyruvate kinase, lactate dehydrogenase, NADH oxidase S mutans GS-5 phát Sử dụng môi trường Mitis Salivaius kết hợp với mơi trường TSA pH axit, dựa hình thái khuẩn lạc hoạt tính catalase chúng tơi phân lập chủng vi khuẩn thuộc chi Streptococcus, kí hiệu S sp H1, S sp H2, S sp H3, S sp H4, S sp H5 S sp H6 Sử dụng kit API20 Strep dựa phản ứng hố sinh, chúng tơi sơ kết luận chủng S sp H1 thuộc loài S mutans Hai chủng S sp H4 S sp H5 thuộc loài S sanguis S sp H6 thuộc loài S constellatus Riêng đối 25 với chủng S sp H2 S sp H3, số ID thu tương đối thấp, cần nhận dạng thêm phương pháp khác xác 3.4.3 Nhận dạng vi khuẩn Streptococcus kỹ thuật RFLP PCR Để nhận dạng cách xác chủng Streptococcus sp H1, Streptococcus sp H2 Streptococcus sp H3, sử dụng đến kỹ thuật RFLP PCR Sử dụng cặp mồi 8UA 1492R thiết kế đặc hiệu cho đoạn gen ARNr 16S, nhân thành cơng đoạn gen mã hố cho ARNr 16S từ hệ gen chủng vi khuẩn phân lập Sản phẩm PCR đoạn gen ARNr 16S tinh cắt HpaII HaeIII, sau điện di kiểm tra gel agarose Kết (hình 3.38 3.39) cho thấy chủng vi khuẩn S sp H1, S sp H2 S sp H3 cho phổ băng tương tự chủng chuẩn S mutans GS-5¸ khác với phổ băng chủng chuẩn Streptococcus sanguis NCTC 10904 (cũng thuộc chi Streptococcus) Tiếp tục sử dụng kỹ thuật PCR với cặp mồi SD1 SD2 thiết kết dựa trình tự hai đầu gen mã hoá dextranase đặc hiệu cho S mutans thấy chủng phân lập Việt Nam cho băng nhân với kích thước khoảng 1,3 kb, tương tự băng ADN nhân thu từ chủng chuẩn S mutans GS-5 Trong chủng Streptococcus sangius 10904 đối chứng khơng cho băng nhân 1,3 kb (hình 3.40) Các kết phân tích PCR RFLP cho phép chúng tơi khẳng định chủng S sp H1, S sp H2 S sp H3 thuộc loài S mutans (Sato tập thể, 2003) Hình 3.38 Sản phẩm PCR 16S ARNr sau cắt HpaII 500 bp 100 bp Hình 3.39 Sản phẩm PCR 16S ARNr sau cắt HaeIII Giếng 1: Thang chuẩn ADN 1kb Giếng 2: S mutans GS-5 Giếng 3: S sangius NCTC-10904 Giếng 4: S sp H1 H2 123456 Giếng 5: S sp Giếng 6: S sp H3 1,5 kb 500 bp Hình 3.40 Điện di gel agarose sản phẩm100bp PCR gen dextranase chủng S mutans phân lập Giếng 1: Thang chuẩn ADN 1kb Giếng 2: S sangius NCTC-10904 Giếng 3: S mutans GS-5 Giếng 4: S mutans H1 Giếng 5: S mutans H2 Giếng 6: S mutans H3 3.4.4 Một số đặc điểm sinh lý, hoá sinh chủng vi khuẩn S mutans H1, S mutans H2 S mutans H3 3.4.4.1 Khả sinh axit S mutans H1, S mutans H2 S mutans H3 27 Kết thí nghiệm sinh axit chủng S mutans thể hình 3.41 cho thấy chủng S mutans phân lập có khả sinh axit tốt, chí tốt chủng chuẩn S mutans GS-5, thể chỗ giá trị pH cuối mẫu thấp S mutans GS-5 Hình 3.41 Khả sinh axit chủng Streptococcus mutans S mutans GS- pH    ( ), S mutans H1 ( ), S mutans H2 ( ), S  30 60 90 mutans H3 ( ) thời gian ( phút) 3.4.4.2 Khả chịu axit chủng vi khuẩn phân lập từ người Việt Nam Cùng với khả sinh axit mạnh khả chịu axit đặc trưng quan trọng vi khuẩn S mutans Kết kiểm tra khả chịu axit (ở pH 3) chủng S mutans phân lập từ người Việt Nam (hình 3.42) cho thấy chủng S mutans H1, S mutans H2 S mutans H3 có khả chịu axit tốt, chí tốt chủng chuẩn S mutans GS-5, thể giá trị D chủng lớn giá trị D S mutans GS-5 28 Hình 3.42 Khả chịu axit chủng Streptococcus mutans phân lập từ Log N/No -0.5  -1 người Việt Nam S mutans GS-5 ( ),   -1.5 S.mutans H1 ( ), S mutans H2 ( ), S -2  mutans H3 ( ) -2.5 10 20 30 Thời gian (phút) 3.4.5 Nghiên cứu tác dụng dịch chiết Sắn thuyền Sao đen lên Streptococcus mutans H2 phân lập từ người Việt Nam Trong phần nghiên cứu lựa chọn chủng Streptococcus mutans H2 phân lập từ người Việt Nam để nghiên cứu số chủng Streptococcus mutans phân lập chủng S mutans H2 có khả sinh axit mạnh chịu axit tốt so với chủng lại, mặt khác S mutans H2 khác S mutans GS-5 chuẩn số đặc điểm sinh hóa khả chuyển hóa số loại đường Larabinose, D- mannitol, Inulin Các kết nghiên cứu thu cho thấy dịch chiết vỏ Sao đen Sắn thuyền với nồng độ 10% (v/v) có tác dụng ức chế sinh axit S mutans H2 tiêu diệt chủng vi khuẩn pH với giá trị D (tương đương 90% số vi khuẩn bị giết) tương ứng 22 phút 25 phút Axit asiatic, hopea phenol, malibatol A tách từ Sắn thuyền vỏ Sao đen với nồng độ từ đến 1,6 mM ức chế 50% hoạt độ enzyme ATPase PTS S mutans H2 Các kết thu tương tự tác dụng hợp chất tinh g chuẩ n Stre ptoc occu s mut ans GS5 29 KẾT LUẬN Từ kết nghiên cứu thu rút kết luận sau: Dịch chiết ethanol Chàm tía, Hương nhu trắng, Kim ngân, Quỷ trâm thảo, Sài đất, Sao đen Sắn thuyền có tác dụng ức chế sinh axit vi khuẩn gây sâu S mutans GS-5, tác dụng tăng lên dịch chiết phối hợp với NaF H2O2 Các dịch chiết thực vật có tác dụng ức chế hình thành biofilm giết vi khuẩn S mutans GS-5 Đặc biệt dịch chiết Sao đen Sắn thuyền có tác dụng giết vi khuẩn S mutans GS-5 pH mạnh gấp lần pH Dịch chiết Sắn thuyền Sao đen có tác dụng giết số loài vi khuẩn đường miệng khác S sanguis, S gordonii S rattus Đã tách chiết, tinh xác định cấu trúc hoá học hai hợp chất thực vật thứ cấp thuộc thuộc nhóm oligostilben hopea phenol (C56H42O12) malibatol A (C28H20O7) từ dịch chiết vỏ Sao đen hợp chất thứ cấp nhóm terpene axit asiatic (C30H48O5) từ dịch chiết Sắn thuyền Hopea phenol, malibatol A tách từ vỏ Sao đen axit asiatic tách từ Sắn thuyền ức chế hoạt độ enzyme phosphoryl hoá đường-PTS (IC50 tương ứng 0,75 mM, 0,75 mM mM), lactate dehydrogenase (IC 50 tương ứng 2,5 mM, 2,3 mM 0,75 mM), pyruvate kinase (IC 50 tương ứng 2,5 mM, 2,2 mM 1,5 mM) liên quan đến trình sinh axit, ATPase (IC50 tương ứng 1,2 mM, 0,75 mM 1,5 mM) liên quan đến trình chịu axit, NADH oxidase (IC 50 tương ứng 1,5 mM, mM mM) liên quan đến trình tiêu thụ oxy S mutans GS-5 Đã phân lập chủng vi khuẩn S.mutans H1, S mutans H2 S mutans H3 từ người Việt Nam nhờ việc nuôi cấy vi khuẩn môi trường Mitis salivarius chọn lọc có pH thấp, kết hợp phân tích hình thái tế bào với phân tích đa hình độ dài đoạn phân cắt giới hạn gen mã hóa cho ARNr 16S nhân PCR Chủng vi khuẩn S mutans H2 có trình tự đoạn gen mã hóa cho ARNr 16S mức độ tương đồng 100% so với trình tự đoạn gen S mutans công bố Genbank 30 Tác dụng dịch chiết Sao đen Sắn thuyền axit asiatic, hopea phenol malibatol A lên chủng vi khuẩn S mutans H2 phân lập từ người Việt Nam tương tự lên chủng chuẩn S mutans GS-5 khả ức chế sinh axit, giết vi khuẩn ức chế hoạt độ ATPase, PTS ĐỀ NGHỊ Tiếp tục nghiên cứu chế tác dụng axit asiatic từ Sắn thuyền (Syzygium resinosum G) hopea phenol, malibatol A từ vỏ Sao đen (Hopea odorata R) lên vi khuẩn gây sâu Streptococcus mutans để ứng dụng chúng vào việc bảo vệ răng, miệng DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC ĐÃ CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN NỘI DUNG LUẬN ÁN 1) Nguyễn Quang Huy, Phạm Thanh Nga, Phan Tuấn Nghĩa, 2005 Tìm hiểu tác dụng chống sâu dịch chiết vỏ Sao Đen (Hopea odorata Roxb) Tạp chí Dược học 45 (350): 13-19 2) Nguyen Quang Huy, Pham Anh Thuy Duong, Phan Tuan Nghia, 2005 Inhibition of acid production by Streptococcus mutans of some medicinal plant extracts Tạp chí Khoa học 21(2): 161-168 3) Nguyen Quang Huy, Pham Anh Thuy Duong, Phan Tuan Nghia, 2006, Antibacterial activity of some medicinal plants against dental caries pathogen Streptococcus mutans The first international conference on science and technology for sustainable development of the greater Mekong Sub-region, Khon Kaen, Thailand p 10 4) Nguyen Quang Huy, Phung Thi Thu Huong, Pham Anh Thuy Duong, Phan Tuan Nghia, 2006 Inhibitory effects of Syzygium resinogsum Gagnep extracts on caries-inducing properties of Streptococcus mutans Tạp chí Khoa học 22 (4): 131-136 31 5) Nguyễn Quang Huy, Phan Tuấn Nghĩa, Nguyễn Văn Quang, Phan Văn Kiệm, 2007 Các oligostilben từ vỏ đen Hopea odorata Roxb Tạp chí Dược học 47 (372):37-39 6) Nguyễn Quang Huy, Phan Tuấn Nghĩa, Nguyễn Văn Quang, Phan Văn Kiệm, 2007 Axít asiatic từ sắn thuyền Syzygium resinosum Gagnep tác dụng lên vi khuẩn Streptococcus mutans Tạp chí Dược học 47 (375):19-22 7) Nguyễn Quang Huy, Phùng Thị Thu Hường, Phan Tuấn Nghĩa, 2007 Phân lập nhận dạng số chủng vi khuẩn Streptococcus mutans từ người Việt Nam Tạp chí Cơng nghệ Sinh học 5(3): 291-297 8) Đỗ Thị Huê, Bùi Thanh Duyên, Nguyễn Quang Huy, Phan Tuấn Nghĩa, 2008.Tác dụng acid asiatic từ Sắn thuyền lên vi khuẩn Streptococcus mutans H2 phân lập từ người Việt Nam Hội nghị tồn quốc Hóa sinh Sinh học phân tử phục vụ Nông, Sinh, Y học Công nghệ thực phẩm 15-17/10-2008 trang 56-59 32 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN  NGUYỄN QUANG HUY NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CỦA MỘT SỐ CHẤT THỨ CẤP TỪ THỰC VẬT LÊN VI KHUẨN GÂY SÂU RĂNG Streptococus mutans Chuyên ngành: HỐ SINH HỌC 33 Mã số: 62.42.30.15 TĨM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC Hà Nội, 2009 34 Cơng trình hồn thành tại: Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐH Quốc gia Hà Nội Người hướng dẫn khoa học PGS.TS Phan Tuấn Nghĩa TS Dương Văn Hợp Phản biện Luận án bảo vệ trước hội đồng cấp nhà nước chấm luận án tiến sĩ họp Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQG Hà Nội Vào hồi ngày tháng năm 2009 35 ... chất thứ cấp từ thực vật lên vi khuẩn sâu thiếu Đề tài: ? ?Nghiên cứu tác dụng số chất thứ cấp từ thực vật lên vi khuẩn gây sâu Streptococcus mutans? ?? nằm xu nghiên cứu chung giới Vi? ??t Nam .Vi? ??c...ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN NGUYỄN QUANG HUY NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CỦA MỘT SỐ CHẤT THỨ CẤP TỪ THỰC VẬT LÊN VI KHUẨN GÂY SÂU RĂNG STREPTOCOCCUS MUTANS Mã số LUẬN VĂN TIẾN SĨ SINH. .. tính chất gây sâu vi khuẩn  Phân lập số chủng vi khuẩn Streptococcus mutans từ bệnh phẩm người Vi? ??t Nam bị sâu bước đầu nghiên cứu tác dụng số chất thứ cấp từ thực vật thu lên số q trình sinh